亞麻籽油和豆油替代魚油對(duì)大黃魚肝臟和肌肉脂肪酸組成及Δ6Fad基因表達(dá)的影響

李經(jīng)奇　李學(xué)山　姬仁磊　徐　瑋　麥康森　艾慶輝

(中國海洋大學(xué)教育部海水養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 農(nóng)業(yè)部海水養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 青島 266003)

長鏈多不飽和脂肪酸(Long chain-polyunsaturated fatty acid; LC-PUFA)如DHA (22：3n-6)和EPA(20：3n-5)已被證實(shí)在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、心腦血管疾病和抗炎等生理過程中發(fā)揮著重要的作用[1—7], 目前脊椎動(dòng)物獲得LC-PUFA的途徑有2種方式, 一是從直接從食物中攝取, 二是以18碳鏈的不飽和脂肪酸(如亞油酸18：2n-6和亞麻酸18：3n-3)為前體通過一系列去飽和及延長反應(yīng)自身生物合成[6]。對(duì)于魚類, 尤其是海水魚類, 從食物中獲取LC-PUFA是其滿足自身生理需求的重要途徑。魚油中富含HUFA,是水產(chǎn)飼料中重要的脂肪源, 但隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展和魚油資源的短缺, 不平衡的供需關(guān)系導(dǎo)致產(chǎn)量高、價(jià)格相對(duì)低廉的植物油逐漸替代魚油成為飼料中的主要脂肪源。與淡水魚不同, 海水魚需要從食物中獲取外源LC-PUFA以滿足其正常生長、存活和生理功能的需要[8,9], 表明了海水魚類合成LC-PUFA的能力較弱[10,11]。由于植物油不含有EPA和DHA, 當(dāng)植物油高比例替代魚油, 會(huì)導(dǎo)致海水魚無法獲得足夠的LC-PUFA, 而對(duì)其生長和代謝產(chǎn)生不利的影響。在這種情況下, 通過自身合成就成為海水魚獲得能夠滿足其生理需求的LC-PUFA的最重要的途徑。

脊椎動(dòng)物進(jìn)行LC-PUFA生物合成過程是通過脂肪酸去飽和酶(Fads)和延長酶(Elovl)催化完成的,經(jīng)過連續(xù)的去飽和及延長反應(yīng), 將亞油酸(18：2n-6)和亞麻酸(18：3n-3)合成為DHA和EPA等高不飽和脂肪酸[12]。研究表明, Δ6Fad是亞油酸(18：2n-6)和亞麻酸(18：3n-3)合成LC-PUFA過程中的限速酶[13],Δ6Fad的活性的高低決定了合成LC-PUFA能力的高低。大量的研究表明, 脂肪酸能夠調(diào)控Δ6Fad基因表達(dá)和活性。研究發(fā)現(xiàn), 鯉(Cyprinus carpio)細(xì)胞培養(yǎng)過程中缺乏PUFA, 會(huì)促進(jìn)PUFA的合成[14], 植物油替代魚油也會(huì)造成大西洋鮭(Salmo salar)肝臟和腸的Δ6Fad基因的表達(dá)量上調(diào), 同時(shí)也增強(qiáng)了其自身合成LC-PUFA的能力[15—17], 董小敬[18]對(duì)大黃魚、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)和鱸(Lateolabrax japonicus)的研究表明混合植物油逐漸替代魚油上調(diào)了Δ6Fad基因的表達(dá)量。

大黃魚(Larimichthys crocea)是目前我國產(chǎn)量最大的海水養(yǎng)殖魚類, 具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值, 但植物油高比例替代魚油的配合飼料的使用導(dǎo)致了魚體中的LC-PUFA含量下降, 營養(yǎng)品質(zhì)下降。本實(shí)驗(yàn)旨在探究用富含亞油酸的豆油和富含亞麻酸的亞麻籽油替代魚油對(duì)大黃魚肝臟和肌肉中脂肪酸組成和Δ6Fad基因表達(dá)的影響, 以期為提高海水魚的LC-PUFA合成能力提供理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1　實(shí)驗(yàn)飼料

以酪蛋白和明膠為主要蛋白源, 亞麻籽油和豆油完全替代魚油, 制成3種等氮等脂的精制飼料, 分別以FO、LO和SO表示(表1、表2)。原料粉碎后過80目篩, 梯度混合均勻, 混勻后與卵磷脂和油源充分混合, 添加適量的水, 混合并過40目篩, 充分混勻后上機(jī)制粒, 恒溫風(fēng)箱55℃烘干10h, 待冷卻后置于-20℃保存待用。

1.2　養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)和樣品采集

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在福建省寧德市國家級(jí)大黃魚良種場所屬的海水浮動(dòng)網(wǎng)箱(2 m×2 m×2.5 m)中進(jìn)行, 為期10周, 實(shí)驗(yàn)開始前, 實(shí)驗(yàn)用魚被暫養(yǎng)(2周)在網(wǎng)箱(4 m×4 m×2.5 m)中, 暫養(yǎng)期間投喂對(duì)照組飼料, 每天飽食投喂兩次(6：00和17：00), 使之適應(yīng)養(yǎng)殖環(huán)境和飼料。實(shí)驗(yàn)開始前, 將魚饑餓24h, 然后用MS-222(100 mg/L)將魚麻醉, 選擇規(guī)格均勻體表無損傷的魚[平均體重(15.42±0.01) g], 隨機(jī)分配到12個(gè)網(wǎng)箱中, 每個(gè)網(wǎng)箱放入大黃魚120尾, 每個(gè)處理4個(gè)重復(fù), 每天記錄水溫和水質(zhì)指標(biāo)以及死魚的重量和數(shù)量。實(shí)驗(yàn)期間水溫在24—28℃, 鹽度在26‰—29‰,pH 7.4—7.8, 溶解氧在6—7 mg/L。

在樣品采集前, 所有實(shí)驗(yàn)用魚饑餓24h, 用MS-222 (100 mg/L)將魚麻醉, 對(duì)每個(gè)網(wǎng)箱中的魚進(jìn)行稱重計(jì)數(shù), 從每個(gè)網(wǎng)箱中隨機(jī)挑選6尾魚, 靜脈取血后于冰上解剖取出肝臟和肌肉樣品放入1.5 mL的無RNA酶的離心管, 并迅速放到液氮中, 最后轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱保存, 用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。3尾魚的組織樣品用于Δ6Fad mRNA表達(dá)量的檢測, 另外3尾魚的組織樣品用于脂肪酸的檢測。

1.3　脂肪酸的提取和分析

脂肪酸樣品處理使用HCl-甲醇法, 具體步驟參照李松林[20]：(1) 取濕重1 g左右組織樣品, 剪碎并放入10 mL離心管中, 于冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥過夜; (2) 配制1 N的KOH-甲醇溶液和3N的HCl-甲醇溶液。(3) 取100 mg冷凍干燥后的組織樣品放入10 mL的脂肪酸處理專用玻璃管中, 加入3 mL KOH-甲醇溶液, 密封, 78℃水浴20min, 冷卻至室溫, 然后加入3 mL的HCl-甲醇溶液, 密封, 78℃水浴20min, 冷卻至室溫, 然后加入1 mL的色譜級(jí)正己烷, 稍振蕩, 于暗處密封放置過夜。(4) 加入1 mL的水使分層, 小心取上清于2 mL進(jìn)樣瓶中, 用于保存或直接用于檢測。

脂肪酸的檢測使用HP6890氣相色譜儀(Aligents Technologies)進(jìn)行檢測, 色譜柱為石英毛細(xì)管柱(Hewlett Packard, Palo Alto, CA), 火焰電離檢測器進(jìn)行檢測, 按照如下程序升溫; 柱溫首先升溫至150℃, 1min, 然后以15℃/min升至200℃, 之后以2℃/min升至250℃。

表1　實(shí)驗(yàn)飼料配方以及化學(xué)組成(%干物質(zhì))Tab. 1　Formulation and chemical proximate composition of the experimental diets (% dry matter)

1.4　cDNA合成和實(shí)時(shí)熒光定量PCR

組織樣品在液氮中研磨后, 用Trizol法提取mRNA, 用NanoDrop-2000光譜儀(Thermo SCIENTIFIC, USA)測定mRNA的濃度和質(zhì)量, 1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測mRNA的完整性。用Prime ScriptTMRT試劑盒(TaKaRa, Japan)將提取的mRNA轉(zhuǎn)錄成cDNA。其中： 12.5 μL 2×SYBR Premix Ex TaqTMII, 1 μL上游引物(F： TTCGCTTCCTCTGCT GCTATG)(10 μmol/L), 1 μL下游引物(R： CCAGT CACGGTGCTTCTCG)(10 μmol/L), 1 μL cDNA(稀釋到80 ng/μL), 9.5 μL的雙蒸水, PCR的反應(yīng)條件為： 95℃ 2min, 1個(gè)循環(huán); 95℃ 15s, 60℃ 15s, 72℃20s, 40個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)在Eppendorf Mastercycler gradient (Eppendorf, German)中進(jìn)行。

表2　飼料脂肪酸組成(%總脂肪酸)Tab. 2　Diet fatty acids composition (% total fatty acid)

1.5　數(shù)據(jù)處理分析

實(shí)時(shí)熒光定量PCR的數(shù)據(jù)處理采用2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算(ΔΔCt=ΔCt目的基因-ΔCt內(nèi)參基因)。結(jié)果使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA), 當(dāng)結(jié)果達(dá)到顯著差異(P＜0.05)時(shí), 采用Tukey’s檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較或t-test, 數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2　結(jié)果

2.1　亞麻籽油和豆油對(duì)大黃魚生長和飼料效率的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 亞麻籽油和豆油替代魚油顯著降低了大黃魚的增重率、飼料效率和特定生長率(P＜0.05), 在亞麻籽油和豆油組之間差異不顯著(P＞0.05)。亞麻籽油和豆油全替代魚油降低了大黃魚的存活率, 豆油組的存活率顯著低于魚油組(P＜0.05), 亞麻籽油組與魚油組和豆油組沒有顯著差異(P＞0.05)。亞麻籽油和豆油替代魚油造成肝體指數(shù)和臟體指數(shù)有上升的趨勢(shì), 但各組間差異不顯著(P＞0.05)(表3)。

2.2　大黃魚肝臟和肌肉中脂肪酸組成

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 亞麻籽油和豆油替代魚油顯著改變了大黃魚肝臟和肌肉中的脂肪酸組成。在大黃魚的肝臟中, 植物油替代魚油顯著降低了飽和脂肪酸(SFA)、20：4n-6(ARA)和n-3LC-PUFA的相對(duì)含量(P＜0.05), 但在植物油替代組中沒有出現(xiàn)顯著差異(P＞0.05)。在亞麻籽油替代組(LO)中, 18：3n-3(LNA)的相對(duì)含量顯著高于魚油組(FO)和豆油組(SO)(P＜0.05), 而FO組和SO組之間差異不顯著(P＞0.05)。18：2n-6(LA)和n-6PUFA的相對(duì)含量在豆油(SO)組中顯著高于FO組和LO組(P＜0.05), FO組顯著低于LO組(P＜0.05)。單不飽和脂肪酸在各組間沒有顯著差異(P＞0.05)。在大黃魚肌肉中, LO組和SO組的SFA和n-3LC-PUFA顯著低于FO組(P＜0.05), ARA相對(duì)含量在SO組顯著低于FO組(P＜0.05), LO組和其他2組沒有顯著差異(P＞0.05)。18：2n-6和n-6PUFA在不同處理的肌肉中的相對(duì)含量在豆油(SO)組中顯著高于FO組和LO組(P＜0.05),FO組顯著低于LO組(P＜0.05)。18：3n-3的相對(duì)含量在FO組中顯著低于豆油組和亞麻籽油組(P＜0.05),豆油組顯著低于亞麻籽油組(P＜0.05)(表4)。

表3　飼料脂肪酸對(duì)大黃魚生長和飼料利用的影響Tab. 3　Effects of dietary lipids on growth and feed utilization of large yellow croaker

對(duì)相同處理組中的肝臟和肌肉PUFA相對(duì)含量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn), 在各處理組中, 肌肉中的ARA、EPA和DHA的相對(duì)含量顯著高于肝臟(P＜0.05)。在魚油組中, 肌肉的LNA和LA的相對(duì)含量要高于肝臟(P＞0.05), 但在亞麻籽油組和豆油組中, 肌肉中的LNA和LA的相對(duì)含量要低于肝臟(P＞0.05)(圖1)。

2.3　亞麻籽油和豆油替代魚油對(duì)Δ6Fad基因表達(dá)量的影響

亞麻籽油和豆油顯著上調(diào)了大黃魚肝臟和肌肉中Δ6Fad的基因表達(dá)量(P＜0.05), 其表達(dá)量在肝臟中分別升高了7.6和6.5倍, 在肌肉中分別上升了2.2和2.8倍。在亞麻籽油和豆油組中沒有顯著差異(P＞0.05)(圖2)。

3　討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 經(jīng)過10周的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)后, 亞麻籽油組和豆油組的大黃魚的增重率和特定生長率顯著降低, 這表明當(dāng)亞麻籽油和豆油完全替代魚油后, 大黃魚不能很好的利用亞麻籽油和豆油, 從而對(duì)其生長產(chǎn)生了不利影響。這與在泥鰍( Misgurnus anguillicaudatus )的研究結(jié)果[21]不同。高堅(jiān)等[21]的研究結(jié)果表明, 當(dāng)用魚油、大豆油、玉米油、花生油和棕櫚油飼料飼喂泥鰍40d后, 其生長性能沒有顯著差異。彭墨等[22]的研究表明, 當(dāng)菜籽油全替代魚油后, 經(jīng)過92d飼喂, 大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)幼魚的終末體重和特定生長率顯著降低。出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是因?yàn)槟圉q是淡水魚類, 大黃魚是海水魚類, 而淡水魚類利用植物油的能力要強(qiáng)于海水魚類[23]。

表4　飼料脂肪源對(duì)大黃魚肝臟和肌肉脂肪酸組成的影響(%總脂肪酸)Tab. 4　Effect of dietary lipids on liver and muscle fatty acid composition of large yellow croaker (% total fatty acid)

圖1　相同處理組中大黃魚肝臟、肌肉及飼料的脂肪酸組成(%總脂肪酸)Fig. 1　Fatty acid composition in liver, muscle of large yellow croaker under each diet (% total fatty acid)

圖2　大黃魚肝臟和肌肉的Δ6Fad基因的表達(dá)量Fig. 2　The gene expression of Δ6Fad of large yellow croaker

植物油替代魚油會(huì)影響魚體脂肪酸組成[24], 進(jìn)而影響魚體的品質(zhì)[25]和相關(guān)代謝。植物油由于不含LC-PUFA, 當(dāng)植物油替代魚油時(shí)會(huì)造成魚體LCPUFA的含量下降和LC-PUFA相關(guān)代謝基因的變化[26]。對(duì)大黃魚、虹鱒和鱸的研究表明[18], 隨著植物油替代魚油的比例升高, 其DHA和EPA的相對(duì)含量顯著下降。對(duì)尖吻鯛(Diplodus puntazzo)[27]的研究表明, 大豆油和亞麻籽油替代魚油導(dǎo)致了肝臟中LC-PUFA相對(duì)含量的下降, 對(duì)大菱鲆[22]、赤點(diǎn)石斑魚(Epinephelus akaara)[28]和大西洋鮭(Salmo salar)[29]的研究也具有同樣的結(jié)果。本研究通過使用亞麻籽油和豆油完全替代魚油制備的精制飼料飼喂大黃魚, 結(jié)果發(fā)現(xiàn), 亞麻籽油和豆油替代魚油降低了大黃魚肝臟和肌肉的ARA、EPA和DHA的相對(duì)含量, LNA和LA相對(duì)含量升高, 組織脂肪酸組成反映了飼料脂肪酸組成, 與在尖吻鯛[27]、虹鱒[30]和大黃魚[19]的結(jié)果一致。

對(duì)肝臟和肌肉在相同處理組中的脂肪酸組成進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn), 在所有處理組中, ARA、EPA和DHA在肌肉中的相對(duì)含量均顯著高于肝臟, 但在亞麻籽油組和豆油組中肌肉的LA和LNA的相對(duì)含量均低于肝臟, 這與鱸的研究結(jié)果相一致[23]。造成這種現(xiàn)象的原因可能是, 一方面, 肝臟合成的LCPUFA可能通過脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)途徑轉(zhuǎn)運(yùn)至肌肉中; 一方面, 肌肉可能利用LNA和LA來合成LC-PUFA; 另一方面, 肌肉組織是氧化供能的主要組織, 而LNA被證明主要被用來進(jìn)行β氧化供能[31]。

魚類由于缺乏Δ12和Δ15去飽和酶, 所以無法從頭合成LC-PUFA, 只能通過攝食飼料中的亞麻酸和亞油酸進(jìn)行體內(nèi)合成LC-PUFA, Δ6Fad是LCPUFA合成過程中的關(guān)鍵酶, 飼料中脂肪酸的組成變化會(huì)對(duì)其基因表達(dá)產(chǎn)生影響, 魚油富含LC-PUFA,如DHA和EPA, LC-PUFA會(huì)抑制Δ6Fad基因的表達(dá)[32], 相應(yīng)的, 用不含LC-PUFA的植物油替代魚油會(huì)導(dǎo)致飼料中LC-PUFA含量下降, 則會(huì)上調(diào)Δ6Fad基因的表達(dá)[16—18,26]。本研究發(fā)現(xiàn)大黃魚肝臟和肌肉的Δ6Fad基因的表達(dá)量在豆油組和亞麻籽油組顯著升高, 這結(jié)果與金頭鯛(Sparus aurata)[33]和大西洋鮭[26,34]的結(jié)果相同, 發(fā)現(xiàn)隨著植物油替代魚油會(huì)上調(diào)Δ6Fad基因。這表明了飼料脂肪酸的組成的變化會(huì)影響機(jī)體合成LC-PUFA的能力。對(duì)大黃魚的肝臟和肌肉的Δ6Fad基因表達(dá)量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn), 植物油替代魚油后, 肝臟中Δ6Fad基因轉(zhuǎn)錄水平的變化較肌肉更為顯著, 表明了與肌肉相比, 肝臟能夠更敏感的響應(yīng)飼料脂肪酸, 可能是更為重要的LC-PUFA合成的部位。

綜上所述, 豆油和亞麻籽油替代魚油對(duì)魚類的生長產(chǎn)生了不利影響, 改變了魚體肌肉和肝臟脂肪酸組成, 降低了LC-PUFA的含量, 但顯著上調(diào)了Δ6Fad基因的表達(dá), 與肌肉組織相比, 肝臟中Δ6Fad基因能夠更顯著的響應(yīng)組織中脂肪酸的變化。

參考文獻(xiàn)：

[1]Norman S J, Burton L, Hee-Yong K, et al. Mechanisms of action of docosahexaenoic acid in the nervous system[J]. Lipids, 2001, 36(9)： 945—959

[2]Ans E, Saskia O, Peter L Z, et al. Effects of n-3 long chain polyunsaturated fatty acid supplementation on visual and cognitive development throughout childhood： a review of human studies [J]. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 2007, 76： 189—203

[3]Torrejon C, Jung U J, Deckelbaum R. n-3 fatty acids and cardiovascular disease： actions and molecular mechanisms [J]. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids,2007, 77： 319—326

[4]A Leaf, Kang J X. Prevention of cardiac sudden death by N-3 fatty acids： a review of the evidence [J]. Journal of Internal Medicine, 1996, 240(1)： 5—12

[5]Rebecca W, R Paul R, Gerald F F. Fatty acids from fish：the anti-inflammatory potential of long-chain omega-3 fatty acids [J]. Nutrition Reviews, 2010, 68(5)： 280—289

[6]Philip C C. Immunomodulation by omega-3 fatty acids[J]. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 2007,77(5-6)： 327—335

[7]Turchini G M, Torstensen B E, Ng W K. Fish oil replacement in finfish nutrition [J]. Reviews in Aquaculture,2009, 1(1)： 10—57

[8]Izquierdo M S, Watanabe T, Takeuchi T, et al. Requirement of larval red seabream Pagrus major for essential fatty acids [J]. NIppon suisan Gakkaishi, 1989, 55(5)：859—867

[9]Lee S M, Cho S. Influences of dietary fatty acid profile on growth, body composition and blood chemistry in juvenile fat cod (Hexagrammos otakii Jordan et Starks) [J].Aquaculture Nutrition, 2009, 15(1)： 19—28

[10]Kanazawa A, Teshima S I, Ono K. Relationship between essential fatty acid requirements of aquatic animals and the capacity for bioconversion of linolenic acid to highly unsaturated fatty acids [J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Comparative Biochemistry, 1979, 63：295—298

[11]Tocher D R, Bell J G, McGhee F, et al. Effects of dietary lipid level and vegetable oil on fatty acid metabolism in Atlantic salmon (Salmo salar L.) over the whole production cycle [J]. Fish Physiology and Biochemistry, 2003,29(3)： 193—209

[12]Li S L, Monroig ó, Navarro J C, et al. Molecular cloning and functional characterization of a putative Elovl4 gene and its expression in response to dietary fatty acid profiles in orange-spotted grouper Epinephelus coioides [J].Aquaculture Research, 2015： 1—16002E

[13]Takayuki Y N, He W S, Tang C R, et al. The E-box like sterol regulatory element mediates the suppression of human D-6 desaturase gene by highly unsaturated fatty acids [J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2002, 296： 111—117

[14]Tocher D R, Dick J R. Polyunsaturated fatty acid metabolism in a cell culture model of essential fatty acid deficiency in a freshwater fish, carp (Cyprinus carpio) [J].Fish Physiology and Biochemistry, 1999, 21(3)： 257—267

[15]Tocher D R, Bell J G, MacGlaughlin P, et al. Hepatocyte fatty acid desaturation and polyunsaturated fatty acid composition of liver in salmonids： effects of dietary vegetable oil [J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology, 2001,130(2)： 257—270

[16]Leaver M J, Villeneuve L AN, Obach A, et al. Functional genomics reveals increases in cholesterol biosynthetic genes and highly unsaturated fatty acid biosynthesis after dietary substitution of fish oil with vegetable oils in Atlantic salmon (Salmo salar) [J]. BMC Genomics, 2008,9(1)： 1

[17]Zheng X Z, Tocher D R, Dickson C A, et al. Highly un-saturated fatty acid synthesis in vertebrates： New Insights with the Cloning and Characterization of a Δ6 Desaturase of Atlantic Salmon [J]. Lipids, 2005, 40(1)： 13—24

[18]Dong X J. Comparison study on regulation of Δ6 fatty acyl desaturase among rainbow trout, Japanese seabass and large yellow croaker [D]. Thesis for Doctor of Science. Ocean University of China, Qingdao. 2015 [董小敬.虹鱒、花鱸和大黃魚Δ6脂肪酸去飽和酶調(diào)控差異的研究. 博士學(xué)位論文, 中國海洋大學(xué), 青島. 2015]

[19]Yan J. Effects of dietary lipid levels and types of fatty acids on lipid deposition in large yellow croaker(Larmichthys crocea) [D]. Thesis for Doctor of Science.Ocean University of China, Qingdao. 2015 [嚴(yán)晶. 飼料脂肪水平和脂肪酸種類對(duì)大黃魚脂肪沉積的影響. 博士學(xué)位論文, 中國海洋大學(xué), 青島. 2015]

[20]Li S L. The regulation of n-3LC-PUFA on lipid deposition and the expression of fatty acid elongases of large yellow croaker (Larimichthys crocea) [D]. Thesis for Doctor of Science. Ocean University of China, Qingdao.2016 [李松林. n-3 LC-PUFA對(duì)大黃魚肝脂沉積及脂肪酸延長酶表達(dá)的調(diào)控. 博士學(xué)位論文, 中國海洋大學(xué),青島. 2016]

[21]Gao J, Li Y, Ye W Z, et al. The growth performance and the fatty acid composition of dojo loach Misgurnus anguillicaudatus fry fed with different lipid sources [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2016, 40(1)： 1—9 [高堅(jiān), 李洋,葉偉釗, 等. 不同脂肪源對(duì)泥鰍的生長性能及脂肪酸組成的影響. 水生生物學(xué)報(bào), 2016, 40(1)： 1—9]

[22]Peng M, Xu W, Mai K S, et al. Growth, fatty acid composition and lipid deposition of juvenile turbot (Scophthalmus maximus L.) fed diets with fish oil replacement by rapeseed oil [J]. Chinese Journal of Animal Nutrition,2015, 27(3)： 756—765 [ 菜籽油替代魚油對(duì)大菱鲆幼魚生長、脂肪酸組成及脂沉積的影響. 動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2015, 27(3)： 756—765]

[23]Luo L, Xing We, Li T L, et al. Growth performance, fatty acid composition, and lipid metabolism in juvenile hybrid sturgeon (Acipenser schrenckⅡ brandt♀×A. Baeri brandt♂) fed diets of fish oil substituted by various levels of linseed oil [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2017,41(5)： 1010—1019 [羅琳, 邢薇, 李鐵梁, 等. 亞麻油替代魚油對(duì)雜交鱘生長、脂肪酸組成及脂肪代謝的影響.水生生物學(xué)報(bào), 2017, 41(5)： 1010—1019]

[24]Xu H G, Dong X J, Ai Q H, et al. Regulation of tissue LC-PUFA contents, Δ6 fatty acyl desaturase (FADS2)gene expression and the methylation of the putative FADS2 gene promoter by different dietary fatty acid profiles in Japanese seabass (Lateolabrax japonicus) [J].PloS One, 2014, 9(1)： e87726

[25]Meng Y Q, Miao X, Sun R J, et al. Potential risks of high level replacement of dietary fish meal by canola meal on large yellow croaker Larimichthys crocea (RICHARDSON, 1846)： growth, health and nutritional values as a food fish [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2017, 41(1)：127—138 [孟玉瓊, 苗新, 孫瑞健, 等. 雙低菜粕高水平替代飼料魚粉對(duì)大黃魚潛在風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估： 生長、健康和營養(yǎng)價(jià)值. 水生生物學(xué)報(bào), 2017, 41(1)： 127—138]

[26]Zheng X Z, Torstensen B D, Dick J, et al. Environmental and dietary influences on highly unsaturated fatty acid biosynthesis and expression of fatty acyl desaturase and elongase genes in liver of Atlantic salmon (Salmo salar)[J]. Biochimica Et Biophysica Acta, 2005, 1734(1734)：13—24

[27]Piedecausa M A, Mazón M J, García B G, et al. Effects of total replacement of fish oil by vegetable oils in the diets of sharpsnout seabream (Diplodus puntazzo) [J]. Aquaculture, 2007, 263(1—4)： 211—219

[28]Wang J T, Jiang Y D, Yang Y X, et al. Effects of dietary fish oil replacement by soybean oil on growth performance, body composition and body fatty acid composition of red spotted grouper Epinephelus akaara [J].Oceanologia et Limnologia Sinica, 2016, 47(3)：640—646 [王驥騰, 姜宇棟, 楊云霞, 等. 豆油替代魚油對(duì)赤點(diǎn)石斑魚(Epinephelus akaara)生長、體組成及體脂肪酸組成的影響. 海洋與湖沼, 2016, 47(3)： 640—646]

[29]Bell J G, Tocher D R, Henderson R J, et al. Altered fatty acid compositions in atlantic salmon (Salmo salar) fed diets containing linseed and rapeseed oils can be partially restored by a subsequent fish oil finishing diet [J]. The Journal of Nutrition, 2003, 133(9)： 2793—2801

[30]Turchini G M, Francis D S. Fatty acid metabolism (desaturation, elongation and beta-oxidation) in rainbow trout fed fish oil- or linseed oil-based diets [J]. British Journal of Nutrition, 2009, 102(1)： 69—81

[31]Tocher D R, Fonseca-Madrigal J, Bell J G, et al. Effects of diets containing linseed oil on fatty acid desaturation and oxidation in hepatocytes and intestinal enterocytes in Atlantic salmon (Salmo salar) [J]. Fish Physiology & Biochemistry, 2002, 26(2)： 157—170

[32]Zuo R T. Preliminary study about regulation of dietary fatty acid on immunity and fatty acid metabolism in large yellow croaker (Larmichthys crocea) [D]. Thesis for Doctor of Science. Ocean University of China, Qingdao. 2013[左然濤. 飼料脂肪酸調(diào)控大黃魚免疫力和脂肪代謝的初步研究. 博士學(xué)位論文, 中國海洋大學(xué), 青島. 2013]

[33]Izquierdo M S, Robaina L, Juárez-Carrillo E, et al. Regulation of growth, fatty acid composition and delta 6 desatu-rase expression by dietary lipids in gilthead seabream larvae (Sparus aurata) [J]. Fish Physiology and Biochemistry, 2008, 34(2)： 117—127 Kennedy S R, Leaver, M J, Campbell P J, et al. Influence

[34]of dietary oil content and conjugated linoleic acid (CLA)on lipid metabolism enzyme activities and gene expression in tissues of Atlantic salmon (Salmo salar L.) [J].Lipids, 2006, 41(5)： 423—436