“以俞調(diào)樞”法對(duì)Cajal間質(zhì)細(xì)胞缺失模型大鼠胃腸動(dòng)力學(xué)主要指標(biāo)的影響

陳峭，謝勝，周曉玲，稅典奎，覃婧，侯秋科，顏春艷，劉珊，劉禮劍，覃鳳傳，劉瑩，梁夢(mèng)月

本文創(chuàng)新點(diǎn)：

（1）本研究初步闡明了“以俞調(diào)樞”法可能通過(guò)調(diào)節(jié)血液中腦腸肽來(lái)達(dá)到促進(jìn)胃動(dòng)力的目的，為進(jìn)一步拓寬該技術(shù)的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)理論依據(jù)。（2）“以俞調(diào)樞”法是通過(guò)何種途徑調(diào)節(jié)腦腸肽的變化，仍有待進(jìn)一步深入研究。

“以俞調(diào)樞”法是指以足太陽(yáng)膀胱經(jīng)背俞指針療法調(diào)理臟腑氣機(jī)升降之樞紐的中醫(yī)外治療法［1］，該療法能夠明顯改善患者胃腸道動(dòng)力，對(duì)胃食管反流?。?］、功能性消化不良［3］、腸易激綜合征［4］、慢傳輸型便秘［5］等胃腸動(dòng)力障礙相關(guān)性疾病均具有良好的臨床療效?！耙杂嵴{(diào)樞”法是如何影響胃腸道動(dòng)力學(xué)的改變呢。本研究擬通過(guò)觀察“以俞調(diào)樞”法干預(yù)Cajal間質(zhì)細(xì)胞（ICC）缺失模型大鼠后其胃腸動(dòng)力學(xué)主要指標(biāo)的變化情況，探索該療法改善胃腸動(dòng)力學(xué)可能的作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2016年1—12月，選取清潔級(jí)SD大鼠120只，體質(zhì)量（200±20）g，雌雄各半。SD大鼠由廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（動(dòng)物許可證號(hào)SCXK桂2014-0002），普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2周。

1.2 試劑儀器與主要試劑 抗干細(xì)胞因子受體單克隆抗體（Anti-Mouse CD117 Purified）、烏拉坦，胃動(dòng)素、胃泌素、血管活性腸肽、生長(zhǎng)抑素放射免疫藥盒、抑肽酶、乙二胺四乙酸二鈉等（由南京東極生物科技有限公司提供）。

1.3 營(yíng)養(yǎng)性半固體糊的制備 取羧甲基纖維素鈉10 g溶于蒸餾水250 ml中，加入奶粉16 g、糖8 g、淀粉8 g和活性炭末2 g，攪拌均勻，配制成約300 g的黑色半固體糊狀物300 ml，冰箱4 ℃冷藏，用時(shí)恢復(fù)至室溫。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物分組及干預(yù)方法 將SD大鼠隨機(jī)分為造模組60只和空白組60只。造模組再隨機(jī)分為模型對(duì)照亞組30只和模型治療亞組30只，空白組再隨機(jī)分為空白對(duì)照亞組30只和空白治療亞組30只。

空白對(duì)照亞組，每日固定22 min，不實(shí)施背俞指針治療，連續(xù)14 d；空白治療亞組，每日固定22 min，并實(shí)施背俞指針治療，連續(xù)14 d；模型對(duì)照亞組，每日固定22 min，不實(shí)施背俞指針治療，連續(xù)14 d；模型治療亞組，每日固定22 min，并實(shí)施背俞指針治療，連續(xù)14 d。

1.4.2 造模及給藥

1.4.2.1 ICC缺失模型大鼠的制備 造模組參照J(rèn)ANSSEN等［6］方法制備ICC缺失模型，經(jīng)腹腔隔天注射抗c-Kit單克隆抗體（ACK2）100 μg，共5次。期間觀察大鼠的精神活動(dòng)、飲食情況、糞便性質(zhì)和體質(zhì)量改變等。同時(shí)，根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》［7］的要求，采用8%硫化鈉溶液對(duì)大鼠背部督脈和腹部任脈循行路線進(jìn)行脫毛處理（寬度2.5～3.5 cm）。

1.4.2.2 取穴和指針?lè)椒?選取雙側(cè)足太陽(yáng)膀胱經(jīng)肺俞、心俞、膈俞、肝俞、脾俞及腎俞（穴位的定位根據(jù)中國(guó)針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)指定的動(dòng)物針灸穴位圖譜［8］）進(jìn)行治療：以拇指指腹在每個(gè)穴位按照先點(diǎn)按1 min，后按揉2 min的手法操作，3 min/穴，共18 min，實(shí)際操作時(shí)間約22 min（包含操作過(guò)程中大鼠逃避而未能實(shí)施操作時(shí)間約4 min）。相同穴位按由左至右順序，不同穴位按由下而上順序。推拿手法參數(shù)測(cè)定儀進(jìn)行監(jiān)測(cè)，推拿手法參數(shù)：刺激量以大鼠無(wú)掙扎為度，根據(jù)以往經(jīng)驗(yàn)，按揉垂直力度3.5～4.5 N，點(diǎn)壓垂直力度5～7 N。操作頻率為120～160次/min，1次/d，療程為2周。

1.5 觀察指標(biāo)及測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 胃內(nèi)殘留率及小腸推進(jìn)率的測(cè)定 取材前給予大鼠黑色半固體糊狀物10 ml/kg灌胃處理，30 min后用20%烏拉坦10 ml/kg腹腔麻醉。開(kāi)腹，結(jié)扎胃賁門和幽門，取胃，用濾紙吸干后稱全重，然后沿胃大彎剪開(kāi)胃體，洗去胃內(nèi)容物后擦干，稱凈重。胃全重與胃凈重之差即為胃內(nèi)殘留物質(zhì)量，以胃內(nèi)殘留物與所灌黑色半固體糊狀物質(zhì)量的百分比為胃內(nèi)殘留率。同時(shí)迅速取出小腸，輕輕剝離后直鋪于白紙上，測(cè)量幽門至回盲腸部全長(zhǎng)及幽門至黑色半固體糊狀物前沿的距離。以幽門至黑色半固體糊狀物前沿的距離與幽門至回盲部全長(zhǎng)的百分比為小腸推進(jìn)率。

1.5.2 胃動(dòng)素、胃泌素、血管活性腸肽和生長(zhǎng)抑素的測(cè)定將治療前后各組大鼠血漿、血清標(biāo)本在測(cè)定前混勻，4 ℃1 500 r/min離心15 min，離心半徑12 cm，取上清液采用放射免疫分析法按說(shuō)明書(shū)在每個(gè)測(cè)定管中依次加入不同稀釋濃度的對(duì)照品、待測(cè)樣品及抗體，4 ℃溫育24～48 h，加入125I標(biāo)記的相應(yīng)抗原，繼續(xù)4 ℃溫育24～48 h后，每管加免疫沉淀劑0.5～0.6 ml，充分混勻，室溫放置20 min后，4 ℃ 3 500 r/min離心20 min，離心半徑12 cm，吸棄上清液，測(cè)定各沉淀管的放射性計(jì)數(shù)，并分別按胃動(dòng)素、胃泌素、血管活性腸肽、生長(zhǎng)抑素酶聯(lián)免疫試劑盒的計(jì)算方法求出相應(yīng)待測(cè)血漿、血清樣本的樣本值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（x ±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率比較 4組大鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型對(duì)照亞組大鼠胃內(nèi)殘留率高于空白對(duì)照亞組，小腸推進(jìn)率低于空白對(duì)照亞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；模型治療亞組大鼠胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率與空白對(duì)照亞組、空白治療亞組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；模型治療亞組大鼠胃內(nèi)殘留率低于模型對(duì)照亞組，小腸推進(jìn)率高于模型對(duì)照亞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表1）。

2.2 各組大鼠胃動(dòng)素、胃泌素比較 4組大鼠胃動(dòng)素、胃泌素比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型對(duì)照亞組大鼠胃動(dòng)素、胃泌素低于空白對(duì)照亞組、模型治療亞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；空白對(duì)照亞組、空白治療亞組大鼠胃動(dòng)素、胃泌素與模型治療亞組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見(jiàn)表2）。

2.3 各組大鼠血管活性腸肽、生長(zhǎng)抑素比較 4各組大鼠血管活性腸肽、生長(zhǎng)抑素比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型對(duì)照亞組大鼠血管活性腸肽、生長(zhǎng)抑素高于空白對(duì)照亞組、模型治療亞組大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；空白對(duì)照亞組、空白治療亞組大鼠血管活性腸肽、生長(zhǎng)抑素與模型治療亞組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見(jiàn)表3）。

3 討論

胃腸動(dòng)力障礙主要是指各種病因引起胃腸道平滑肌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能發(fā)生障礙的病理過(guò)程，常見(jiàn)于胃食管反流病、功能性消化不良、腸易激綜合征、慢傳輸型便秘等胃腸動(dòng)力性疾病，也可見(jiàn)于其他系統(tǒng)疾病如糖尿病胃輕癱、急性重癥胰腺炎及術(shù)后炎性腸麻痹等［6］。研究發(fā)現(xiàn)，隨著生活節(jié)奏的加快、人們精神壓力的加大，胃腸動(dòng)力障礙相關(guān)性疾病的發(fā)病率劇增，且造成相當(dāng)高的醫(yī)療費(fèi)用，已成為現(xiàn)代社會(huì)中一個(gè)主要的醫(yī)療保健問(wèn)題［9］。臨床中有60%～80%的消化道疾病患者最終被確診為胃腸動(dòng)力障礙相關(guān)性疾?。?0］。而當(dāng)前在發(fā)達(dá)國(guó)家每年平均用于研發(fā)促胃腸動(dòng)力藥物的耗資高達(dá)數(shù)十億美元，已有甲氧氯普胺、多潘立酮、西沙比利、莫沙比利、格拉司瓊、替加色羅及伊托必利等藥物相繼應(yīng)用于臨床［11-12］。但臨床使用表明，這些促胃腸動(dòng)力西藥的療效尚欠理想，并且還存在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)及其他不良反應(yīng)［12］。而我國(guó)目前還沒(méi)有開(kāi)發(fā)出理想且具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的胃腸動(dòng)力藥物。因此，探索一種行之有效的改善胃腸動(dòng)力的治療方案具有重大的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)學(xué)價(jià)值。

表1 各組大鼠胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率比較（x±s，%）Table 1 Comparison of the incidence of gastric residue and small intestinal motility rate between the 4 subgroups of rats

表2 各組大鼠胃動(dòng)素、胃泌素比較（x±s，pg/ml）Table 2 Comparison of the mean motilin level and gastrin between the 4 subgroups of rats

表3 各組大鼠血管活性腸肽、生長(zhǎng)抑素比較（x±s，pg/ml）Table 3 Comparison of the mean plasma vasoactive peptide level and stmatostatin between the 4 subgroups of rats

“以俞調(diào)樞”法治療胃腸動(dòng)力障礙有巨大的療效優(yōu)勢(shì)，目前該療法已在全國(guó)150余家醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣應(yīng)用，于2009年被推薦為國(guó)家級(jí)適宜技術(shù)推廣項(xiàng)目，先后獲得2009年度柳州市科技進(jìn)步獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)，2010年度廣西醫(yī)藥衛(wèi)生適宜技術(shù)推廣獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)，2010年度廣西科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)。

背俞穴為臟腑之氣轉(zhuǎn)輸于背腰部并流注于全身的樞紐區(qū)域［13］，與五臟六腑有著直接的聯(lián)系，故以指針刺激背俞穴能直接調(diào)整臟腑功能的盛衰［14］。而胃腸動(dòng)力障礙相關(guān)性疾病多以胃脘痛、胃痞、反酸、便秘等為主要表現(xiàn)，氣機(jī)升降功能失調(diào)為其主要病機(jī)。肺為氣之主，腎為氣之根，脾胃為氣機(jī)升降的樞紐，肝主疏泄、條暢氣機(jī)，五臟六腑同氣機(jī)的正常運(yùn)行均密切相關(guān)。經(jīng)絡(luò)是氣機(jī)升降出入的通路，五臟六腑之氣通過(guò)十二經(jīng)脈相互溝通，共同維系人體氣機(jī)正常的運(yùn)行［15］。而督脈為陽(yáng)脈之海，任脈為陰脈之海，唯有任督二脈在走行上與十二經(jīng)脈相互交通，共同參與了十二經(jīng)脈的全身氣血循行。督升任降，任督二脈的經(jīng)氣運(yùn)行調(diào)和，環(huán)周有序，升降有常，這正是脾胃等臟腑氣機(jī)正常運(yùn)行的基礎(chǔ)［15］。因此，任督二脈經(jīng)氣升降交通不利可能是導(dǎo)致臟腑氣機(jī)升降失衡的根本原因，并最終導(dǎo)致胃腸道平滑肌運(yùn)動(dòng)功能的障礙，而“以俞調(diào)樞”法能夠通過(guò)改善任督二脈經(jīng)氣的運(yùn)行，進(jìn)而起到改善胃腸動(dòng)力的作用。

現(xiàn)代神經(jīng)胃腸病學(xué)研究也表明，胃腸運(yùn)動(dòng)受大腦支配和腸神經(jīng)系統(tǒng)共同支配調(diào)控［16］。在生理情況下，胃腸激素（主要是指腦腸肽）可通過(guò)中樞神經(jīng)系統(tǒng)及胃腸平滑肌細(xì)胞系統(tǒng)共同調(diào)節(jié)胃腸的運(yùn)動(dòng)。根據(jù)不同腦腸肽成分對(duì)胃腸道平滑肌細(xì)胞的收縮或舒張效應(yīng)的不同，可將其分為興奮性腦腸肽和抑制性腦腸肽［17-19］。其中，起興奮作用的主要腦腸肽為胃動(dòng)素、胃泌素，起抑制作用的主要腦腸肽為生長(zhǎng)抑素、血管活性腸肽［20］。本研究表明，ICC缺失模型大鼠可以復(fù)制胃腸動(dòng)力低下的大鼠模型，影響大鼠的胃腸動(dòng)力，表現(xiàn)為胃內(nèi)殘留率增加和小腸推進(jìn)率下降，與相關(guān)研究結(jié)果一致［21-22］。而“以俞調(diào)樞”法能夠使ICC缺失模型大鼠胃內(nèi)殘留率顯著降低，小腸推進(jìn)率顯著升高，進(jìn)一步研究表明，ICC缺失模型大鼠胃動(dòng)素、胃泌素顯著下降，血管活性腸肽和生長(zhǎng)抑素顯著升高，而采用“以俞調(diào)樞”法干預(yù)后，其胃動(dòng)素、胃泌素顯著升高，血管活性腸肽和生長(zhǎng)抑素顯著降低。因此，可以推論：“以俞調(diào)樞”法能夠提供增加胃腸動(dòng)力低下大鼠血液中的胃動(dòng)素、胃泌素，同時(shí)又可以降低其血液中生長(zhǎng)抑素、血管活性腸肽，從而達(dá)到改善胃腸動(dòng)力的作用。

綜上所述，“以俞調(diào)樞”法具有顯著改善胃動(dòng)力的作用，其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)血液中腦腸肽來(lái)達(dá)到促胃腸動(dòng)力的目的，為進(jìn)一步拓寬該技術(shù)的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)的理論依據(jù)。至于“以俞調(diào)樞”法是通過(guò)何種途徑調(diào)節(jié)腦腸肽的變化，仍有待進(jìn)一步深入研究。

作者貢獻(xiàn)：陳峭進(jìn)行了文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，撰寫(xiě)論文；謝勝、稅典奎進(jìn)行科研技術(shù)指導(dǎo)和文章的可行性分析；覃婧、侯秋科、顏春艷、劉珊、劉禮劍進(jìn)行資料收集與數(shù)據(jù)整理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；覃鳳傳、劉瑩、梁夢(mèng)月進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作與指標(biāo)的檢測(cè)；周曉玲進(jìn)行了論文的修訂與英文的修訂及文章的質(zhì)量控制及審校。

本文無(wú)利益沖突。

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