蓮心總堿對(duì)脂多糖/D-氨基半乳糖誘導(dǎo)急性肝衰竭小鼠肝臟炎癥反應(yīng)的緩解作用

張 浪，郝 吉，黃 旭，吳超群，馮天輝，舒廣文*

（中南民族大學(xué)藥學(xué)院 民族藥學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，湖北 武漢 430074）

急性肝衰竭（acute liver failure，ALF）是由多種因素引起的肝功能嚴(yán)重失衡。在ALF狀態(tài)下，肝細(xì)胞壞死、肝臟血管通透性增加、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞向肝臟滲透[1]。ALF是一種發(fā)病率高、病理機(jī)制復(fù)雜的器官功能衰竭性疾病。在ALF過程中，壞死的細(xì)胞激活巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞，導(dǎo)致一系列炎癥因子的聯(lián)級(jí)釋放，如腫瘤壞死因子-α（tumor nuclear factor，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和IL-6等[2-3]。TNF-α本身具有細(xì)胞毒性，可直接或間接引起肝損傷，是參與機(jī)體炎癥反應(yīng)過程的主要因子。因此，TNF-α與肝細(xì)胞損傷以及肝臟炎癥反應(yīng)等一系列病理過程密切相關(guān)[4-6]。IL-1β和IL-6可誘導(dǎo)其他炎性細(xì)胞因子的合成，促發(fā)炎癥聯(lián)級(jí)效應(yīng)，在局部和全身性炎癥反應(yīng)中起著重要作用[7]。這些炎癥因子在ALF發(fā)生和發(fā)展的過程中扮演了重要角色。

蓮心是睡蓮科蓮屬植物蓮（Nelumbo nucifera）成熟種子的綠色胚芽。其味苦、性寒，歸心、肺、腎三經(jīng)，具有清心、止血、澀精、安神之功效。蓮心富含生物堿，具有減輕脂質(zhì)過氧化損傷，保護(hù)肝組織等功效[8-9]。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）/D-氨基半乳糖（D-galactosamine，GalN）（LPS/GalN）聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠ALF是實(shí)驗(yàn)研究中常用的ALF動(dòng)物模型[10]。前期研究發(fā)現(xiàn)，蓮心總堿（total alkaloids from the seed embryos of Nelumbo Nucifera，TAENN）能有效緩解LPS/GalN聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠ALF[11]。肝臟炎癥反應(yīng)是ALF的關(guān)鍵性病理基礎(chǔ)之一。因此，本研究進(jìn)一步在ALF模型小鼠的肝臟中探討了TAENN對(duì)炎癥因子與炎性介質(zhì)釋放的抑制作用，分析了TAENN對(duì)炎性信號(hào)通路的干預(yù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

昆明種雄性小鼠（8 周齡），體質(zhì)量18～22 g湖北省疾病預(yù)防控制中心。SPF級(jí)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（鄂）2015-0018，實(shí)驗(yàn)單位使用許可證編號(hào)：SYXK（鄂）2014-0078。

用于T N F-α、I L-1 β、I L-6和前列腺素E2（prostaglandine E2，PGE2）含量測(cè)定的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒南京建成生物技術(shù)研究所。Griess法一氧化氮（nitric oxide，NO）含量測(cè)定試劑盒 武漢博士德生物工程有限公司；誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、環(huán)氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）、p65蛋白、Ser536磷酸化的p65蛋白、β-actin抗體 英國(guó)Abcam公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Trizol試劑盒碧云天生物技術(shù)研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

MK3酶標(biāo)儀 美國(guó)Thermo公司；JM 250電泳儀大連捷邁科貿(mào)有限公司；7300熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀 美國(guó)ABI公司。

1.3 方法

1.3.1 TAENN的制備

TAENN的制備方法參見文獻(xiàn)[12]。取干燥蓮子心（1 kg），粉碎，過4號(hào)篩，用體積分?jǐn)?shù)90%乙醇溶液提取，回流后再進(jìn)行蒸發(fā)濃縮得濃縮液。濃縮液用體積分?jǐn)?shù)5%鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至1～2，然后用正己烷萃取，棄有機(jī)相、保留水相。水相用氨水堿化，使pH值保持在9～10；再用氯仿萃取，取有機(jī)相、棄水相，蒸干溶劑，真空干燥的淡黃色粉末（14.5 g）。據(jù)文獻(xiàn)[13]的方法進(jìn)行定性分析，取適量黃色粉末溶于甲醇中，經(jīng)薄層色譜（thin layer chromatography，TLC）檢測(cè)，置于紫外燈（365 nm）下顯藍(lán)色熒光，即為生物堿類化合物。參照文獻(xiàn)[14]的方法，將TAENN溶于甲醇，在282 nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液吸光度，參比蓮心堿對(duì)照品，得TAENN的生物堿含量為92.5%。

1.3.2 動(dòng)物分組與給藥條件

將40 只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為4 組（正常對(duì)照組、模型組和TAENN高、低劑量組），每組10 只。TAENN高、低劑量組的給藥劑量分別為100、30 mg/kg，給藥途徑為灌胃。正常對(duì)照組和模型組均灌胃給予等體積的生理鹽水。連續(xù)給藥2 周，每日1 次。

1.3.3 動(dòng)物模型建立與樣本制備

末次給藥后，各組小鼠禁食不禁水24 h。除正常對(duì)照組外，各組小鼠腹腔注射劑量為10 μg/kg LPS和700 mg/kg CalN建立ALF模型。

LPS/GalN腹腔注射6 h后，采集各組小鼠眼眶血，脫頸椎處死，迅速解剖摘取肝臟。眼眶血于4 ℃、3 000 r/min條件下離心15 min，分離血清，置于-80 ℃條件下保存?zhèn)溆?。肝臟迅速置于-80 ℃冰箱中備用。

1.3.4 炎癥因子和炎癥介質(zhì)含量的測(cè)定

用相應(yīng)的ELISA試劑盒對(duì)血清與肝組織中TNF-α、IL-1β和IL-6水平進(jìn)行檢測(cè)。用試劑盒檢測(cè)肝臟組織中NO水平。操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.5 實(shí)時(shí)PCR測(cè)定肝臟組織中TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2的基因表達(dá)

取50 mg肝臟組織，參照Trizol試劑盒說明書，提取總RNA。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA純度和濃度。取3 μg總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄操作參照轉(zhuǎn)錄試劑盒。反轉(zhuǎn)錄后的cDNA保存于-20 ℃?zhèn)溆?。采用?shí)時(shí)PCR對(duì)TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS和COX-2的基因表達(dá)進(jìn)行分析。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性10 min；然后按以下程序運(yùn)行40 循環(huán)：95 ℃、10 s；60 ℃、30 s；72 ℃、20 s。反應(yīng)結(jié)束后，以GAPDH為內(nèi)參，采用2-??t法[12]，計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。所使用引物購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所，引物序列如表1所示。

表1 實(shí)時(shí)PCR目的基因及引物序列Table1 Primers for the analysis of target genes by real-time PCR in this study

1.3.6 免疫印跡法

取肝臟組織30 mg，加入適量細(xì)胞裂解液，充分研磨，得肝臟總蛋白抽提物。離心收集上清液中的細(xì)胞蛋白，用二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）法測(cè)定蛋白質(zhì)量濃度。蛋白質(zhì)經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分離后，轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜，用脫脂乳粉封閉PVDF膜2 h，然后將膜與特異性針對(duì)iNOS、COX-2、p65蛋白、磷酸化p65蛋白和β-actin的一抗共同振蕩孵育過夜。洗凈一抗后，加入相應(yīng)酶標(biāo)二抗，室溫條件下振蕩孵育2 h，洗凈。用ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒進(jìn)行發(fā)光顯影，用Image J2x軟件對(duì)蛋白條帶進(jìn)行掃描和定量分析。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

2 結(jié)果與分析

2.1 TAENN對(duì)ALF小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量的影響

表2 TAENN對(duì)ALF小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量的影響Table2 Effect of TAENN on TNF-α, IL-1βand IL-6 levels in serum of ALF mice

TNF-α、IL-1β和IL-6是常見的炎癥因子。由表2可知，與正常組比較，ALF模型組小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量均極顯著升高（P＜0.01）。與模型組相比，TAENN劑量依賴性地下調(diào)ALF小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量（P＜0.01）。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，在ALF模型小鼠中，血清炎癥因子水平明顯提高，TAENN可緩解這一病變。

2.2 TAENN對(duì)ALF小鼠肝臟中TNF-α、IL-1β和IL-6含量的影響

由表3可知，與正常組比較，ALF模型組小鼠肝臟中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量均明顯升高（P＜0.01）。與模型組相比，TAENN組小鼠肝臟中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量極顯著降低（P＜0.01）。以上研究結(jié)果顯示，在ALF模型小鼠中，肝臟炎癥因子的含量顯著增加，TAENN劑量依賴性地降低了ALF小鼠肝臟中的炎癥因子含量。

表3 TAENN對(duì)ALF小鼠肝臟中TNF-α、IL-1β和IL-6含量的影響Table3 Effect of TAENN on TNF-α, IL-1βand IL-6 contents in livers of ALF mice

2.3 TAENN對(duì)ALF小鼠肝臟中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表達(dá)的影響

炎癥因子編碼基因的轉(zhuǎn)錄是決定炎癥因子水平的關(guān)鍵因素。如圖1所示，與正常組比較，ALF模型組小鼠肝臟中TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)水平均極顯著增加（P＜0.01）。TAENN劑量依賴性地抑制了ALF模型小鼠肝臟中這些炎癥因子編碼基因的轉(zhuǎn)錄（P＜0.01）。以上研究結(jié)果提示，在ALF小鼠模型的肝臟中，炎癥因子編碼基因的轉(zhuǎn)錄水平明顯高于正常組；TAENN能有效抑制ALF小鼠肝臟中炎性因子基因的轉(zhuǎn)錄。

圖1 TAENN對(duì)ALF小鼠肝臟TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA相對(duì)表達(dá)水平的影響Fig.1 Effect of TAENN on mRNA expression levels of TNF-α, IL-1β and IL-6 in livers of ALF mice

2.4 LPS/GalN處理對(duì)小鼠肝臟炎癥介質(zhì)和NF-κB信號(hào)通路的影響

圖2 正常組和模型組小鼠肝臟中NO和PGE2相對(duì)含量的變化Fig.2 Change in NO and PGE2 relative contents in livers of mice from normal and model groups

圖3 正常組和模型組小鼠肝臟中iNOS和COX-2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平的變化Fig.3 Change in mRNA relative expression levels of iNOS and COX-2 in livers of mice from normal and model groups

圖4 正常組和模型組小鼠肝臟中iNOS、COX-2蛋白相對(duì)表達(dá)及NF-κB p65蛋白536位絲氨酸磷酸化水平的變化Fig.4 Change in protein relative expression levels of iNOS and COX-2 proteins and the phosphorylation of NF-κB p65 at Ser536 in livers of mice from normal and model groups

由圖2～4可知，與正常組相比，模型組小鼠肝臟組織中NO、PGE2等炎癥介質(zhì)相對(duì)含量增加明顯（P＜0.01）；iNOS和COX-2分別是在NO和PGE2合成過程中起到關(guān)鍵作用的酶。iNOS、COX-2的mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01）；不僅如此，在模型組中p65蛋白的磷酸化水平亦明顯上升（P＜0.0 1）。以上結(jié)果提示，核轉(zhuǎn)錄因子-κ B（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）信號(hào)通路激活與炎癥介質(zhì)分泌在LPS/GalN聯(lián)合誘導(dǎo)肝臟炎癥反應(yīng)的過程中起到重要作用。

2.5 TAENN對(duì)ALF小鼠肝臟中NO、PGE2含量的影響

圖5 TAENN對(duì)ALF小鼠肝臟中NO和PGE2相對(duì)含量的影響Fig.5 Effect of TAENN on the relative contents of NO and PGE2 in livers of ALF mice

由圖5可知，與模型組相比，TAENN組小鼠肝臟中NO和PGE2的相對(duì)含量顯著降低。降低程度與給藥劑量呈正相關(guān)關(guān)系。TAENN各劑量組數(shù)據(jù)差異極顯著（P＜0.01）。以上結(jié)果說明，TAENN能有效降低ALF小鼠肝臟中炎癥介質(zhì)的含量。

2.6 TAENN對(duì)ALF小鼠肝組織iNOS、COX-2 mRNA和蛋白表達(dá)的影響

圖6 TAENN對(duì)ALF小鼠肝臟中iNOS和COX-2 mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響Fig.6 Effect of TAENN on mRNA transcription levels of iNOS and COX-2 in livers of ALF mice

圖7 TAENN對(duì)ALF小鼠肝臟中iNOS、COX-2蛋白相對(duì)表達(dá)及NF-κB p65蛋白536位絲氨酸磷酸化水平的影響Fig.7 Effect of TAENN on the relative expression levels of iNOS and COX-2 proteins and the phosphorylation of NF-KB p65 Ser536 in livers of ALF mice

由圖6～7可知，TAENN劑量依賴性地抑制了ALF小鼠肝臟中iNOS和COX-2基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)，差異極顯著（P＜0.01）。NF-κB信號(hào)通路可調(diào)控iNOS和COX-2等炎性介質(zhì)基因的表達(dá)，在調(diào)控炎癥反應(yīng)過程中起到了關(guān)鍵性作用[15-16]。TAENN劑量依賴性地下調(diào)了ALF模型小鼠肝臟中p65蛋白的磷酸化水平（P＜0.01）。以上研究結(jié)果提示，TAENN可通過抑制NF-κB而下調(diào)炎癥介質(zhì)相關(guān)基因的表達(dá)，這些分子事件與TAENN與LPS/GalN聯(lián)合誘導(dǎo)小鼠肝臟ALF反應(yīng)的緩解作用密切相關(guān)。

3 討 論

ALF的發(fā)生過程中，常伴隨炎癥反應(yīng)的爆發(fā)[17]。炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生促進(jìn)炎癥因子的分泌，與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)[18-19]；同時(shí)，某些炎癥介質(zhì)具有細(xì)胞毒性，高濃度時(shí)可直接導(dǎo)致細(xì)胞損傷甚至器官衰竭[20]。iNOS在內(nèi)毒素等刺激下，可催化產(chǎn)生NO[21-22]，NO可以通過NO/cGMP信號(hào)通路上調(diào)COX-2表達(dá)；iNOS能與COX-2結(jié)合，增加COX-2的活性[23-24]；COX-2可催化PGE2的合成[25]，促進(jìn)iNOS的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ALF模型組小鼠肝臟中NO和PGE2的含量升高明顯；iNOS和COX-2基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯顯著增加；同時(shí)，炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6的釋放量增加。Huang等[26]發(fā)現(xiàn)蓮子心能降低LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥中PGE2的分泌；Lin等[27]則發(fā)現(xiàn)蓮子心能緩解LPS誘導(dǎo)的全身性炎癥反應(yīng)。本研究表明，經(jīng)TAENN處理后，ALF模型小鼠肝臟中NO和PGE2含量明顯降低，進(jìn)一步支持了蓮子心的抗炎活性。

NF-κB信號(hào)通路調(diào)控炎癥因子和炎癥介質(zhì)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，在炎癥反應(yīng)過程中起到了重要作用[28-29]。p65蛋白是NF-κB的典型成員，當(dāng)p65蛋白上536位絲氨酸被磷酸化時(shí)，p65蛋白的轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)活性增強(qiáng)[30-31]。實(shí)驗(yàn)中模型組p65蛋白磷酸化明顯，且iNOS和COX-2蛋白表達(dá)增加。而經(jīng)TAENN處理后，ALF小鼠肝臟中p65蛋白536位絲氨酸磷酸化水平降低；TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS和COX-2等NF-κB下游基因的表達(dá)水平也被明顯下調(diào)。這些研究結(jié)果提示，TAENN可通過抑制NF-κB降低炎癥相關(guān)因子的含量水平，保護(hù)肝臟組織免遭其侵害。

綜上所述，在LPS/GalN誘導(dǎo)ALF小鼠的肝臟內(nèi)，TAENN能夠抑制NF-κB信號(hào)通路，減少炎癥介質(zhì)的表達(dá)與釋放，從而緩解肝臟炎癥反應(yīng)。這些研究結(jié)果進(jìn)一步提示，TAENN對(duì)肝臟炎癥反應(yīng)的拮抗作用很有可能在其緩解ALF的過程中扮演了重要角色。

[1] WANG H, LI Y. Protective effect of bicyclol on acute hepatic failure induced by lipopolysaccharide and D-galactosamine in mice[J].European Journal of Pharmacology, 2006, 534(1/2/3): 194-201.DOI:10.1016/j.ejphar.2005.12.080.

[2] 馬虎成, 施曉雷, 丁義濤. 白介素-1β siRNA聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞協(xié)同治療急性肝衰竭[J]. 世界華人消化雜志, 2014, 22(30): 4547-4558. DOI:10.11569/wcjd.v22.i30.4547.

[3] WANG J, LIU Y T, XIAO L, et al. Anti-inflammatory effects of apigenin in lipopolysaccharide-induced inflammatory in acute lung injury by suppressing COX-2 and NF-κB pathway[J]. Inf l ammation,2014, 37(6):2085-2090. DOI:10.1007/s10753-014-9942-x.

[4] 黃曉佳, 李永金, 李靜, 等. 鼠曲草總黃酮抑制疼痛模型小鼠炎癥因子產(chǎn)生而致鎮(zhèn)痛作用[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(21): 240-243.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201421047.

[5] 王嫦鶴, 耿慶光, 王雨軒. 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2012, 37(12): 1809-1813. DOI:10.4268/cjcmm20121224.

[6] 靳海英, 任鋒, 丁美, 等. N-乙酰半胱氨酸對(duì)豬急性肝衰竭血清腫瘤壞死因子-α、白介素-1β的影響[J]. 藥品評(píng)價(jià), 2007, 4(3): 153-156.DOI:10.3969/j.issn.1672-2809.2007.03.008.

[7] SHI X, QIAN T, LI M, et al. Aberrant low expression of A20 in tumor necrosis factor-alpha-stimulated SLE monocytes mediates sustained NF-kappaB inf l ammatory response[J]. Immunol Invest, 2015, 44(5):497-508. DOI:10.3109/08820139.2015.1037957.

[8] 高天嬌, 董蕾, 史海濤, 等. 蓮子心醇提物抗四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2014, 34(12): 1476-1480.DOI:10.7661/CJIM.2014.12.1476.

[9] 劉志勇, 易堅(jiān), 鄒小明. 蓮子心萃取物抑制大鼠肝纖維化的作用機(jī)制研究[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志, 2015, 31(17): 1749-1753.DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2015.17.015.

[10] 張金良, 任懂平, 呂新亮. D-半乳糖胺/脂多糖誘導(dǎo)急性肝衰竭機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2011, 20(9): 761-763; 767.DOI:10.3969/j.issn.1008-5041.2011.09.032.

[11] 張浪, 程卓, 黃旭, 等. 蓮心總堿對(duì)LPS/GalN誘導(dǎo)小鼠急性肝衰竭的保護(hù)作用[J]. 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2 0 1 7,37(7): 240-244. DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmac yj.2017.00.00.1008-5041.2011.09.032.

[12] SHU G W, LING Y, ZHAO W H, et al. Isoliensinine, a bioactive alkaloid derived from embryos of nelumbo nucifera, induces hepatocellular carcinoma cell apoptosis through suppression of NF-κB signaling[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2015,63(40): 8793-8803. DOI:10.1021/acs.jafc.5b02993.

[13] 李希珍. 蓮子心化學(xué)成分及生物活性的研究[D]. 長(zhǎng)春: 吉林大學(xué),2016: 17-20.

[14] 楊小青, 宋金春, 謝順嵐, 等. 不同提取方法蓮子心總生物堿抗氧化活性比較[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2015, 12(18): 100-104.

[15] SCHWANINGER M, INTA I, HERRMANN O. NF-kappaB signalling in cerebral ischaemia[J]. Biochemical Society Transactions, 2006,34(6): 1291-1294. DOI:10.1042/BST0341291.

[16] 劉艷民, 張金良, 曾輝, 等. 中藥及其提取物阻抑脂多糖半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝衰竭的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)肝臟病雜志, 2013, 5(3): 45-48.DOI:10.3969/j.issn.1674-7380.2013.03.015.

[17] 馮芹, 夏文凱, 王現(xiàn)珍, 等. 連翹苷元對(duì)四氯化碳大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2015, 31(3): 426-430. DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.03.026.

[18] SHI Y, LIU T, FU J H, et al. Vitamin D/VDR signaling attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury by maintaining the integrity of the pulmonary epithelial barrier[J]. Molecular Medicine Reports, 2016, 13(2):1186-1194. DOI:10.3892/mmr.2015.4685.

[19] 梁衛(wèi), 梁濤, 張麗玲, 等. 解酒消脂湯對(duì)酒精性脂肪肝保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志, 2014, 30(6): 534-536; 549.DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2014.06.020.

[20] GRIVENNIKOV S I, GRETEN F R, KARIN M. Immunity,inflammation, and cancer[J]. Cell, 2010, 140(6): 883-899.DOI:10.1016/j.cell.2010.01.025.

[21] KIM S F, HURI D A, SNYDER S H. Inducible nitric oxide synthase binds, S-nitrosylates, and activates cyclooxygenase-2[J]. Science,2005, 310: 1966-1970. DOI:10.1126/science.1119407.

[22] 王春梅, 李賀, 李生, 等. 北五味子木脂素對(duì)小鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(13): 262-265. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201413052.

[23] VIATOUR P, MERVILLE M P, BOURS V, et al. Phosphorylation of NF-kappaB and IkappaB proteins: implications in cancer and inf l ammation[J]. Trends in Biochemical Sciences, 2005, 30(1): 43-52.DOI:10.1016/j.tibs.2004.11.009.

[24] DIDONATO J A, MERCURIO F, KARIN M. NF-κB and the link between inf l ammation and cancer[J]. Immunological Reviews, 2012,246(1): 379-400. DOI:10.1111/j.1600-065X.2012.01099.x.

[25] 唐彬, 艾正琳, 姚樹坤. 苦參堿對(duì)高脂-脂肪肝模型大鼠肝臟COX-2、iNOS表達(dá)的影響[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志, 2013, 7(5): 2011-2015.DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2013.05.042.

[26] HUANG C J, WU M C. Differential effects of foods traditionally regarded as ‘heating’ and ‘cooling’ on prostaglandin E(2) production by a macrophage cell line[J]. Journal of Biomedical Science, 2002,9(6): 596-606. DOI:10.1007/BF02254987.

[27] LIN J Y, LAI Y S, LIU C J, et al. Effects of lotus plumule supplementation before and following systemic administration of lipopolysaccharide on the splenocyte responses of BALB/c mice[J].Food and Chemical Toxicology, 2007, 45(3): 486-493. DOI:10.1016/j.fct.2006.09.012.

[28] 李斌, 劉麗平, 郭鴻, 等. 環(huán)氧合酶-2和核因子-κB在膿毒癥大鼠肝損傷中的表達(dá)[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2014, 11(8): 14-18.

[29] LAWRENCE T. The nuclear factor NF-kappaB pathway in inf l ammation[J]. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology, 2009,1(6): a001651. DOI:10.1101/cshperspect.a001651.

[30] BROCHU C, CABRITA M A, MELANSON B D, et al. NF-κB-dependent role for cold-inducible RNA binding protein in regulating interleukin 1β[J]. PLoS ONE, 2013, 8(2): e57426. DOI:10.1371/journal.pone.0057426.

[31] LAI J L, LIU Y H, LIU C, et al. Indirubin inhibits LPS-induced inf l ammation via TLR4 abrogation mediated by the NF-κB and MAPK signaling pathways[J]. Inf l ammation, 2017, 40(1): 1-12. DOI:10.1007/s10753-016-0447-7.