粉防己堿抗支原體分子機(jī)制研究

丁亦男，魏健，王光野

（長(zhǎng)春師范大學(xué)，吉林長(zhǎng)春 130000）

粉防己堿（Tetrandrine，TET）異名漢防己堿、又名漢防己甲素、漢防己堿，主要從己科草料根部精粹、提煉出來(lái)，從成分來(lái)看屬于種芐基異喹啉類生物堿[1]。最近幾年，由于這種物質(zhì)具有較高的醫(yī)學(xué)作用，而被廣泛用于治療各種肝炎和呼吸道疾病，以及逐漸運(yùn)用到皮膚創(chuàng)傷治療當(dāng)中，而隨著細(xì)胞分離技術(shù)以及培養(yǎng)技術(shù)不斷的進(jìn)步，以及在分子方面的應(yīng)用逐漸深入，而使得這種物質(zhì)被應(yīng)用到抗纖維化中去，如TET抗纖維化的治療。

1 抑制細(xì)胞因子的致纖維化效果

纖維化的產(chǎn)生主要是在細(xì)胞因子影響及協(xié)助下所完成的，又或者是在病菌的干擾下而逐漸形成，由此引起遷移以及導(dǎo)致細(xì)胞增生異變，與細(xì)胞外基質(zhì)合成所導(dǎo)致，又或者是因?yàn)楫a(chǎn)生出三種不同的生物方面的反應(yīng)機(jī)制所導(dǎo)致，在實(shí)驗(yàn)中將TGF-β1cDNA注入到白鼠的另外一邊的腎動(dòng)脈當(dāng)中，而經(jīng)過(guò)此次試驗(yàn)可發(fā)現(xiàn)，腎小球硬化對(duì)策無(wú)異常，這表面該物質(zhì)能夠改善細(xì)胞外基質(zhì)沉積現(xiàn)象，及腎小球硬化的作用[2]。而通過(guò)研究Northern所進(jìn)行的雜交試驗(yàn)證明，使用TET之時(shí)，能夠有效的降低TGF-β1 mRNA，從而大大的減少腎小球ECM的產(chǎn)生，減少腎小球硬化的出現(xiàn)。田字彬[3]等人在做試驗(yàn)中就發(fā)現(xiàn)，TET能夠減少TGF-β1 mRNA，能夠有效的控制PDGF的出現(xiàn)，而這必須要保持在適當(dāng)?shù)姆秶畠?nèi)，在此基礎(chǔ)上可以抑制住PDGF的產(chǎn)生，以及FB與lto細(xì)胞膠原的產(chǎn)生。這表明TET除了能夠直接影響細(xì)胞增殖出現(xiàn)，以及有效降低膠原合成之外，同樣也能夠有效的抑制住PDGF的出現(xiàn)，而能夠起到抗纖維化的效果。根據(jù)一些報(bào)道可知[4]，TET還能阻斷PDGFR(PDGF成分）能夠影響到細(xì)胞分泌出現(xiàn)，而有效的降低PDGF結(jié)合受體的出現(xiàn)，從而實(shí)現(xiàn)抗纖維化的效果。

2 鈣拮抗作用

細(xì)胞漿Ca2+濃度升高源于各類疾病的病理生理基礎(chǔ)。相關(guān)研究結(jié)果證明，胞漿內(nèi)游離Ca2+利用與其受體蛋白鈣調(diào)蛋白（Calmodulin，CaM）融合在一起實(shí)現(xiàn)第二信使復(fù)合體的形成，激活CaM依賴性的cAMP二磷酸酶，降低細(xì)胞內(nèi)cAMP的水平，而cAMP水平的降低可增加細(xì)胞內(nèi)膠原基因的表達(dá)，且可抑制膠原酶的活性。已有研究證實(shí)，TET是一種強(qiáng)有力的鈣拮抗劑。Liu QY[5]等的研究表明，TET對(duì)Ca2+通道的阻滯是非選擇性的，既可阻滯細(xì)胞膜電壓門控通道介導(dǎo)的Ca2+內(nèi)流，又可阻滯受體門控通道干預(yù)細(xì)胞內(nèi)Ca2+分布。

3 抗脂質(zhì)過(guò)氧化的影響

根據(jù)相關(guān)的試驗(yàn)可知，脂質(zhì)過(guò)氧化物一旦形成，將會(huì)產(chǎn)生出極強(qiáng)的質(zhì)纖維化現(xiàn)象，其中細(xì)胞漿液及線粒體內(nèi)鈣化一旦出現(xiàn)以后，就會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化損害的機(jī)制產(chǎn)生，而這主要還是因?yàn)殁}化導(dǎo)致線粒體膜電離失效，以及呼吸鏈出現(xiàn)阻礙，以及電子傳遞鏈出現(xiàn)失常，由此而引起氧自由基的出現(xiàn)，直接的刺激到Ca2+依賴蛋白酶，由此導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的黃嘌呤脫氫酶（XDH）逐漸的轉(zhuǎn)化成為黃嘌呤經(jīng)酶（X0D），XOD則就會(huì)在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生許多的氧自由基，而由此引起細(xì)胞出現(xiàn)過(guò)氧化損害的出現(xiàn)，其中，TET不但具有較強(qiáng)的抗氧化的作用，同時(shí)還能夠產(chǎn)生CaM拮抗劑，此外，根據(jù)相關(guān)的試驗(yàn)表明，TET還能夠提高肺纖維化活性，及提高肝臟細(xì)胞內(nèi)的超氧化歧化酶的活性，而這將進(jìn)一步的加強(qiáng)SOD及時(shí)清理能力，將體內(nèi)的氧自由基基礎(chǔ)的清理出去，而能有效地防止纖維化的產(chǎn)生。

4 TET預(yù)防瘢痕

瘢痕與肝、肺等內(nèi)臟纖維化疾病在病理上都表現(xiàn)為膠原等細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)多無(wú)序沉積。隨著對(duì)TET抗纖維化機(jī)制研究的逐步深入，人們很自然就聯(lián)想到其防治瘢痕的可能性，目前已有人在這方面做了一些有益的嘗試。劉德伍[6]等觀察TET對(duì)體外培養(yǎng)人瘢痕FB生長(zhǎng)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TET能抑制FB生長(zhǎng)，且與濃度、時(shí)間呈正相關(guān)。采用同樣的方法，李萬(wàn)同[7]等也發(fā)現(xiàn)TET能濃度依賴性地抑制HTSFB的增殖活力，濃度為1 mg/L時(shí)即開(kāi)始表現(xiàn)出抑制作用，當(dāng)濃度達(dá)到100 mg/L時(shí)，抑制率可達(dá)89.4%，細(xì)胞的活力也下降到對(duì)照組的38.5%。在上述模型中再加入一定濃度的TGF-β，發(fā)現(xiàn)TGF-β有促進(jìn)瘢痕基質(zhì)收縮的作用，而TET在不抑制FB增殖活力的濃度范圍內(nèi)（≤4 mg/L）即可有效抑制TGF-β的這種作用。因此推測(cè)，TET對(duì)細(xì)胞因子刺激FB、啟動(dòng)和促進(jìn)瘢痕增生的過(guò)程可能有直接的作用，有必要深入探討和研究。

5 粉防己堿對(duì)血管內(nèi)皮剝脫后再狹窄的分子機(jī)制研究

肝纖維化是多種慢性肝病的共同事件（commonevents）。慢性肝病時(shí)肝組織腫瘤壞死因子（Tumor Necrosis Fector，TNFα）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（Transforming Growth Factor β1，TGFβ1）、血小板源生長(zhǎng)因子（Platelet Derivead Growth Factor，PDGF）及表示為上調(diào)，而促使肝星狀細(xì)胞出現(xiàn)，而導(dǎo)致此類物質(zhì)產(chǎn)生，與不斷的轉(zhuǎn)化，而這能夠促使T型及Ⅲ型膠的上調(diào)及出現(xiàn)，而由此導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)纖維化的現(xiàn)象[8]，其中，核轉(zhuǎn)錄因子AP-1（C-fos與 C-jun同/異二聚體）DNA Ⅲ型膠原基因轉(zhuǎn)錄上調(diào)、結(jié)合了增強(qiáng)對(duì)T型具有一定的調(diào)節(jié)的作用[9]，根據(jù)一些研究后可發(fā)現(xiàn)，配合使用粉防己堿（tetrandrine，TET）與甘草酸（Glycyrrhizinicacid，GLZ）能夠顯著增加其抗肝纖維化的療效。陳錫美等[10]通過(guò)采用四氯化碳皮下注射誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，同時(shí)給予不同劑量（5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg體重）TET、（50mg/kg體重）Glz及二者聯(lián)合灌胃或腹腔注射，用RT-PCR法檢測(cè)肝組織Ⅰ型、Ⅲ型前膠原、c-fos及c-junmRNA表達(dá)。結(jié)果10mg、20mg/kg體重TET和GLZ單獨(dú)應(yīng)用能夠不同程度抑制肝纖維化大鼠肝組織Ⅰ型、Ⅲ型前膠原、c-fos及c-junmRNA表達(dá)，兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用效果更為顯著。由此可以看出聯(lián)合應(yīng)用Tet與Glz能夠更有效地在轉(zhuǎn)錄及其上游水平抑制肝臟膠原合成。