WRKY轉(zhuǎn)錄因子的研究進展

張凡 尹俊龍 郭瑛琪 岳艷玲

（1. 云南農(nóng)業(yè)大學園林園藝學院，昆明 650201；2. 中國科學院昆明動物研究所，昆明 650000）

植物在整個發(fā)育時期都會受到生物和非生物脅迫。生物脅迫包括來自病原菌、真菌、病毒和卵菌的攻擊。非生物脅迫包括干旱、土壤鹽漬化、重金屬、熱、冷、輻射和氧化應(yīng)激。適應(yīng)這些壓力和對各種環(huán)境脅迫的響應(yīng)對于植物的生存和延續(xù)是關(guān)鍵的。許多轉(zhuǎn)錄因子家族如WRKY、AP2/ ERF和NAC都是植物所特有的，它們在植物的調(diào)節(jié)控制中起著重要而獨特的作用［1］。植物所特有的WRKY轉(zhuǎn)錄因子是最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一，WRKY轉(zhuǎn)錄因子是一類DNA結(jié)合蛋白，主要存在于植物中，參與植物的各個生理過程，涉及生長，發(fā)育和自我應(yīng)激信號傳導(dǎo)或與不同的基因和轉(zhuǎn)錄因子交叉調(diào)節(jié)。這些WRKY轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域被命名為WRKY結(jié)構(gòu)域，其具有不變的WRKYGQK序列和CX4-5CX22-23HXH鋅指結(jié)構(gòu)［2］。WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族的第一個成員——SPF1是從甘薯中分離出來的［3］。在其他植物物種中，特別是模型植物-擬南芥，通過對其進行全基因組測序能夠檢測出更多的WRKY轉(zhuǎn)錄因子。當植物受到各種脅迫或防御信號時，一些WRKY 轉(zhuǎn)錄因子的表達會被快速誘導(dǎo)，從而調(diào)控各種脅迫的網(wǎng)絡(luò)途徑。此外，WRKY 轉(zhuǎn)錄因子的表達具有快速，瞬態(tài)和組織特異性的特點。全文總結(jié)了WRKY轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點和分類、植物受到生物和非生物脅迫時，WRKY轉(zhuǎn)錄因子的功能，以及WRKY轉(zhuǎn)錄因子相應(yīng)各種脅迫時的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)；除此之外，還分析了WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和MAPK信號級聯(lián)，以及WRKY轉(zhuǎn)錄因子所特有的自我調(diào)節(jié)。以期為未來WRKY轉(zhuǎn)錄因子的研究提供理論參考和思路。

1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點和分類

WRKY 轉(zhuǎn)錄因子包含的WRKY結(jié)構(gòu)域，是具有60個氨基酸長的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，特征在于N端具有一個高度保守的WRKYGQK核心基序［3-4］。Yamasaki等［5］確定來自擬南芥 WRKY4蛋白的WRKY結(jié)構(gòu)域由四鏈β折疊組成，具有由Cys / His殘基形成的鋅指結(jié)構(gòu)。此外，在N末端β鏈中間的Gly殘基具有疏水作用，并有助于β折疊結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。含有WRKYGQK基序的β鏈與約6 bp區(qū)域接觸，其大體上與W-盒（TTGACY）的長度一致。在一些WRKY轉(zhuǎn)錄因子中，WRKY結(jié)構(gòu)域中的WRKY殘基被WRRY，WSKY，WKRY，WVKY或WKKY基序所代替［6］。在水稻方面，WRKY家族擁有19個WRKY結(jié)構(gòu)域的變體，其中WRKYGEK和WRKYGKK是最常見的兩個變體［7］。其他變體包括WRICGQK、WRMCGQK、WKKYGQK、WIKYGQK、WKRYGQK、WSKYEQK 和 WRKYSEK［7］。鋅指結(jié)構(gòu)主要有兩種類型：C2-H2（C-X4-5-C-X22-23-HXH）和C2-HC（C-X7-C-X23-HXC）［8］。

WRKY轉(zhuǎn)錄因子根據(jù)WRKY結(jié)構(gòu)域的數(shù)目和鋅指結(jié)構(gòu)的類型可分為3類。具有兩個WRKY域的屬于第I類，而具有一個WRKY域的屬于第II或第III類。第I和第II類成員所具有的鋅指結(jié)構(gòu)為C2-H2（C-X4-5-CX22-23-H-X1-H），其中X可以是任何氨基酸。第III類WRKY蛋白所含的鋅指結(jié)構(gòu)為C2-HC（C-X7-C-X23-H-X-C）［8］。該分類方法是根據(jù)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特征進行分類，不包括WRKY基因家族的進化起源和基因重復(fù)?；赪RKY結(jié)構(gòu)域的進化分析，保守域和內(nèi)含子位置，Xie和Zhang［7］提出了另一種模型，將WRKY蛋白分為5類：I類（IN末端和IC末端）、IIa+IIb類、IIc類、IId+IIe類和III類。他們根據(jù)內(nèi)含子的插入位置將WRKY 轉(zhuǎn)錄因子分為兩類［7］。第一類包括R型內(nèi)含子WRKY，其剪接位點位于2 Gs的精氨酸密碼子AGG之間。另一類包括V型內(nèi)含子WRKY，其中剪接位點位于纈氨酸密碼子前面。WRKY轉(zhuǎn)錄因子可以激活或抑制生理過程中的轉(zhuǎn)錄［6］。除了WRKY結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)構(gòu)外，大多數(shù)WRKY轉(zhuǎn)錄因子還具有核定位信號（Nuclear localization signals，NLS），絲氨酸/蘇氨酸富集區(qū)，富含谷氨酰胺的區(qū)域，富含脯氨酸的區(qū)域，激酶結(jié)構(gòu)域，TIR- NBS-LRR等結(jié)構(gòu)。這些結(jié)構(gòu)使WRKY轉(zhuǎn)錄因子擁有不同的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能［7］。

2 WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物生物脅迫中的作用

在植物受到生物脅迫時，WRKY轉(zhuǎn)錄因子會通過激活水楊酸（Salicylic acid，SA），茉莉酸（Jasmonic acid，JA）和乙烯（ET）信號通路，來改變相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平［9］，從而對不同的生物脅迫產(chǎn)生反應(yīng)。經(jīng)研究證明，WRKY轉(zhuǎn)錄因子在由幾種病原體攻擊的植物防御反應(yīng)中起重要作用。棉花基因GhWRKY39-1和GhWRKY40在煙草中的過表達可調(diào)節(jié)茄科的抗性反應(yīng)［10］。GhWRKY40還調(diào)節(jié)了植株中傷口誘導(dǎo)反應(yīng)［11］。用禾谷鐮刀菌和稻瘟病菌噴施生長2周的二穗短柄草幼苗，發(fā)現(xiàn)有15個BdWRKY基因的表達上調(diào)，而只用禾谷鐮刀菌噴灑二穗短柄草幼苗時，發(fā)現(xiàn)有包括BdWRKY8/34/50/69/70在內(nèi)的9個BdWRKY基因的表達上調(diào)［12］。在葡萄中，在遇到白腐病誘導(dǎo)的生物脅迫后，57%的WRKY基因（16個基因）的表達會發(fā)生改變［13］。通過對擬南芥WRKY8的生物功能調(diào)查表明：WRKY8可調(diào)節(jié)擬南芥對丁香假單胞菌和灰葡萄孢的敏感性［14］。進一步研究發(fā)現(xiàn)，WRKY8可調(diào)控脫落酸（Abscisic acid，ABA）和乙烯（ET）信號通路，在TMV-cg-擬南芥相互作用期間，介導(dǎo)ABA和ET信號之間的串擾，從而賦予TMC-cg抗性［15］。在敲除WRKY22的轉(zhuǎn)基因水稻中發(fā)現(xiàn)，其對稻瘟病菌的感病性增加。而WRKY22基因的過表達則增加了抗病性，說明WRKY22是水稻抗稻瘟病正調(diào)控因子［16］。TaWRKY70在小麥高溫苗木（HTSP）抗條銹菌的過程中起到一定作用，其在小麥中可誘導(dǎo)條銹病，其中可能激活SA和ET信號［17］。

大多數(shù)已知功能的WRKY轉(zhuǎn)錄因子是負調(diào)節(jié)因子，只有少數(shù)為具有正調(diào)節(jié)作用的調(diào)節(jié)因子［18-19］。在擬南芥中，AtWRKY38和AtWRKY62編碼兩種結(jié)構(gòu)相似的III類WRKY轉(zhuǎn)錄因子，對病原菌丁香假單胞菌的防御起到負調(diào)節(jié)作用。在AtWRKY38和AtWRKY62的單突變體及雙突變體中，其抗病性均得到提高［18］。而AtWRKY38或AtWRKY62的過表達則降低了抗病性［18］。在AtWRKY48過表達的轉(zhuǎn)基因植物中，其感病性增強；而在AtWRKY48功能喪失的突變體中，其對丁香假單胞菌的抗性增強［19］。這些結(jié)果表明，WRKY48對擬南芥丁香假單胞菌的基礎(chǔ)抗性具有負調(diào)節(jié)作用。對抗病原體具有正調(diào)控作用的WRKY基因可直接或間接激活抗性基因的表達［20］。WRKY 轉(zhuǎn)錄因子還參與促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，其涉及應(yīng)激誘導(dǎo)的防御反應(yīng)［21］。在擬南芥中，AtWRKY22和AtWRKY29是MAPK介導(dǎo)的針對病原體的植物防御反應(yīng)的重要組成部分。AtWRKY29在擬南芥中的瞬時表達也增強了其對根腫菌的抗性［21］。水稻轉(zhuǎn)錄因子OsWRKY45的表達下調(diào)可降低SA對真菌和細菌病原體抗性的誘導(dǎo)，而其過表達對兩種病原體都具有強烈的抗性，表明其對SA誘導(dǎo)的抗病性具有重要作用［22］。

3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物非生物脅迫中的作用

非生物脅迫，包括熱脅迫或逆溫、土壤鹽分、氧化應(yīng)激、干旱和營養(yǎng)缺乏對植物的生理和生化過程產(chǎn)生不利影響［23］。這些脅迫有時也會同時發(fā)生，不利于植物生長。這種非生物脅迫在一定程度上也會誘導(dǎo)WRKY 轉(zhuǎn)錄因子表達上調(diào)或下調(diào)并引發(fā)信號級聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，以提高植物的脅迫耐受性［23-24］。

3.1 熱應(yīng)激

熱應(yīng)激被認為是主要的非生物脅迫。極端高溫或低溫都會導(dǎo)致廣泛的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟損失。因此，制定保護植物細胞不受溫度劇烈變化造成損害的策略對于提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)是必要的［25-26］。植物在遇到熱脅迫時，WRKY轉(zhuǎn)錄因子通過調(diào)控相關(guān)基因的表達，幫助植物抵抗溫度的變化。在擬南芥中，高溫處理可抑制AtWRKY33的表達，也可誘導(dǎo)AtWRKY25和AtWRKY26 的表達［27］。AtWRKY25 和 AtWRKY26 的組成型過表達增強了抗熱應(yīng)激［27］。擬南芥AtWRKY39是第II類WRKY蛋白質(zhì)的成員，并對多種脅迫作出反應(yīng)［28］。熱處理誘導(dǎo)AtWRKY39轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄的同時，SA和JA信號通路正向共調(diào)節(jié)AtWRKY39［28］。此外，WRKY39過表達可使植物的耐熱性增強［28］。TaWRKY70不僅參與小麥高溫苗木對條銹菌的抗性，還可誘導(dǎo)小麥條銹病的發(fā)生，其中SA和ET信號可能被激活［17］。當小麥遇到高溫時，TaWRKY70的轉(zhuǎn)錄物顯著增加，且在用乙烯，水楊酸和冷（4℃）脅迫處理的植物中增加，但是在用茉莉酸甲酯（MeJA）和熱（40℃）脅迫處理的植物中則下降。TaWRKY70的沉默會導(dǎo)致植株對小麥條銹病（Pst）的敏感性增高［17］。此外，TaWRKY33轉(zhuǎn)基因株系的耐熱性也大大增強［29］。

3.2 鹽脅迫

干旱經(jīng)常會引起土壤鹽分析出，從而導(dǎo)致滲透脅迫。AtWRKY25和AtWRKY33雙突變體對NaCl具有高度敏感性，其任一基因的過表達都會賦予NaCl脅迫耐受性［27］。同樣地，菊花中的WRKY基因-DgWRKY1或DgWRKY3的過表達也提高了其的耐鹽性。在DgWRKY1或DgWRKY3過表達的轉(zhuǎn)基因煙草植物中，鹽脅迫引起的過氧化氫（H2O2）和丙二醛的積累會隨過氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD），過氧化物酶（Peroxidase，POD）和過氧化氫酶（Catalase，CAT）等抗氧化酶活性的降低而減少［30］。類似地，在OsWRKY45和OsWRKY72過表達的轉(zhuǎn)基因水稻植物中，其對干旱和鹽脅迫的耐受性也大大增加［31-32］。當OsWRKY11轉(zhuǎn)錄因子的cDNA與水稻HSP101的啟動子融合時，轉(zhuǎn)基因株系顯示出明顯的耐熱耐旱性，如植物綠色部分葉片枯萎較慢和存活率較高［33］。TaWRKY10是來自小麥的WRKY基因，其被引入并在煙草中過量表達時，煙草的干旱和鹽脅迫耐受性顯著增強。通過調(diào)節(jié)滲透平衡和脅迫相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，TaWRKY10被認為是干旱和鹽脅迫下的主要調(diào)節(jié)因子。當轉(zhuǎn)基因品系受到干旱和鹽脅迫時，脯氨酸和可溶性糖含量增加，MDA含量維持在較低水平［32］。BcWRKY46和HvWRKY38在擬南芥中組成型過表達時，賦予轉(zhuǎn)基因植物更強的干旱和鹽脅迫耐受性［34-35］。在擬南芥中ZmWRKY23的組成型表達也增強了其對鹽脅迫的耐受性［36］。GhWRKY68可以通過調(diào)節(jié)ABA含量和增強ABA相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平來介導(dǎo)鹽和干旱反應(yīng)。

3.3 氧化應(yīng)激

氧化應(yīng)激是各種其他脅迫引起的最嚴重的脅迫之一［37］。植物中主要有4種類型的活性氧：單線態(tài)氧（O2），羥自由基（OH），超氧陰離子（O2）和過氧化氫H2O2。在擬南芥中，WRKY6，WRKY8，WRKY22，WRKY30，WRKY39，WRKY48，WRKY53，WRKY75等WRKY 轉(zhuǎn)錄因子都響應(yīng)于H2O2脅迫而上調(diào)。Davletova等［38］的研究顯示，擬南芥胞漿H2O2清除酶抗壞血酸過氧化物酶1（APX1）在輕度脅迫過程中起到保護葉綠體的作用。在使用Zat12敲除擬南芥植物H2O2的情況下，研究其與Zat7，WRKY25和APX之間的表達相關(guān)性，和在未誘導(dǎo)H2O2的情況下，研究Zat7，WRKY25和APX的表達，表明Zat12在這三個基因的氧化應(yīng)激反應(yīng)中的必要性［39］。絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶（MEKK1）可以直接與WRKY53相互作用，調(diào)節(jié)參與抗氧化防御的蛋白質(zhì) 如 CAT1，CAT2和 CAT3的 表 達［40］。AtWRKY53過表達株系也對干旱脅迫具有敏感性。AtWRKY53的活化表達通過減少保衛(wèi)細胞中的H2O2含量來抑制氣孔閉合。AtWRKY53可以直接與QQS啟動子序列結(jié)合，從而導(dǎo)致淀粉代謝增強［37］。AtWRKY8通過與MAPKKKα-MEK2-WIPK信號級聯(lián)的下游基因相互作用，誘導(dǎo)對致病疫霉的抗性，從而增加H2O2的積累并最終誘導(dǎo)植物細胞凋亡［41］。在干旱，鹽，脫落酸和H2O2脅迫時，由GhWRKY68啟動子驅(qū)動的b-葡糖苷酸酶活性得到提高［42］。GhWRKY68過表達植物在干旱和鹽脅迫時，對氧化應(yīng)激的耐受性降低，這與活性氧（Reactive oxy gen species，ROS）的積累，酶活性的降低，MDA含量的升高和ROS相關(guān)基因表達的改變相關(guān)［42］。

4 WRKY轉(zhuǎn)錄因子在響應(yīng)脅迫時的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

在植物生長發(fā)育過程中，許多生長調(diào)節(jié)劑參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)的應(yīng)用。WRKY轉(zhuǎn)錄因子是這種信號網(wǎng)絡(luò)中的新興參與者。WRKY轉(zhuǎn)錄因子，其下游靶基因和上游調(diào)節(jié)劑之間的相互作用和交互作用構(gòu)成了復(fù)雜的WRKY 轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，這是研究界的新興領(lǐng)域［43-45］。

4.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的自調(diào)控

兩個靶基因啟動子和WRKY轉(zhuǎn)錄因子啟動子都存在W盒。WRKY轉(zhuǎn)錄因子通過自我調(diào)節(jié)調(diào)控其對各種壓力的防御反應(yīng)，其通過識別和結(jié)合本身目標基因中的W-box或其他WRKY轉(zhuǎn)錄因子啟動子來實現(xiàn)不同WRKY轉(zhuǎn)錄因子之間的串擾［44］。經(jīng)研究表明，石斛蘭中的PcWRKY1可以與其啟動子區(qū)域中的W-box結(jié)合，也可與PcWRKY3啟動子區(qū)域中的W-box結(jié)合［46］。具有相同結(jié)構(gòu)的AtWRKY18，AtWRKY40和AtWRKY60在物理和功能上具有相互作用，因為它們在其N端中都具有富含亮氨酸的重復(fù)［47］。在野生型擬南芥中，ABA可誘導(dǎo)AtWRKY60表達，但在AtWRKY18和AtWRKY40突變體中不表達，表明WRKY60可能是ABA信號通路中WRKY18/ WRKY40 的直接靶基因［14］。AtWRKY25，AtWRKY26和AtWRKY33也參與了熱誘導(dǎo)反應(yīng)的調(diào)節(jié)［28］。AtWRKY25與AtWRKY26和AtWRKY33在耐熱脅迫的調(diào)節(jié)中相互作用。AtWRKY33的組成型表達通過對自身活動的負反饋增強了對熱應(yīng)激的抵抗力［27］。

4.2 WRKY轉(zhuǎn)錄因子在MAPK信號級聯(lián)中的作用

絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號級聯(lián)存在于所有真核生物中，并在植物中ABA依賴性防御反應(yīng)的下游信號傳導(dǎo)中起作用［48］。它還參與了對生長發(fā)育和多種非生物和生物脅迫反應(yīng)的調(diào)控［49］。MAPK信號級聯(lián)通過多種磷酸化反應(yīng)將上游受體與下游轉(zhuǎn)錄因子連接［50-51］。在N末端區(qū)域含有保守基序的I組WRKY轉(zhuǎn)錄因子也被MAPK依賴性磷酸化活化，強調(diào)其在植物免疫中的重要性［51］。在擬南芥中，轉(zhuǎn)錄因子WRKY33在不存在病原體感染的情況下與MAP激酶4（MPK4）形成 MAMP或 PAMP 復(fù)合物［52］。該復(fù)合物取決于MPK4底物MKS1，前者會由于病原體感染而被激活并磷酸化。隨后，核內(nèi)復(fù)合物MPK4-MKS1-WRKY33被破壞，MKS1和AtWRKY33被釋放。AtWRKY33然后激活編碼抗微生物復(fù)合物合成所需酶的PAD3的表達［52］。此外，AtWRKY22和AtWRKY29是MAPK介導(dǎo)的對細菌和真菌病原體的抗性的重要組成部分。AtWRKY29同源基因在擬南芥葉中的瞬時表達，賦予其對病原體的抗性［53］。AtWRKY29同源物AtWRKY22可以識別并結(jié)合與AtWRKY29相同的啟動子，并賦予相似的功能［21］。另一個例子是OsWRKY30，它通過MAPK磷酸化級聯(lián)增強了水稻抗旱性［54］。

4.3 WRKY TFs參與植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

WRKY轉(zhuǎn)錄因子在SA和ABA介導(dǎo)的信號通路中起關(guān)鍵作用［55］。AtWRKY39可被SA或甲基茉莉酸（MeJA）誘導(dǎo)，并協(xié)同參與SA和JA信號通路［56］。AtWRKY38或AtWRKY62的過表達，可抑制SA誘導(dǎo)的防御相關(guān)基因AtPR1的表達，從而降低植物的抗病性［57］。OsWRKY45在SA介導(dǎo)的防御反應(yīng)中是關(guān)鍵的，抑制其表達將嚴重損害SA介導(dǎo)的對苯并噻二唑的抗性，而其過表達則使水稻的抗性顯著增強［58］。SA可誘導(dǎo)PtrWRKY89過表達，從而加速PR蛋白的表達，提高對楊樹黑斑病的抗性。綜上所述，WRKY轉(zhuǎn)錄因子在SA防御信號通路中具有重要作用［59］。

脫落酸也是一種植物激素，在整合各種應(yīng)激信號和控制下游應(yīng)激反應(yīng)方面發(fā)揮重要作用。一些WRKY 轉(zhuǎn)錄因子也參與ABA介導(dǎo)的應(yīng)激反應(yīng)中的信號通路。LtWRKY21激活A(yù)BA誘導(dǎo)型基因HVA22的啟動子，并與VP1和ABI5協(xié)同互作使其表達上調(diào)［60］。ChIP測定表明，WRKY57可以直接結(jié)合反應(yīng)性干燥素29A（RD29A）和9-順式環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶3（NCED3）啟動子的W-box，并啟動基因表達［61］。AtWRKY40結(jié)合多個ABA誘導(dǎo)型基因啟動子的W-box，如AtABF4、AtABI4、AtABI5、AtDREB1A、AtMYB2和AtRAB18，以抑制其表達［62］。在擬南芥ABA信號通路中，WRKY18，WRKY40和WRKY60通過與ABI4和ABI5相互作用來調(diào)控下游基因表達。其中WRKY40是負調(diào)節(jié)因子，WRKY18抑制了WRKY40誘導(dǎo)ABI4和ABI5的轉(zhuǎn)錄，而WRKY60對WRKY40具有拮抗作用［62］。在冷應(yīng)激和外源性脫落酸處理中，CsWRKY46基因表達上調(diào)，但CsWRKY46僅在細胞核中表達，并與ABI5啟動子中的W-盒相互作用。而CsWRKY46過表達的轉(zhuǎn)基因擬南芥在冷脅迫時具有較高的幼苗存活率，種子萌發(fā)期間對ABA也具有較高的敏感性［63］。CmWRKY1是從菊花中分離出來的WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族成員，通過ABA介導(dǎo)途徑在抗旱反應(yīng)中起重要作用［64］。此外，轉(zhuǎn)基因植物表現(xiàn)出抑制ABA負調(diào)控的基因表達水平，如PP2C，ABI1和ABI2，以及激活A(yù)BA正調(diào)控的基因表達水平［64］。

4.4 其他調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

IId類WRKY轉(zhuǎn)錄因子含有CAT結(jié)合結(jié)構(gòu)域［65］，表明IId類 WRKY 轉(zhuǎn)錄因子可能受CaM和Ga2+調(diào)控［66］。類似的CAT結(jié)合結(jié)構(gòu)域也存在于擬南芥的十幾個WRKY 轉(zhuǎn)錄因子中，其也被CaM結(jié)合［66］。一組高度保守的調(diào)節(jié)蛋白14-3-3存在于所有真核生物中，通過與靶基因的相互作用，通常以磷酸化依賴性方式調(diào)節(jié)多種細胞生理事件。包括BZR1（油菜素類固醇的轉(zhuǎn)錄因子），抑制苗生長（Repression of shoot growth，RSG）和絲氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶（Serine acetyltransferase，SAT）在內(nèi)的300種擬南芥WRKY轉(zhuǎn)錄因子都是14-3-3蛋白的靶基因［67-69］。在擬南芥WRKY轉(zhuǎn)錄因子和14-3-3蛋白之間的相互作用中，應(yīng)激誘導(dǎo)的信號級聯(lián)中分子的磷酸化是必需的［70］。由于14-3-3蛋白質(zhì)二聚化，每個14-3-3二聚體可以結(jié)合兩個蛋白質(zhì)配體，磷酸化配體和其他未磷酸化的配體都通過與14-3-3二聚體的相互作用而接近。具有磷酸化結(jié)合位點的WRKY轉(zhuǎn)錄因子間接地與其他蛋白質(zhì)形成復(fù)合物，從而參與許多細胞反應(yīng)。AtWRKY6參與了植物衰老和低磷酸脅迫反應(yīng)的調(diào)控［71-72］。AtWRKY38和AtWRKY62與組蛋白脫乙酰酶19（HDA19）的相互作用，可以通過維持組蛋白尾部的乙?；絹碚{(diào)控植物對非生物脅迫的基礎(chǔ)防御反應(yīng)［18］。除了WRKY轉(zhuǎn)錄因子之外，還有其他轉(zhuǎn)錄因子以其他方式響應(yīng)應(yīng)激反應(yīng)。質(zhì)膜定位的NTL6蛋白可以轉(zhuǎn)位到細胞核調(diào)控目標基因如miR（COR15a）和 PR 基因［73］。

5 展望

WRKYs是高等植物中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族（TFs）之一，在植物對生物和非生物脅迫的反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的WRKY 轉(zhuǎn)錄因子是否都對植物的生理存在作用，其功能是否存在重復(fù)，以及WRKY轉(zhuǎn)錄因子自我調(diào)節(jié)模式和涉及WRKY轉(zhuǎn)錄因子的信號傳導(dǎo)途徑之間的串擾機制尚不清楚，仍需進一步的研究證實和完善。而基因組和轉(zhuǎn)錄組學的研究有助于了解不同植物中WRKY轉(zhuǎn)錄因子的整個基因組學，有助于揭示W(wǎng)RKR轉(zhuǎn)錄因子在植物脅迫反應(yīng)中的作用方式。此外，在不久的將來探索越來越多的信息時，與WRKY轉(zhuǎn)錄因子及其目標以及其他轉(zhuǎn)錄因子相結(jié)合的協(xié)同應(yīng)對機制將更為有趣。

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