非洲豬瘟病原學、流行病學、診斷及防治進展

于新友，李天芝

（山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

非洲豬瘟（ASF）是由非洲豬瘟病毒（ASFV）引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，臨床上以高熱、皮膚和內(nèi)臟器官廣泛出血、呼吸障礙、神經(jīng)癥狀和高死亡率為特征[1]。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將ASF列為法定報告動物疫病之一，我國將其列為一類動物疫病[2]。病毒能誘導易感動物產(chǎn)生高滴度抗體，但不具備保護作用，目前尚無有效的疫苗進行預防。本文對非洲豬瘟的最新研究進展作以綜述，以期為非洲豬瘟的預防與防控提供參考。

1 病原學

ASFV屬于非洲豬瘟科非洲豬瘟屬病毒。病毒粒子呈二十面體對稱，直徑為175～215 nm[3]。病毒有囊膜，可分為22個不同的基因型，但僅有1個不同的血清型[4]。ASFV在家豬和野豬的白細胞中均能復制，但其在家豬體內(nèi)的復制、傳播及引起淋巴細胞凋亡比野豬要嚴重得多。ASFV的復制起始于細胞核，隨后才在細胞質(zhì)中復制，病毒粒子在氯化銫中的浮密度為119～124 g·cm-3，其基因組由線狀雙股DNA組成，長度為170～190 kb[5]。ASFV病毒在細胞胞漿內(nèi)繁殖，病毒對外界抵抗力強，對腐敗和干燥環(huán)境都有很強的耐受力，在有機質(zhì)存在條件下中，會表現(xiàn)出更強的抵抗力[6]。血液或血清中的病毒在冷藏條件下保存數(shù)年仍具有活性，室溫下可保持活性數(shù)周。病豬的血液與土壤混合在一起，在23℃保持感染力120 d[7]。室溫下的糞便中病毒存活11 d，腐敗血液中存活15周，在凍肉中可存活＞1 000 d，在腌制干火腿中可存活150 d。在溫帶地區(qū)被病毒污染的豬圈需空3個月才能重新養(yǎng)豬。病毒對酸和堿的耐受能力強，在pH為3.9～11.5時病毒都能保持穩(wěn)定，病毒對高溫敏感，60℃20 min可滅活病毒。鄰苯基苯酚、次亞氯酸鈉、碘制劑、苯酚類、福爾馬林、乙醚、氯仿等對病毒具有很好的殺滅作用。

ASFV核酸具有共價的閉合末端、反轉(zhuǎn)重復區(qū)和發(fā)夾結(jié)構(gòu)，可編碼200多種蛋白質(zhì)。其中P54是ASFV的一種結(jié)構(gòu)蛋白，與病毒穩(wěn)定性有關，存在于病毒復制早期，在病毒復制、轉(zhuǎn)染、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性維持上都發(fā)揮著重要作用，是主要免疫原蛋白。P32蛋白在病毒感染早期就能誘導產(chǎn)生抗體，常用于非洲豬瘟的早期診斷。P72是一種非常保守的抗原性蛋白，對自然感染具有免疫原性，重組P72可用于ASFV的診斷。P73蛋白是ASFV主要的抗原性結(jié)構(gòu)蛋白，能夠誘導機體產(chǎn)生中和抗體，而且抗原性極為穩(wěn)定，可作為ASFV的主要診斷試劑。

病毒可接種8日齡雞胚卵黃囊進行培養(yǎng)，兔體適應株，可在6～7 d致死雞胚[8]。大多數(shù)毒病能在豬單核細胞、骨髓細胞和白細胞內(nèi)生長，適應豬腎細胞的毒株也能在牛、腎細胞、BHK-21、和Vero細胞中生長，產(chǎn)生包涵體樣的細胞病變，但某些毒株并不導致細胞病變。

2 流行病學

1921年，肯尼亞首先爆發(fā)ASF，隨后安哥拉、南非、塞內(nèi)加爾、蘇丹和贊比亞等非洲國家均有發(fā)病報道。1957年葡萄牙一養(yǎng)豬場因采用航空公司的航班廢棄物喂豬而感染ASF，從而開啟了該病在非洲之外的國家傳播的歷史，后來ASF也在意大利、法國、比利時和荷蘭等歐洲其他國家流行。1971年，ASF首次傳入南美洲大陸的古巴，此后多米尼加共和國、海地、巴西相繼出現(xiàn)ASF疫情[9]。2007年，ASF疫情經(jīng)輪船泔水傳播到格魯吉亞，然后擴散至阿塞拜疆、亞美尼亞和俄羅斯等國家。2018年8月3日，我國遼寧省沈陽市首次報道了發(fā)生非洲豬瘟疫情。

ASFV可感染家豬、野豬和軟蜱，是唯一的節(jié)肢動物作為傳播媒介的DNA病毒。不能感染小白鼠、豚鼠、貓、狗、山羊、綿羊、牛、馬和鴿子等其他動物，也不能感染人，但病毒在家兔體內(nèi)盲傳26代，對豬仍然有致死性。ASF發(fā)病無明顯季節(jié)性，一年四季均可發(fā)生。各日齡品種的家豬和野豬均易感染。豬群一旦感染后，傳播迅速，發(fā)病率高，致豬群大量死亡，康復豬可長期帶毒，短期內(nèi)也可再次爆發(fā)。豬群發(fā)病后很難根除，但某些野豬感染后不發(fā)病，可長期帶毒排毒。該病主要通過消化道傳播，病毒隨病豬分泌物和排泄物排出體外，污染飼料、飲水及周圍環(huán)境，感染其他健康豬只，也可以通過呼吸道傳播，未經(jīng)煮過的感染豬制品或未煮熟的含病毒的泔水飼喂豬后，也可引起豬感染發(fā)病。軟蜱、虱、蚊、蠅等也可機械傳播該病，ASFV先在上呼吸道增殖，然后由淋巴導管和血流擴散到各器官和淋巴結(jié)，但主要在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)細胞內(nèi)增殖。急性病豬在發(fā)熱前1～2 d就開始通過分泌物和排泄物往外界可排出病毒，發(fā)熱期排毒量達高峰，排毒期至豬只死亡，大量的排毒可能一直持續(xù)到死亡。慢性病豬僅排泄少量病毒，較難傳播病毒。

3 非洲豬瘟診斷方法

3.1 臨床癥狀

非洲豬瘟的潛伏期一般為5～15 d，個別病例可長達28 d[10]。根據(jù)病程長短和臨床癥狀分為最急性型、急性型、亞急性型、慢性型。

3.1.1 最急性型

最急性型常未見任何癥狀突然死亡。

3.1.2 急性型

急性型潛伏期一般4～6 d，臨床表現(xiàn)為體溫突然升高至42℃，稽留熱3～5 d，后體溫下降、精神不振、食欲廢絕、共濟失調(diào)、咳嗽、呼吸急促、四肢及耳部等末稍處皮膚發(fā)紺。眼、鼻有膿性分泌物，眼結(jié)膜嚴重充血，可視黏膜潮紅、發(fā)紺。嘔吐、便秘或腹瀉，糞便中有血液或黏液，鼻或直腸出血。死亡率可高達100%，康復豬終生帶毒，病程一般1～7 d。

3.1.3 亞急性

亞急性臨床癥狀同急性型，潛伏期6～12 d，但癥狀較輕。病死率較低，持續(xù)時間較長。體溫波動無規(guī)律，常＞40.5℃。小豬病死率相對較高，病程5～30 d。感染動物康復后成為病毒攜帶者。

3.1.4 慢性型

慢性型常由急性型轉(zhuǎn)化而來，豬只消瘦、生長發(fā)育遲緩，飼料轉(zhuǎn)化率降低，被毛粗亂，毛色暗淡。體溫39.5～40.5℃，呈不規(guī)則波浪熱。皮膚可見壞死、潰瘍斑塊，呼吸困難、關節(jié)腫脹，死亡率一般不高。病程2～5個月。大部分病豬都能康復，并終身帶毒。懷孕母豬也可表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎。

3.2 病理變化

剖檢與豬瘟類似，病變更為嚴重。急性型、亞急性型一般在耳、鼻、腹下，四肢等身體多部位無毛部分出現(xiàn)界限明顯的紫色斑塊。喉頭、會厭軟骨出血，胸水、腹水量增多，一般呈清晰的黃色，也有可能混有血液。心包有積液，呈黃色或淺紅色。心耳出血，心內(nèi)膜出血。肺小葉間水腫，呈黃色膠樣浸潤。全身各器官廣泛出血，脾臟腫大200%～300%，出血，邊緣鈍園，呈黑色，如凝固的血塊狀，質(zhì)脆。淋巴結(jié)腫大、出血，切面呈大理石樣。腎臟出血，膀胱出血，消化道出血，喉頭出血，肝被膜變厚呈膠凍狀。膽囊腫脹，充滿膽汁，膽囊壁增厚、水腫、膠樣浸潤。慢性型一般表現(xiàn)為消瘦、淋巴結(jié)腫大，部分臟器出現(xiàn)纖維素性炎。

3.3 實驗室診斷

常用的實驗室檢測方法有病毒分離、紅細胞吸附試驗、交叉免疫試驗、直接免疫熒光試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、分子生物學檢測方法等。病毒分離時可將處理后的疑似病料樣品，接種8日齡雞胚卵黃囊，也可以接種豬單核細胞、骨髓細胞和白細胞進行培養(yǎng)。紅細胞吸附試驗的主要原理是ASFV感染病豬血液或組織處理物，接種健康豬白細胞，病毒能在其上生長，并吸附紅細胞，形成玫瑰花狀或桑椹體狀。交叉免疫試驗是對疑似病豬接種豬瘟高免血清或用疑似病豬血液注射免疫豬瘟疫苗的健康豬，如果3 d內(nèi)豬發(fā)病，則表明檢測結(jié)果為陽性。直接免疫熒光試驗主要是將ASF疑似病料樣品，接種單層培養(yǎng)的豬白細胞，加入熒光抗體，進行鏡檢，如細胞出現(xiàn)熒光，則為陽性。ELISA敏感度高，適用于大量樣品的檢測，既可檢測抗原也可抗體，主要用于檢測抗體，一般ASFV感染3～4 d后，即可進行抗體檢測。ASFV分子生物學檢測方法，尤其是熒光RT-PCR檢測方法，敏感性高，特異性好，適合疑似病料樣品的檢測速度檢測。對死亡豬只，要盡快采集病料送實驗室檢測，要保證病料樣品的新鮮度，采集病料部位要正確，ASFV感染8 h后，即可通過PCR從血液中檢到核酸，也可采集脾臟、淋巴結(jié)等進行檢測。隨著技術的發(fā)展，現(xiàn)已有便攜式熒光檢測設備用于現(xiàn)地檢測，大幅提高了檢測效率。

4 防治措施

對ASF目前尚無有效的治療方法，也無有效的疫苗預防，只能采取綜合防控措施。加強生物安全防控，對病豬剖殺，并進行無害化處理，全場做好日常消毒工作，早發(fā)現(xiàn)、早確診，并制定相應的防控措施。我國地域遼闊，橫跨多個氣候區(qū)域，存在適宜蜱蟲生活的環(huán)境，增加了ASFV傳播的風險。隨著國際貿(mào)易、國際交流合作的頻繁，必須重視該病，禁止從有疫情的國家引進種豬、精液，引種時要加強檢疫，嚴防該病的傳入。加強邊境地區(qū)運豬工具的消毒工作，嚴控活豬運輸，做好豬的檢疫工作。嚴格檢查國際旅游者的行李及國外來的包裹，對官方不允許攜帶入境的豬肉制品，進行銷毀。國家進口的豬肉及其制品，要嚴格檢疫，防止病原傳入。在野豬出沒地區(qū)養(yǎng)殖場，飼養(yǎng)管理人員一定要嚴禁家豬和野豬接觸，降低疾病發(fā)生風險。該病爆發(fā)后，應迅速封鎖發(fā)病地，關閉生豬交易市場，撲殺活豬，同時采取病料診斷確診，對被污染的場地、交通工具及周圍環(huán)境要徹底消毒，清除糞便及圈舍表土，堆放30 d后利用。