• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于SRAP分子標(biāo)記的23株大球蓋菇遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析

    2018-03-29 10:27:08朱靜嫻李麗君趙淑芳陳宸姜淑霞
    山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年3期
    關(guān)鍵詞:親緣關(guān)系遺傳多樣性

    朱靜嫻 李麗君 趙淑芳 陳宸 姜淑霞

    摘要:利用相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)分子標(biāo)記對(duì)國(guó)內(nèi)外不同來源的23株大球蓋菇菌株進(jìn)行遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析,從288對(duì)引物中篩選出穩(wěn)定性好、可重復(fù)性高、多態(tài)性穩(wěn)定并能擴(kuò)增出清晰明亮條帶的38對(duì)引物。通過SRAP擴(kuò)增圖譜分析得出,以基因組DNA為模板的23株菌株擴(kuò)增片段分子量在100~2 000 bp間,共擴(kuò)增出322個(gè)位點(diǎn),其中有205個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),多態(tài)位點(diǎn)比率為63.66%;供試菌株間的遺傳相似系數(shù)為0.6646~0.9658;采用UPGMA法對(duì)擴(kuò)增圖譜進(jìn)行聚類分析,在相似水平0.84時(shí)可將23株菌株分為3個(gè)類群,第Ⅰ類群為來自國(guó)外的2株菌株;第Ⅱ類群為本實(shí)驗(yàn)室馴化篩選的3株耐高溫品種,第Ⅲ類群為國(guó)內(nèi)不同地市的18株菌株。結(jié)果表明,不同大球蓋菇菌株間存在明顯遺傳多樣性,SRAP分子標(biāo)記技術(shù)可將23株供試菌株鑒別開,且能分析出不同菌株間的親緣關(guān)系。本研究可為大球蓋菇菌株親緣關(guān)系的鑒定及新品種選育提供理論依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:大球蓋菇;SRAP分子標(biāo)記;遺傳多樣性;親緣關(guān)系

    中圖分類號(hào):S646.1+90.24文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào):A文章編號(hào):1001-4942(2018)03-0022-07

    Abstract Sequence-related amplified polymorphism (SRAP) molecular marker technique was used to study the genetic diversity and phylogenetic relationship among 23 Stropharia rugosoannulata strains collected from home and abroad. A total of 288 pairs of SRAP primers were tested, and 38 pairs could produce high-quality PCR production with good stability, repeatability and polymorphism. The analysis of SRAP amplification pattern showed that 322 bands were amplified from genomic DNA of 23 strains with the size of 100~2 000 bp, of which 205 bands were polymorphic and the percentage of polymorphic sites was 63.66%. The genetic similarity coefficient among the tested strains was ranged from 0.6646~0.9658. The cluster analysis proceeded by UPGMA method showed that 23 strains could be divided into three major groups at the similarity coefficient of 0.84. Group Ⅰ included two strains from abroad; Group Ⅱ included three high temperature resistant strains domesticated by our laboratory; Group Ⅲ were 18 strains cultivated or preserved in different cities in China. The results showed that significant genetic diversity existed among the strains. SRAP molecular marker technique could identify 23 strains clearly and analyze the phylogenetic relationship among different strains. This test provides the theoretical basis for the identification of Stropharia rugosoannulata phylogenetic relationship and new strain breeding.

    Keywords Stropharia rugosoannulata; SRAP molecular marker; Genetic diversity; Phylogenetic relationship

    大球蓋菇(Stropharia rugosoannulata Farl. ex Murrill)別名皺環(huán)球蓋菇、皺球蓋菇、酒紅球蓋菇,屬于擔(dān)子菌門,層菌綱,傘菌目,球蓋菇科,球蓋菇屬[1]。大球蓋菇是優(yōu)良的食、藥用菌,其菇體大、色艷、質(zhì)脆清香、營(yíng)養(yǎng)豐富,有預(yù)防冠心病、助消化、緩解精神疲勞等多種保健價(jià)值,是國(guó)際菇類交易市場(chǎng)上的十大菇種之一,也是聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)向發(fā)展中國(guó)家推薦栽培的食用菌之一[2]。野生大球蓋菇于20世紀(jì)初在美國(guó)首次發(fā)現(xiàn),并于1969年在德國(guó)人工馴化栽培成功,隨后波蘭、捷克斯洛伐克、匈牙利等國(guó)家相繼引種栽培。我國(guó)大球蓋菇野生資源主要分布于云南、西藏、四川、山西、新疆、遼寧、吉林等地[3]。20世紀(jì)80年代,上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所從波蘭引進(jìn)該菌種并在國(guó)內(nèi)首次試栽成功,進(jìn)而福建省三明真菌研究所對(duì)其栽培研究取得良好效益[4]。近年來,大球蓋菇在福建、浙江、陜西、河北、遼寧、山東多省以各種栽培模式迅速發(fā)展,栽培前景十分廣闊。

    SRAP分子標(biāo)記是一種基于PCR的新型標(biāo)記系統(tǒng),目前廣泛應(yīng)用于植物物種的遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析,相對(duì)于其他分子標(biāo)記方法,SRAP分子標(biāo)記在植物物種的遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析中能獲得更多的信息[5-9]。該標(biāo)記具有簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、高重復(fù)率、便于克隆目標(biāo)片段的特點(diǎn),并已被應(yīng)用于圖譜構(gòu)建性狀的標(biāo)記和遺傳多樣性分析[10]。SRAP標(biāo)記技術(shù)已在木耳、金針菇、靈芝、雞腿菇、香菇、蘑菇屬等食用菌上得到應(yīng)用[11-16]。本研究采用SRAP分子標(biāo)記,對(duì)收集到的國(guó)內(nèi)外23株大球蓋菇進(jìn)行遺傳多樣性分析,明確其菌株間的親緣關(guān)系,以期為大球蓋菇菌株資源的保護(hù)和下一步育種工作提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試菌株

    本試驗(yàn)所用的23株大球蓋菇菌株均由山東省農(nóng)業(yè)微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。具體菌株編號(hào)、名稱、來源及產(chǎn)地見表1。

    1.2 供試培養(yǎng)基

    PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,瓊脂20 g,水1 000 mL,pH值6.5。

    1.3 耐高溫大球蓋菇菌株的獲得及供試菌絲體制備

    1.3.1 耐高溫菌株的獲得 將活化好的22株備選菌株(表2)置于25℃條件下培養(yǎng)5 d后轉(zhuǎn)移至全自動(dòng)培養(yǎng)箱中,程序設(shè)置為34℃和25℃交替循環(huán),34℃持續(xù)8 h,25℃16 h,連續(xù)處理14個(gè)循環(huán)。剔除其中生長(zhǎng)緩慢、畸形的菌株,將剩余菌株轉(zhuǎn)接到新培養(yǎng)皿上,25℃培養(yǎng)5 d后,將程序設(shè)置為38℃ 6 h和25℃18 h,連續(xù)處理14個(gè)循環(huán)。再剔除表現(xiàn)不好的菌株,將程序設(shè)置為42℃ 4 h和25℃ 20 h,連續(xù)處理14個(gè)循環(huán)。選取其中生長(zhǎng)速度較快、菌絲潔白粗壯的菌株作為耐高溫備選株并通過繼代培養(yǎng)進(jìn)行耐高溫穩(wěn)定性驗(yàn)證。驗(yàn)證方法為:將篩選獲得的耐高溫備選株連續(xù)培養(yǎng)20代,分別取5、10、15、20代置于42℃條件下培養(yǎng)4 h,觀察菌絲生長(zhǎng)情況,獲得耐高溫性穩(wěn)定的菌株作為耐高溫菌株。

    1.3.2 大球蓋菇菌絲體制備 將23株大球蓋菇菌株在PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)7~10 d后,轉(zhuǎn)接到鋪有玻璃紙的新鮮PDA平板培養(yǎng)基上,25℃恒溫培養(yǎng)10 d后,分別刮取200 mg新鮮菌絲備用。

    1.4 23株大球蓋菇DNA提取、擴(kuò)增和電泳檢測(cè)

    取200 mg新鮮菌絲放入研缽,倒入液氮迅速研磨成粉末,用植物基因組DNA提取試劑盒提取DNA,經(jīng)1.0%的瓊脂糖凝膠電泳后,在凝膠成像分析系統(tǒng)中拍照。以標(biāo)準(zhǔn)DNA分子量作對(duì)照,用紫外吸收法檢測(cè)DNA濃度并稀釋成50 ng/μL,貯存于-20℃冰箱中備用。

    SRAP擴(kuò)增反應(yīng)體系:反應(yīng)體積25 μL,其中2×Tap PCR Master Mix 12.5 μL,100 μmo1/L上、下游引物各1 μL,模板為50 ng/μL DNA 1 μL,用ddH2O補(bǔ)足體積。

    SRAP擴(kuò)增基準(zhǔn)程序:94℃預(yù)變性5 min;94℃變性1 min,35℃復(fù)性1 min,72℃延伸1 min,5個(gè)循環(huán);94℃變性1 min,50℃復(fù)性1 min,72℃延伸1 min,35個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min,4℃保存。

    取擴(kuò)增產(chǎn)物7 μL進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳,同時(shí)以DL 2000 DNA Marker作為分子量標(biāo)準(zhǔn),100 V恒壓電泳40~60 min,通過紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察并拍照。

    1.5 SRAP引物及反應(yīng)條件篩選

    采用Li等[17]2001年發(fā)表的引物,由鉑尚生物技術(shù)(上海)有限公司合成(表3)。正向引物16條,反向引物18條,采用Me-Em的組合表示方式共得到288對(duì)引物。選用3株大球蓋菇DNA對(duì)288對(duì)引物進(jìn)行初步篩選,將重復(fù)性好、強(qiáng)度較高、清晰可辨無爭(zhēng)議、能體現(xiàn)菌株間差異的條帶確認(rèn)為標(biāo)記條帶,進(jìn)行相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)和分析以篩選出最佳組合引物。

    SRAP-PCR反應(yīng)體系退火溫度的優(yōu)化:選用編號(hào)為1、5和14菌株的DNA作為模板,用2對(duì)引物(Me5、Em4和Me7、Em9)進(jìn)行擴(kuò)增,對(duì)退火溫度進(jìn)行篩選,溫度設(shè)置為32、32.1、32.4、32.8、33.2、33.7、34.2、34.7、35.2℃、35.6、35.9、36℃。溫度確定后另選3株大球蓋菇DNA模板對(duì)SRAP-PCR體系進(jìn)行驗(yàn)證。

    1.6 SRAP電泳結(jié)果統(tǒng)計(jì)及處理分析

    將相同引物 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物中電泳遷移率一致的標(biāo)記條帶確認(rèn)為同一條帶,擴(kuò)增陽性記錄為“ 1”,擴(kuò)增陰性記錄為“ 0”,把圖形資料轉(zhuǎn)換成數(shù)據(jù)資料,統(tǒng)計(jì)形成“ 0/1”表型數(shù)據(jù)矩陣,根據(jù)該數(shù)據(jù)矩陣統(tǒng)計(jì)算出多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)、擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)和多態(tài)位點(diǎn)比率 P(Percentage of polymorphic sites),估算遺傳分化的水平。

    計(jì)算公式:P=k/n×100%。

    式中P為多態(tài)位點(diǎn)比率,k為多態(tài)性位點(diǎn)數(shù),n為擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)。

    利用POPGENE 1.32軟件計(jì)算各菌株間的Neis遺傳相似系數(shù)(GS)、遺傳距離(GD)、Neis遺傳多樣性指數(shù)(H)和Shannon信息指數(shù)(I),并利用NTSYS-PC軟件進(jìn)行菌株間的非加權(quán)組平均法(UPGMA)聚類分析,生成遺傳距離聚類圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 SRAP引物篩選及其擴(kuò)增結(jié)果分析

    288對(duì)引物中共篩選出38對(duì)重復(fù)性好、多態(tài)性比率高的引物。利用38對(duì)引物對(duì)23株大球蓋菇基因組DNA進(jìn)行SRAP擴(kuò)增并電泳檢測(cè),共擴(kuò)增出322個(gè)位點(diǎn),其條帶分子量大小在100~2 000 bp之間。其中多態(tài)性位點(diǎn)205個(gè),多態(tài)位點(diǎn)比率為63.66%。38對(duì)引物擴(kuò)增的位點(diǎn)數(shù)從4~12個(gè)不等,平均每對(duì)引物擴(kuò)增出8.47個(gè)位點(diǎn),平均多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)為5.39個(gè)(表4)。引物Me5-Em1對(duì)23株大球蓋菇菌株的SRAP圖譜見圖1。

    基于23株供試菌株的SRAP擴(kuò)增多態(tài)性,利用POPGENE 1.32軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行各項(xiàng)參數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明,樣品間的平均Neis遺傳多樣性指數(shù)為0.1616,平均Shannon指數(shù)為0.2577,說明供試菌株間的遺傳多樣性較高,遺傳差異性較大。

    2.2 聚類分析

    由圖2可以看出23株大球蓋菇菌株兩兩間的相似性系數(shù)范圍為0.6646~0.9658。菌株編號(hào)6與7的相似性系數(shù)為0.9658,親緣關(guān)系最近,菌株編號(hào)2與19的相似性系數(shù)為0.6646,親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。

    從圖3可以看出,23株供試菌株均可以鑒別開。當(dāng)遺傳相似系數(shù)為0.84時(shí),23株大球蓋菇供試菌株被分為3個(gè)類群:第Ⅰ類群為來源于國(guó)外的編號(hào)為1號(hào)和2號(hào)的菌株;第Ⅱ類群為本實(shí)驗(yàn)室耐高溫馴化后篩選的3株菌株(菌株編號(hào)為18、19和20);第Ⅲ類為來自國(guó)內(nèi)13個(gè)不同地市的18株菌株。其中,第Ⅱ類群的3株菌株之間的親緣關(guān)系與其原發(fā)菌株(菌株編號(hào)為15、16和17)之間的親緣關(guān)系相似,即原發(fā)菌株16和17聚在一支,與15較遠(yuǎn),耐高溫菌株中的19和20同樣聚在一起,與18較遠(yuǎn);第Ⅲ類群中,源自云南子實(shí)體顏色為黃色的菌株(菌株編號(hào)為21、22、23)聚在一起,來自山東濟(jì)寧的4株菌株(菌株編號(hào)為14、15、16、17)聚在一起;黑龍江(菌株編號(hào)為9、13)、遼寧(菌株編號(hào)為5、8、10)、山東濟(jì)南(菌株編號(hào)為6)、山東臨沂(菌株編號(hào)為4)、山東泰安(菌株編號(hào)為7)的菌株與三明真菌研究所保存的菌種(菌株編號(hào)為11)遺傳距離較近。

    結(jié)果表明:(1)本試驗(yàn)中多個(gè)地理位置相距較近的菌株聚在一進(jìn)化支上,說明供試菌株間的遺傳相似性與它們的地理位置有一定的相關(guān)性;部分地理位置與氣候條件相差較大的栽培菌株也有聚在一個(gè)進(jìn)化支上,說明多個(gè)大球蓋菇品種有互相交流或引種異地栽培狀況。(2)3株耐高溫菌株間的相似性系數(shù)較高,與馴化前的3株原發(fā)菌株有一定的差異,說明長(zhǎng)期在高溫條件下培養(yǎng)的菌株,為了適應(yīng)高溫環(huán)境,部分基因發(fā)生了相應(yīng)變異。但從它們的遺傳相似性與其他菌株相比較仍然較高,其親緣關(guān)系明顯近于其他菌株,說明SRAP分子標(biāo)記技術(shù)能高效鑒別大球蓋菇菌株。(3)黃色菌株之間親緣關(guān)系較近,雖然同樣聚在第Ⅲ類群但是與國(guó)內(nèi)其他菌株親緣關(guān)系較遠(yuǎn),說明表型顏色不同的品種在基因上也有一定差異。

    為進(jìn)一步明確大球蓋菇菌株遺傳多樣性與其地理來源的關(guān)系,將20株(菌株編號(hào)為18、19、20除外)大球蓋菇按照其地理來源分為8個(gè)群體。采用POPGENE 1.32軟件計(jì)算不同地理來源的大球蓋菇群體間遺傳相似性系數(shù)Neis和遺傳距離(表5)。由表5可以看出:8個(gè)群體的遺傳相似性系數(shù)為0.7422~0.9584,其中遼寧群體和黑龍江群體相似性系數(shù)最高,為0.9584,說明其親緣關(guān)系最近。而四川和大阪兩個(gè)群體間的相似性系數(shù)最小為0.7422,可能由其地理位置相隔較遠(yuǎn),生境差別較大,對(duì)基因交流產(chǎn)生了一定的障礙,因而相似性系數(shù)較小。根據(jù)群體間遺傳相似性系數(shù),運(yùn)用POPGENE軟件進(jìn)行聚類(圖4)。由圖4可以看出遼寧地區(qū)和黑龍江地區(qū)的菌株親緣關(guān)系最近,其次為山東地區(qū),這些居群間的地理位置接近,氣候條件類似,在長(zhǎng)期自然選擇條件下,基因保持著較小的遺傳距離。

    3 討論與結(jié)論

    SRAP技術(shù)現(xiàn)目前廣泛應(yīng)用于食用菌的菌株分子鑒定、分類學(xué)研究、遺傳多樣性及親緣關(guān)系分析等方面。許曉燕等[18]應(yīng)用SRAP和AFLP標(biāo)記對(duì)19株毛木耳進(jìn)行了遺傳多樣性分析;Sun等[19]采用SRAP標(biāo)記對(duì)31個(gè)靈芝商業(yè)栽培品種和野生菌種進(jìn)行了分類學(xué)及遺傳多樣性研究;盧政輝等[20]通過SRAP技術(shù)對(duì)不同地區(qū)的24個(gè)秀珍菇進(jìn)行了DNA指紋分析,獲得了它們的親緣關(guān)系;蔡志欣等[21]利用SRAP技術(shù)對(duì)32個(gè)茯苓菌株進(jìn)行了DNA指紋分析,找出了各菌株間的親緣關(guān)系,分析得到供試菌株間的遺傳背景,這均為食用菌遺傳學(xué)研究和育種提供了依據(jù)。

    由于從菌絲及子實(shí)體形態(tài)上區(qū)分不同大球蓋菇品種比較困難,本研究通過SRAP技術(shù)成功對(duì)23株大球蓋菇菌株進(jìn)行鑒別,菌株間聚類分析結(jié)果表明,在不同遺傳相似系數(shù)水平上,供試菌株可分為多個(gè)亞群;不同亞群表明菌株間親緣關(guān)系與地理來源、耐高溫馴化和不同的表型有關(guān),體現(xiàn)了大球蓋菇種內(nèi)遺傳多樣性豐富;國(guó)內(nèi)20株供試菌株被全部區(qū)分開,表明該技術(shù)可用于大球蓋菇不同菌株的遺傳背景分析,適用于親緣關(guān)系鑒定。本研究選用的供試大球蓋菇菌株包含國(guó)家認(rèn)證品種、國(guó)內(nèi)大部分主要栽培品種、黃色變異菌株以及耐高溫菌株,反映出菌株間親緣關(guān)系的整體情況,同時(shí)為品種分類鑒定和遺傳育種的親本選擇提供了理論依據(jù)。

    參 考 文 獻(xiàn):

    [1] Hawksworth D L. The fungal dimension of biodiversity: magnitude, significance, and conservation[J]. Mycological Research, 1991, 95(6):641-655.

    [2] 黃年來. 大球蓋菇的分類地位和特征特性[J]. 食用菌, 1995(6):11.

    [3] 佘冬芳, 樊衛(wèi)國(guó), 徐彥軍,等. 大球蓋菇栽培技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 種子, 2007, 26(1):84-87.

    [4] 薩仁圖雅, 圖力古爾. 大球蓋菇研究進(jìn)展[J]. 食用菌學(xué)報(bào), 2005, 12(4):57-64.

    [5] 孫宇龍, 侯北偉, 耿麗霞,等. 基于SRAP標(biāo)記的白芨遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)評(píng)價(jià)[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2016,51(1):147-152.

    [6] 劉昆玉, 徐豐, 石雪暉,等. 基于SRAP標(biāo)記的刺葡萄親緣關(guān)系分析[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自科科學(xué)版), 2012, 38(6):607-611.

    [7] 唐源江, 曹雯靜, 吳坤林. 基于SRAP標(biāo)記的國(guó)蘭種質(zhì)資源遺傳多樣性分析及分子身份證構(gòu)建[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015, 48(9):1795-1806.

    [8] 李立新, 楊途熙,魏安智,等. 基于SRAP標(biāo)記的花椒種質(zhì)資源遺傳多樣性及群體結(jié)構(gòu)分析[J]. 華北農(nóng)學(xué)報(bào), 2016, 31(5):122-128.

    [9] 廖柏勇, 王芳, 陳麗君,等. 基于SRAP分子標(biāo)記的苦楝種質(zhì)資源遺傳多樣性分析[J]. 林業(yè)科學(xué), 2016, 52(4):48-58.

    [10]徐操, 趙寶華. SRAP分子標(biāo)記的研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J]. 生命科學(xué)儀器, 2009, 7(4):24-27.

    [11]劉華晶, 許修宏, 姜廷波. 大興安嶺地區(qū)野生黑木耳菌株SRAP的遺傳多樣性分析[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 44(13):2641-2649.

    [12]陳美元, 廖劍華, 李洪榮,等. 雙孢蘑菇栽培菌株遺傳多樣性的DNA指紋分析[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào), 2009, 25(4):149-156.

    [13]賈定洪, 王波, 彭衛(wèi)紅. 23個(gè)金針菇菌株的SRAP分析[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2011, 24(5):1871-1874.

    [14]張紅玉, 付立忠, 吳學(xué)謙,等. 靈芝原生質(zhì)體融合子的SRAP分子標(biāo)記鑒定[J]. 食用菌學(xué)報(bào), 2009, 16(4):5-9.

    [15]王守現(xiàn), 劉宇, 耿小麗,等. 應(yīng)用SRAP標(biāo)記對(duì)六個(gè)雞腿菇菌株的多態(tài)性分析[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2006, 28(5):753-757.

    [16]劉俊, 馬超君, 向星潔,等. 基于SRAP標(biāo)記構(gòu)建野生香菇核心種質(zhì)庫[J]. 食用菌學(xué)報(bào), 2017, 24(1):7-17.

    [17] Li G, Quiros C F. Sequence-related amplified polymorphism (SRAP), a new marker system based on a simple PCR reaction: its application to mapping and gene tagging in Brassica[J]. Theoretical & Applied Genetics, 2001, 103(2/3):455-461.

    [18]許曉燕, 余夢(mèng)瑤, 羅霞,等. 利用AFLP和SRAP標(biāo)記分析19株毛木耳的遺傳多樣性[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2008, 21(1): 121-124.

    [19] Sun S J, Gao W, Lin S Q, et al. Analysis of genetic diversity in ganoderma population with a novel molecular maker SRAP[J]. Appl. Microbiol. Biotechnol., 2006,72:537-543.

    [20]盧政輝. 秀珍菇及其近緣22株菌株的SRAP分析[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2008, 20(11):8-10.

    [21]蔡志欣, 蔡丹鳳, 陳美元,等. 32個(gè)茯苓菌株的SRAP分析[J]. 食藥用菌, 2013(2):96-98.

    猜你喜歡
    親緣關(guān)系遺傳多樣性
    黃連屬部分藥用植物遺傳多樣性與親緣關(guān)系的SCoT分析
    基于PGIP基因的薔薇科植物分子進(jìn)化樹構(gòu)建與分析
    從葉綠體DNA角度分析云南省砂梨地方品種遺傳多樣性
    茄子種質(zhì)資源農(nóng)藝性狀遺傳多樣性分析
    傳統(tǒng)中藥材麥冬的DNA條形碼鑒定
    淺析田間水稻紋枯病抗性鑒定體系的確立與完善
    西藏野核桃的表型特征及其保育措施
    水稻紋枯病抗性鑒定體系的確立與遺傳多樣性研究
    MC1R基因編碼區(qū)的系統(tǒng)發(fā)育分析和正選擇位點(diǎn)檢測(cè)
    楊梅種質(zhì)資源遺傳多樣性研究進(jìn)展
    婷婷色综合www| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 男女下面插进去视频免费观看| 午夜av观看不卡| 日韩三级伦理在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 中文字幕亚洲精品专区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 视频区图区小说| 国产高清国产精品国产三级| 国产成人aa在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 国产激情久久老熟女| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲精品第二区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 黑丝袜美女国产一区| 制服诱惑二区| 欧美国产精品一级二级三级| 欧美人与性动交α欧美软件| 欧美成人午夜免费资源| 老汉色av国产亚洲站长工具| 黄片无遮挡物在线观看| 在线观看国产h片| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久婷婷青草| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 中国三级夫妇交换| 亚洲国产最新在线播放| videos熟女内射| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 精品一区在线观看国产| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 91国产中文字幕| 夫妻午夜视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 韩国高清视频一区二区三区| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产精品 欧美亚洲| 春色校园在线视频观看| 久久久国产欧美日韩av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产av国产精品国产| 欧美成人午夜精品| 一区福利在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 国产成人精品婷婷| 欧美日韩av久久| 国产精品久久久av美女十八| 制服丝袜香蕉在线| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 我的亚洲天堂| 免费黄色在线免费观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 男女啪啪激烈高潮av片| 一级片'在线观看视频| 精品少妇内射三级| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久亚洲国产成人精品v| av网站免费在线观看视频| 久久久久久伊人网av| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 90打野战视频偷拍视频| 久久久久久伊人网av| 国产1区2区3区精品| 国产乱来视频区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 久久99精品国语久久久| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 九色亚洲精品在线播放| 国产不卡av网站在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| av电影中文网址| 国产深夜福利视频在线观看| 99国产综合亚洲精品| 亚洲美女视频黄频| 午夜福利影视在线免费观看| 男人添女人高潮全过程视频| a级毛片在线看网站| 一级片'在线观看视频| 国产高清国产精品国产三级| 久久人人爽人人片av| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品一区二区在线观看99| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久99热这里只频精品6学生| 婷婷成人精品国产| 国产精品一区二区在线观看99| 精品一区二区免费观看| 国产精品熟女久久久久浪| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲伊人久久精品综合| 五月天丁香电影| 日本欧美视频一区| 欧美精品一区二区大全| 9色porny在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| 深夜精品福利| 精品国产一区二区久久| 女性被躁到高潮视频| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲精品自拍成人| 国产av国产精品国产| 自线自在国产av| 成人免费观看视频高清| 精品久久久久久电影网| 中文字幕精品免费在线观看视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 99国产综合亚洲精品| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产成人av激情在线播放| 国产日韩欧美视频二区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产黄色免费在线视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产精品国产三级国产专区5o| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲精品自拍成人| 亚洲国产精品一区三区| 国产精品一二三区在线看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日韩av在线免费看完整版不卡| 夫妻午夜视频| 晚上一个人看的免费电影| 91精品三级在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 男人添女人高潮全过程视频| 色94色欧美一区二区| 一二三四在线观看免费中文在| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲国产色片| 如何舔出高潮| 男人添女人高潮全过程视频| 免费高清在线观看日韩| 伊人亚洲综合成人网| 99香蕉大伊视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 人人澡人人妻人| 亚洲一区中文字幕在线| 高清在线视频一区二区三区| 99re6热这里在线精品视频| a级毛片在线看网站| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 蜜桃国产av成人99| 18+在线观看网站| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产97色在线日韩免费| 久久青草综合色| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产精品国产av在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲精品国产av成人精品| 人妻 亚洲 视频| 69精品国产乱码久久久| 久久久久精品性色| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| av有码第一页| av天堂久久9| 亚洲图色成人| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久久久久久精品精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产深夜福利视频在线观看| 18在线观看网站| 91在线精品国自产拍蜜月| av在线老鸭窝| 国产精品一国产av| 色播在线永久视频| 欧美97在线视频| 男女下面插进去视频免费观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 欧美 亚洲 国产 日韩一| av在线老鸭窝| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 午夜日韩欧美国产| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 免费在线观看黄色视频的| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 黄网站色视频无遮挡免费观看| av视频免费观看在线观看| 亚洲中文av在线| 一级片'在线观看视频| 亚洲一区中文字幕在线| 久久久欧美国产精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产黄频视频在线观看| 99久国产av精品国产电影| 久久久久久免费高清国产稀缺| 又黄又粗又硬又大视频| 免费在线观看黄色视频的| 国产精品 国内视频| 一区在线观看完整版| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 日韩不卡一区二区三区视频在线| 日韩中文字幕视频在线看片| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 成人国语在线视频| 黑人猛操日本美女一级片| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲精华国产精华液的使用体验| videosex国产| 99香蕉大伊视频| 曰老女人黄片| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 老司机亚洲免费影院| 精品视频人人做人人爽| 久久久亚洲精品成人影院| 国产av国产精品国产| 国产爽快片一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 最黄视频免费看| 高清不卡的av网站| av视频免费观看在线观看| 青草久久国产| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久久久久人人人人人| 亚洲,欧美,日韩| 国产黄频视频在线观看| 中国国产av一级| 韩国av在线不卡| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久99精品国语久久久| 日本av手机在线免费观看| 男女无遮挡免费网站观看| 天天操日日干夜夜撸| 2018国产大陆天天弄谢| 青春草国产在线视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲精品第二区| 久久毛片免费看一区二区三区| 成人国产av品久久久| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 大陆偷拍与自拍| 青春草亚洲视频在线观看| 久久人人爽人人片av| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 看免费av毛片| 久久精品国产a三级三级三级| 日本黄色日本黄色录像| av免费在线看不卡| 国产片特级美女逼逼视频| 伦理电影大哥的女人| 日本av免费视频播放| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久久久久人人人人人| 一区二区三区精品91| 国精品久久久久久国模美| 丝瓜视频免费看黄片| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产深夜福利视频在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 午夜福利影视在线免费观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 春色校园在线视频观看| 一区福利在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 免费av中文字幕在线| 美国免费a级毛片| 日本黄色日本黄色录像| av福利片在线| 免费日韩欧美在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 久久久久视频综合| 久久韩国三级中文字幕| 极品少妇高潮喷水抽搐| freevideosex欧美| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 成年女人在线观看亚洲视频| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美日韩av久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 九色亚洲精品在线播放| 精品人妻偷拍中文字幕| 毛片一级片免费看久久久久| 久久久久精品人妻al黑| 色吧在线观看| 999久久久国产精品视频| 国产成人精品无人区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 性色av一级| 女性生殖器流出的白浆| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲伊人色综图| 免费高清在线观看视频在线观看| 性色avwww在线观看| 91成人精品电影| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 美国免费a级毛片| 亚洲精品一二三| 亚洲美女视频黄频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产爽快片一区二区三区| 国产免费现黄频在线看| 午夜av观看不卡| 国产成人av激情在线播放| 国产精品久久久久久精品古装| 美女视频免费永久观看网站| 精品人妻在线不人妻| 国产成人精品一,二区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 叶爱在线成人免费视频播放| 99热国产这里只有精品6| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲欧美清纯卡通| 如何舔出高潮| 人体艺术视频欧美日本| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 女人精品久久久久毛片| 国精品久久久久久国模美| 久热久热在线精品观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 丰满乱子伦码专区| 国产精品久久久久成人av| 丝袜在线中文字幕| 高清黄色对白视频在线免费看| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 国产极品天堂在线| 亚洲av成人精品一二三区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 在线观看国产h片| 成年人午夜在线观看视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久国产一区二区| 国产精品久久久久久精品古装| 国产在线视频一区二区| 大码成人一级视频| 亚洲欧美清纯卡通| 丁香六月天网| 国产毛片在线视频| 男女边摸边吃奶| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产在视频线精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 久久精品国产亚洲av天美| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美日韩视频精品一区| 青春草亚洲视频在线观看| 丝袜脚勾引网站| 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品国产露脸久久av麻豆| 日本vs欧美在线观看视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 伊人久久国产一区二区| 久久久精品免费免费高清| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 女人精品久久久久毛片| 精品久久久精品久久久| 亚洲av在线观看美女高潮| 黄色一级大片看看| 黄片无遮挡物在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 热re99久久国产66热| 亚洲欧美色中文字幕在线| 少妇的丰满在线观看| 激情视频va一区二区三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 男男h啪啪无遮挡| 女性生殖器流出的白浆| 中文字幕最新亚洲高清| 精品亚洲成a人片在线观看| av在线观看视频网站免费| 亚洲三区欧美一区| 国产免费福利视频在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 在线观看人妻少妇| 国产精品人妻久久久影院| 国产成人欧美| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产一区二区 视频在线| 国产成人一区二区在线| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 大片电影免费在线观看免费| 国产 精品1| 久久久久久久国产电影| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久青草综合色| 欧美成人精品欧美一级黄| 丝袜人妻中文字幕| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 如何舔出高潮| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 两个人看的免费小视频| 欧美成人午夜免费资源| 国产探花极品一区二区| 大片电影免费在线观看免费| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 青春草视频在线免费观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品国产一区二区久久| 丁香六月天网| 精品国产一区二区久久| 欧美在线黄色| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| av免费在线看不卡| 午夜老司机福利剧场| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 99热网站在线观看| 婷婷成人精品国产| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 考比视频在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 日韩欧美一区视频在线观看| 成人国语在线视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲中文av在线| xxxhd国产人妻xxx| 蜜桃在线观看..| 免费观看性生交大片5| 秋霞伦理黄片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 香蕉精品网在线| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 男人爽女人下面视频在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 伦理电影免费视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲成国产人片在线观看| 丝袜在线中文字幕| 亚洲国产av新网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 男的添女的下面高潮视频| 久久99热这里只频精品6学生| kizo精华| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美bdsm另类| 人妻系列 视频| 丝袜美腿诱惑在线| 五月天丁香电影| 婷婷色麻豆天堂久久| 五月天丁香电影| 只有这里有精品99| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 婷婷色综合大香蕉| 一级a爱视频在线免费观看| 两性夫妻黄色片| 亚洲精品国产av成人精品| 男女边摸边吃奶| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久这里有精品视频免费| 中文字幕色久视频| 黄色 视频免费看| 国产成人91sexporn| 婷婷色av中文字幕| 人人妻人人澡人人看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 飞空精品影院首页| 99热网站在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品欧美亚洲77777| 久久狼人影院| 日本wwww免费看| 老熟女久久久| 只有这里有精品99| 国产乱来视频区| 最近中文字幕2019免费版| 9热在线视频观看99| 男女下面插进去视频免费观看| 中国国产av一级| 亚洲人成77777在线视频| 男男h啪啪无遮挡| 国产在线视频一区二区| 婷婷色综合www| 国产有黄有色有爽视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | av网站免费在线观看视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 精品国产一区二区久久| 久久久国产欧美日韩av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲视频免费观看视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久鲁丝午夜福利片| 春色校园在线视频观看| 亚洲成人av在线免费| 国产在视频线精品| av.在线天堂| 久久久精品94久久精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 一级毛片电影观看| 久热这里只有精品99| 日日摸夜夜添夜夜爱| av有码第一页| 国产精品99久久99久久久不卡 | av网站免费在线观看视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 老鸭窝网址在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲美女黄色视频免费看| 最近2019中文字幕mv第一页| 少妇人妻 视频| 亚洲av综合色区一区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 日本欧美视频一区| 国产av国产精品国产| 成年人免费黄色播放视频| 国产精品熟女久久久久浪| av在线观看视频网站免费| 黄片小视频在线播放| 亚洲 欧美一区二区三区| 男男h啪啪无遮挡| 最黄视频免费看| 看免费av毛片| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲国产av影院在线观看| a级毛片黄视频| 国产探花极品一区二区| 国产精品无大码| 国产av国产精品国产| 伊人久久国产一区二区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久影院123| 久久婷婷青草| 日韩伦理黄色片| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 18禁国产床啪视频网站| 久久av网站| 久久久国产一区二区| 久久久精品区二区三区| 久久久久久久久久久免费av| 国产成人91sexporn| 人妻少妇偷人精品九色| 国产有黄有色有爽视频| 国产人伦9x9x在线观看 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美日本中文国产一区发布| 美女国产视频在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 涩涩av久久男人的天堂| 男的添女的下面高潮视频| av国产精品久久久久影院| 久久久国产欧美日韩av| 久久久亚洲精品成人影院| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 成人午夜精彩视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 下体分泌物呈黄色| 老司机影院毛片| 国产一区二区 视频在线| 老女人水多毛片| 国产精品国产三级专区第一集| 久久综合国产亚洲精品| 在线观看www视频免费| 天堂中文最新版在线下载| 国产成人av激情在线播放| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日本av免费视频播放| 亚洲精品日本国产第一区| 九草在线视频观看| 大片电影免费在线观看免费| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产精品国产av在线观看| 中国三级夫妇交换| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久99一区二区三区| 91精品伊人久久大香线蕉| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产97色在线日韩免费| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久久亚洲精品成人影院| 日韩免费高清中文字幕av| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 我的亚洲天堂| 少妇的逼水好多| 有码 亚洲区| 日本91视频免费播放| 久久精品久久久久久噜噜老黄|