4種常用漁藥對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性

陳健榮，劉利平

(上海海洋大學(xué) 省部共建水產(chǎn)種質(zhì)資源發(fā)掘與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306)

花鰻鱺(Anguillamarmorata)屬鰻鱺目、鰻鱺科、鰻鱺屬，俗稱鱸鰻、花鰻、雪鰻、溪鰻、鱔王，是典型的降海洄游性魚類，廣泛分布于西太平洋和印度洋的熱帶、亞熱帶地區(qū)[1]，在我國(guó)福建、廣東、廣西、海南和臺(tái)灣均有零星分布?；狑~營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，是營(yíng)養(yǎng)學(xué)意義上的優(yōu)質(zhì)蛋白源，必需氨基酸與氨基酸總量的比值高達(dá)43%，富含谷氨酸、精氨酸和天冬氨酸等有助于術(shù)后康復(fù)的氨基酸；肌肉中多不飽和脂肪酸與總脂肪酸的比值，以及二十二碳六烯酸與總脂肪酸的比值在5種鰻鱺中均為最高；肌肉中富含磷、鉀、鐵和鋅等多種礦物元素[2-3]，是理想的礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)來(lái)源?；狑~是我國(guó)極為珍貴的食用魚類，但由于水體污染和過(guò)度捕撈，以及毒、電漁法對(duì)漁業(yè)資源的毀滅性破壞，攔河建壩修水庫(kù)及水電站等阻斷了花鰻鱺的正常洄游通道等原因，導(dǎo)致花鰻鱺的野生資源日益匱乏，1988年被我國(guó)列為國(guó)家Ⅱ級(jí)野生保護(hù)動(dòng)物。

近年來(lái)，隨著歐洲鰻鱺(A.anguilla)被納入《華盛頓公約》保護(hù)范圍，鰻鱺(A.japonica)苗種資源的萎縮，我國(guó)東南沿海省份逐漸從東南亞地區(qū)引入苗種資源豐富、價(jià)格便宜的花鰻鱺進(jìn)行養(yǎng)殖，促進(jìn)了花鰻鱺養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)化及資源可持續(xù)利用，并取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益。

有關(guān)花鰻鱺的研究主要集中在養(yǎng)殖模式、生化組成、環(huán)境脅迫、致病菌等方面?；狑~在苗種培育等養(yǎng)殖過(guò)程中，易感染細(xì)菌性和寄生蟲疾病，常見的病害有爛尾病、遲緩愛(ài)德華菌病、小瓜蟲病、指環(huán)蟲病、鰻居線蟲病等，存活率和成品率均不高[4-5]，給養(yǎng)殖者造成一定的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重制約了花鰻鱺養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。目前關(guān)于花鰻鱺疾病的防治研究得不多，僅見部分藥物如吡喹酮、甲苯咪唑、溴氰菊酯對(duì)花鰻鱺的急性毒性[6]。防治花鰻鱺疾病的常用漁藥用量主要參照其他魚類，但不同魚類的耐藥性存在一定的差異[7]。本文研究了高錳酸鉀、甲醛、食鹽和二氧化氯4種常用魚病防治藥物對(duì)花鰻鱺幼魚的急性刺激、半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度以及花鰻鱺幼魚對(duì)這4種漁藥的敏感性，旨在為花鰻鱺養(yǎng)殖中出現(xiàn)的細(xì)菌性、寄生蟲疾病防治的用藥劑量提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用花鰻鱺幼魚購(gòu)自福建吉祥花鰻漁業(yè)有限公司，降溫運(yùn)輸至上海海洋大學(xué)濱海水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)，經(jīng)水溫平衡后暫養(yǎng)在5.0 m×3.0 m×1.0 m的室內(nèi)水泥池中，根據(jù)初始生活鹽度，一周內(nèi)梯度淡化。馴養(yǎng)前期給花鰻鱺幼魚投喂水蚯蚓，后期用福建高農(nóng)飼料有限公司生產(chǎn)的黑仔鰻魚飼料進(jìn)行轉(zhuǎn)餌，日投喂5次，吸污換水1/4，保持良好的水質(zhì)。馴養(yǎng)30 d后，挑選體表無(wú)傷、活力強(qiáng)、規(guī)格相近的試驗(yàn)魚進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)魚平均體長(zhǎng)(51.06±4.95)mm，平均體質(zhì)量(0.16±0.07) g。

試驗(yàn)用漁藥見表1。

表1 試驗(yàn)用漁藥的種類及其性狀

1.2 方法

采用周永欣等[8]的水生生物毒性試驗(yàn)方法。花鰻鱺幼魚隨機(jī)放入3 L的錐形玻璃瓶，每瓶10尾幼魚。4種漁藥設(shè)5個(gè)質(zhì)量濃度梯度(表2)，每個(gè)質(zhì)量濃度梯度設(shè)3個(gè)平行。試驗(yàn)用水為充分曝氣的自來(lái)水，水溫在27～29 ℃，溶解氧水平≥7.0 mg/L。

預(yù)試驗(yàn)中，測(cè)定4種漁藥對(duì)花鰻鱺幼魚的24 h最低全致死質(zhì)量濃度和最高全不致死質(zhì)量濃度，以此作為正式試驗(yàn)時(shí)質(zhì)量濃度的上、下限，按照等對(duì)數(shù)間距設(shè)計(jì)和配制各試驗(yàn)質(zhì)量濃度梯度(表2)。食鹽直接加入試驗(yàn)水體溶解，其他藥物用蒸餾水配制成母液，再加入試驗(yàn)水體。

試驗(yàn)前停喂1 d，試驗(yàn)期間微增氧，不投餌。高錳酸鉀、甲醛和二氧化氯等易氧化和易揮發(fā)的藥物每隔24 h換液1次，食鹽不換液。試驗(yàn)期間，前8 h連續(xù)觀察和記錄花鰻鱺幼魚的毒性反應(yīng)，其后每隔6 h觀察花鰻鱺幼魚的體色、游泳姿勢(shì)和體表黏液等狀況。以鑷子夾住試驗(yàn)魚尾柄部1 min無(wú)反應(yīng)判定為死亡，及時(shí)取出死魚，觀察和記錄試驗(yàn)魚24、48、72、96 h的死亡數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

4種藥物對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性均取24、48、72、96 h死亡率的平均值作為最后結(jié)果，用直線內(nèi)插法求出4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的半致死質(zhì)量濃度(LC50)，將藥物的質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)換為質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)，以質(zhì)量濃度的常用對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，死亡率為縱坐標(biāo)，用Excel 2003軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，擬合回歸方程。根據(jù)Turubell公式，計(jì)算4種藥物對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度(SC)：

SC=48 hLC50×0.3/(24 hLC50/48 hLC50)2

表2 4種漁藥的試驗(yàn)質(zhì)量濃度梯度

2 結(jié) 果

2.1 高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性

高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚的毒性較強(qiáng)。當(dāng)高錳酸鉀質(zhì)量濃度為4.00、4.75 mg/L時(shí)，試驗(yàn)魚明顯不適，四處游動(dòng)，2 h后伏在瓶底，但活力較好，長(zhǎng)時(shí)間后身體僵硬，體表分泌大量黏液，形成紅棕色的黏液層，身體側(cè)臥或翻臥在瓶底。4.75 mg/L質(zhì)量濃度組7 h后出現(xiàn)死亡，30 h全部死亡。

不同質(zhì)量濃度的高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性不同。隨著高錳酸鉀質(zhì)量濃度的增加，花鰻鱺幼魚的致死效應(yīng)增加(表3)。根據(jù)擬合回歸方程得出，高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚的24、48、72、96 h半致死質(zhì)量濃度分別為4.45、3.66、3.46、3.31 mg/L，安全質(zhì)量濃度為0.74 mg/L(表4)。

表3 高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性

表4 高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度

2.2 甲醛對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性

花鰻鱺幼魚對(duì)甲醛溶液反應(yīng)敏感。當(dāng)甲醛質(zhì)量濃度達(dá)110.00、101.66 mg/L時(shí)，花鰻鱺幼魚反應(yīng)劇烈，四處快速游動(dòng)，1 h后大多數(shù)伏在瓶底，分泌少量黏液，活力一般，分別在5 h和8 h出現(xiàn)死亡，110.00 mg/L質(zhì)量濃度組的花鰻鱺幼魚在26 h時(shí)，死亡率達(dá)100%。

隨著甲醛質(zhì)量濃度的增大，花鰻鱺幼魚的死亡率相應(yīng)增加，當(dāng)甲醛質(zhì)量濃度為101.66 mg/L，24 h死亡率達(dá)50%，72 h達(dá)100%。甲醛對(duì)花鰻鱺幼魚的24、48、72、96 h半致死質(zhì)量濃度分別為104.74、93.75、89.95、88.78 mg/L，安全質(zhì)量濃度為22.54 mg/L(表5、表6)。

表5 甲醛對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性

表6 甲醛對(duì)花鰻鱺幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度

2.3 食鹽對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性

花鰻鱺幼魚對(duì)食鹽有較強(qiáng)的耐受能力。當(dāng)食鹽質(zhì)量濃度為28 318 mg/L和35 000 mg/L時(shí)，花鰻鱺幼魚游動(dòng)快速，不久便伏在瓶底，體色發(fā)白，分泌大量的黏液，僅有少數(shù)魚游向水面，活力較差；35 000 mg/L質(zhì)量濃度組1 h后有花鰻鱺幼魚死亡，2 h后有50%的魚側(cè)臥或側(cè)翻，15 h后100%死亡；而28 318 mg/L質(zhì)量濃度組24 h死亡率為36.7%，15000 mg/L質(zhì)量濃度組96 h死亡率只有6.7%。

當(dāng)食鹽質(zhì)量濃度低于18 538 mg/L時(shí)，花鰻鱺幼魚96 h的死亡率低于17%；當(dāng)食鹽質(zhì)量濃度達(dá)22 913 mg/L時(shí)，花鰻鱺幼魚96 h的死亡率為60%～100%。食鹽對(duì)花鰻鱺幼魚的24、48、72、96 h半致死質(zhì)量濃度分別為27 392、25 461、23 699、22 278 mg/L，安全質(zhì)量濃度為6600 mg/L(表7、表8)。

表7 食鹽對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性

表8 食鹽對(duì)花鰻鱺幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度

2.4 二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性

花鰻鱺幼魚對(duì)二氧化氯溶液反應(yīng)最敏感。當(dāng)花鰻鱺幼魚置于不同質(zhì)量濃度的二氧化氯藥液后，出現(xiàn)明顯的應(yīng)激反應(yīng)，大部分試驗(yàn)魚都游向水面，浮躁不安，0.5 h后都伏在瓶底，呼吸急促，2 h內(nèi)出現(xiàn)死亡，4 h后試驗(yàn)魚的狀態(tài)趨于穩(wěn)定。3.48 mg/L和4.00 mg/L質(zhì)量濃度組中花鰻鱺幼魚在0.5 h內(nèi)均出現(xiàn)死亡，24 h后花鰻鱺幼魚的死亡率分別為46.7%和56.7%。

當(dāng)二氧化氯質(zhì)量濃度達(dá)3.03 mg/L時(shí)，花鰻鱺幼魚的96 h死亡率為90%，二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚的24、48、72、96 h半致死質(zhì)量濃度分別為3.74、2.76、2.60、2.44 mg/L，安全質(zhì)量濃度為0.45 mg/L(表9、表10)。

表9 二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性

表10 二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度

綜合以上結(jié)果可知，對(duì)照組中花鰻鱺幼魚的96 h存活率為100%，隨著漁藥質(zhì)量濃度的增加和脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，死亡率升高。高錳酸鉀、甲醛、食鹽和二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度分別為0.74、22.54、6600、0.45 mg/L，花鰻鱺幼魚對(duì)上述4種常用漁藥的敏感性由高至低為二氧化氯>高錳酸鉀>甲醛>食鹽。

3 討 論

3.1 高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚的毒性作用

高錳酸鉀是一種強(qiáng)氧化劑，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用于防治細(xì)菌性疾病和殺滅單殖吸蟲類等寄生蟲，治療鰻鱺爛尾、爛鰓等疾病[9]。但是在堿性和微酸性條件下，高錳酸鉀易產(chǎn)生二氧化錳沉淀，引起魚體組織發(fā)生暫時(shí)性的病理變化[10]。不同魚類對(duì)高錳酸鉀的耐受能力不同，本試驗(yàn)中高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度為0.74 mg/L，低于美洲鰻鱺(A.rostrata)仔鰻(1.14 mg/L)[11]。高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚48 h半致死質(zhì)量濃度為3.66 mg/L，遠(yuǎn)低于歐洲鰻鱺(7～10 mg/L)[12]，說(shuō)明花鰻鱺對(duì)高錳酸鉀比美洲鰻鱺和歐洲鰻鱺更敏感。與其他科的魚類相比，高錳酸鉀對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度與泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)(0.75 mg/L)[13]、松江鱸魚(Trachidermusfasciatus)(0.78 mg/L)[14]非常相近，高于鰱魚(Hypophthalmichthysmolitrix)(0.42 mg/L)[15]和花鱸(Lateolabraxjaponicus)魚種(0.6 mg/L)[16]。魚類養(yǎng)殖過(guò)程中，高錳酸鉀常用量為0.5～1.0 mg/L[9]，本試驗(yàn)得出的花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度在其常用量范圍之內(nèi)，可以認(rèn)為是一種較安全的藥物，使用時(shí)需謹(jǐn)慎控制劑量和時(shí)間。但是，高錳酸鉀脅迫對(duì)魚的抗氧化系統(tǒng)和肝臟組織造成損失[16]，建議施藥后在飼料中添加抗氧化劑和保肝的藥物，促進(jìn)魚體恢復(fù)。

3.2 甲醛對(duì)花鰻鱺幼魚的毒性作用

甲醛溶液(又稱福爾馬林)是一種強(qiáng)還原劑，易揮發(fā)，對(duì)細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物和病毒有很強(qiáng)的殺滅作用。與同屬魚類比較，本試驗(yàn)中甲醛對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度為22.54 mg/L，高于雙色鰻鱺(A.bicolorbicolor)仔鰻(10.43 mg/L)[17]，遠(yuǎn)低于美洲鰻鱺仔鰻(68.5 mg/L)[11]。甲醛對(duì)花鰻鱺幼魚48 h半致死質(zhì)量濃度為93.75 mg/L，低于歐洲鰻鱺(200～300 mg/L)[12]，說(shuō)明花鰻鱺對(duì)甲醛較敏感。甲醛對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度與泥鰍(25.30 mg/L)[13]和藍(lán)點(diǎn)笛鯛(Lutjanusrivulatus)幼魚(19.88 mg/L)[18]相近，遠(yuǎn)低于斜帶石斑魚(Epinepheluscoioides)[19]幼魚(73.67 mg/L)、松江鱸魚(99.34 mg/L)[14]，說(shuō)明甲醛對(duì)魚類的毒性作用存在極大的種間差異。生產(chǎn)中甲醛的常用潑灑量為10～30 mg/L[9]，本試驗(yàn)中甲醛溶液對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度在其常用量范圍內(nèi)，但甲醛使用量較大，成本高，建議通過(guò)控制時(shí)間用浸泡的方式防治相應(yīng)的疾病。

3.3 食鹽對(duì)花鰻鱺幼魚的毒性作用

食鹽通過(guò)改變滲透壓，殺滅一些體外寄生動(dòng)物和病原體，防治多種細(xì)菌性、真菌和寄生蟲病。低質(zhì)量濃度的食鹽還能凈化水質(zhì)，促進(jìn)魚類分泌黏液降低應(yīng)激性，刺激食欲等[20]。本試驗(yàn)中食鹽對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度為6600 mg/L，是梭鱸(Luciopercalucioperca)魚種安全質(zhì)量濃度(980.020 mg/L)[21]的7倍，是金魚(Carassiusauratus)幼魚安全質(zhì)量濃度(704.2 mg/L)[22]的9倍。當(dāng)食鹽的質(zhì)量濃度達(dá)到22 913 mg/L，花鰻鱺幼魚的24 h死亡率僅為13.3%，說(shuō)明花鰻鱺對(duì)鹽度的耐受性很強(qiáng)，生產(chǎn)上多用食鹽防治花鰻鱺爛尾、爛鰓等常見疾病。但高質(zhì)量濃度的食鹽易導(dǎo)致魚體脫水、體表黏液脫落，降低魚體對(duì)病原的抵抗力[23]，生產(chǎn)上的使用量不宜過(guò)高。

3.4 二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚的毒性作用

二氧化氯是近年來(lái)養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用較多的廣譜殺菌消毒劑，逐漸代替了漂白粉、二氯異氰尿酸鈉和三氯異氰尿酸鈉等消毒劑[24]，具有高效、低毒、無(wú)殘留等特點(diǎn)，主要用于水體的消毒[9]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚的急性毒性最強(qiáng)，其安全質(zhì)量濃度為0.45 mg/L，與黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)魚種(0.51 mg/L)[25]和金魚的安全質(zhì)量濃度(0.48 mg/L)[26]非常相近，遠(yuǎn)低于泥鰍(232 mg/L)[27]。但在微增氧的條件下，二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚的毒性有明顯的時(shí)效性，2 h內(nèi)花鰻鱺幼魚出現(xiàn)大量死亡，4 h后恢復(fù)穩(wěn)定，更換藥液后又開始死亡，該現(xiàn)象與張耀武等[25,28]觀察到的黃顙魚魚種和日本黃姑魚(Nibeajaponica)幼魚的現(xiàn)象相似，這可能是由于藥物的揮發(fā)和不穩(wěn)定性引起的。

4 結(jié) 論

化學(xué)藥物對(duì)魚類毒性等級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)其半致死質(zhì)量濃度劃分為4級(jí)：96 h半致死質(zhì)量濃度小于0.1 mg/L為劇毒，0.1～1.0 mg/L為高毒，1.0～10.0 mg/L為中毒，大于10.0 mg/L為低毒[29]。據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，高錳酸鉀和二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚屬于中毒藥物，甲醛和食鹽對(duì)花鰻鱺幼魚屬于低毒藥物。

本次試驗(yàn)結(jié)果表明，高錳酸鉀和甲醛對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度接近生產(chǎn)中常用量，有一定的風(fēng)險(xiǎn)，故在使用時(shí)需控制好用量和用藥時(shí)間；食鹽對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度高于常用量，在花鰻鱺養(yǎng)殖過(guò)程中可放心使用；二氧化氯對(duì)花鰻鱺幼魚的安全質(zhì)量濃度高于廠家推薦的使用量，但對(duì)花鰻鱺幼魚有較強(qiáng)的致死效應(yīng)，建議水體消毒2 h后再放入魚苗。但在生產(chǎn)中，要結(jié)合實(shí)際情況給藥，密切觀察魚的活動(dòng)情況，確保用藥的安全性和有效性。

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