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    南極磷蝦調(diào)味粉的研制及其感官評(píng)價(jià)

    2018-03-20 05:08:50鄭爽姜曉明王薈凌薛勇李兆杰薛長(zhǎng)湖
    中國(guó)調(diào)味品 2018年3期
    關(guān)鍵詞:磷蝦清液去離子水

    鄭爽,姜曉明,王薈凌,薛勇,李兆杰,薛長(zhǎng)湖

    (中國(guó)海洋大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東 青島 266003)

    1 概述

    南極磷蝦(Euphausiasuperba)是一種生活在南極洲水域的磷蝦。有研究指出南極磷蝦中含有高品質(zhì)蛋白和豐富脂質(zhì)[1,2],含量分別為16.31%和1.3%。富含礦物質(zhì),含量為2.76%,高于日本對(duì)蝦(1.6%)、蛤蜊(2.2%)等多種海產(chǎn)品。其蛋白水解產(chǎn)物包含人體所需的8 種必需氨基酸,其中,谷氨酸含量最高,賴氨酸次之,具有巨大的開發(fā)潛力[3]。南極磷蝦不但營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富,還含有多種活性物質(zhì),如蛋白消化酶、類胞菌素氨基酸等[4]。中國(guó)的南極磷蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展勢(shì)頭良好,將成為世界主要南極磷蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展地之一。

    近年來(lái),人們對(duì)調(diào)味粉的要求已從單一的鮮味型轉(zhuǎn)向復(fù)合的天然風(fēng)味型、營(yíng)養(yǎng)型、功能型。水產(chǎn)品調(diào)味粉因富含氨基酸、多肽、糖、有機(jī)酸、核苷酸等呈味成分和?;撬岬缺=〕煞郑哂歇?dú)特風(fēng)味而備受人們青睞。

    本實(shí)驗(yàn)以冷凍南極磷蝦為原料,采用二段復(fù)合酶解的方式,先用復(fù)合蛋白酶將蛋白質(zhì)水解為多肽片段,再用風(fēng)味蛋白酶去除苦味,增加鮮味。最后經(jīng)過(guò)美拉德反應(yīng)、復(fù)配調(diào)味,制成具有明顯蝦味的南極磷蝦調(diào)味粉。

    2 材料與方法

    2.1 材料與儀器

    2.1.1 材料

    整只南極磷蝦(Euphausiasuperba)冷凍蝦磚由日本水產(chǎn)株式會(huì)社提供,于低溫(≤-30 ℃)冷庫(kù)中經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后置低溫(≤-30 ℃)下貯藏備用。復(fù)合蛋白酶(最適pH 5.5~7.5,1.5 AU/g),購(gòu)于諾維信(中國(guó))生物技術(shù)有限公司;風(fēng)味蛋白酶(最適pH 6.0~7.5,30 U/mg),南寧東恒華道生物科技有限責(zé)任公司;Ca(OH)2、NaOH、NaCl、磷酸、三氯甲烷、甲醇,購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;其他試劑,均為國(guó)產(chǎn)分析純。

    2.1.2 儀器與設(shè)備

    YC-1800實(shí)驗(yàn)型噴霧干燥機(jī) 上海雅程儀器設(shè)備有限公司;CJF-0.05L實(shí)驗(yàn)型高壓反應(yīng)釜 西安常儀儀器設(shè)備有限公司;HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋、JJ-1精密增力電動(dòng)攪拌器 常州國(guó)華電器有限公司;JB-1A型磁力攪拌器 上海精密科學(xué)儀器有限公司;DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;Biochrom 30 型氨基酸自動(dòng)分析儀 英國(guó)Biochrom公司;PF-1型氟電極、232型甘汞參比電極 上海雷磁精密科學(xué)儀器有限公司;PHS-3C型精密酸度計(jì) 上海雷磁儀器廠;GL-20M型高速冷凍離心機(jī) 上海盧湘儀離心機(jī)儀器廠;TDL-5-A型低速大容量離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;5973-6890N型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國(guó)Agilent公司;STARTER 3100型pH計(jì) 美國(guó)Ohaus公司;AB135-S型精密電子分析天平 瑞士Mettler-Toledo公司。

    2.2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.2.1 南極磷蝦調(diào)味粉的制備工藝

    整蝦解凍→一段酶解→二段酶解→脫氟→調(diào)節(jié)pH→美拉德反應(yīng)→噴霧干燥→調(diào)配→成品。

    2.2.2 二段復(fù)合酶解工藝

    將低氟冷凍南極磷蝦整蝦于室溫解凍,加入3倍質(zhì)量的水,攪拌升溫,進(jìn)行酶解反應(yīng)。

    一段酶解:加入0.5%復(fù)合蛋白酶(58 ℃),酶解時(shí)間分別為30,60,75,90,105,120,150 min;再進(jìn)行二段酶解:加入0.4% 風(fēng)味蛋白酶(50 ℃),酶解時(shí)間分別為30,60,75,90,105,120,150,180,210 min。兩段酶解完成后離心(5000 r/min,15 min),取上清,棄渣,得到南極磷蝦酶解上清液。

    2.2.3 脫氟工藝

    向南極磷蝦酶解上清液中加入液體質(zhì)量1% 的Ca(OH)2,室溫下攪拌15 min后,靜置30 min,離心(4500 r/min,20 min),取上清,棄渣,得到南極磷蝦低氟酶解上清液。

    2.2.4 調(diào)節(jié)pH

    向南極磷蝦低氟酶解上清液中滴加食品級(jí)磷酸,邊攪拌邊調(diào)節(jié)液體pH至6.6~6.8,調(diào)節(jié)完成后攪拌15 min,靜置30 min,得到pH適合的南極磷蝦低氟酶解上清液。

    2.2.5 美拉德反應(yīng)

    向pH適合的南極磷蝦低氟酶解上清液中加入9% 的葡萄糖、4%的木糖、4%的酵母抽提物KA66,充分混合均勻后,升溫物料,使之于100 ℃進(jìn)行美拉德反應(yīng),時(shí)間6 min。待降溫后進(jìn)行噴霧干燥。

    2.2.6 噴霧干燥工藝

    將熱反應(yīng)結(jié)束后pH適合的南極磷蝦低氟酶解上清液,置于YC-1800實(shí)驗(yàn)型噴霧干燥機(jī)中,進(jìn)行噴霧干燥。

    2.2.7 單因素實(shí)驗(yàn)

    以鹽、白砂糖、味精、I+G為單因素,結(jié)合感官評(píng)價(jià)確定各因素的最佳用量,得到基本配方。

    2.2.8 復(fù)配調(diào)味工藝

    將噴霧干燥得到的南極磷蝦調(diào)味粉基料按照單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行復(fù)配調(diào)味,并充分混合均勻。

    2.2.9 南極磷蝦調(diào)味粉的基本成分測(cè)定及微生物指標(biāo)檢測(cè)

    2.2.9.1 可溶性固形物含量

    取少量南極磷蝦調(diào)味粉溶于去離子水后,采用高溫干燥法測(cè)定。

    2.2.9.2 蛋白質(zhì)含量

    采用福林酚法測(cè)定。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線后,取少量南極磷蝦調(diào)味粉溶于去離子水,吸取樣液(南極磷蝦調(diào)味粉水溶液)1 mL,加入5 mL甲液(A液∶B液為5∶1,混合均勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。A液:Na2CO310 g,NaOH 2 g,酒石酸鉀鈉0.25 g,溶于500 mL蒸餾水中;B液:CuSO4·5H2O 0.25 g 溶于100 mL去離子水中),靜置10 min;后加入0.5 mL乙液(福林酚試劑),搖勻,靜置30 min,于OD650 nm處測(cè)吸光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白質(zhì)含量。

    2.2.9.3 總脂含量

    采用氯仿-甲醇法提取南極磷蝦調(diào)味粉中的脂肪后,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將氯仿蒸干,準(zhǔn)確稱取旋蒸前后旋蒸瓶的質(zhì)量,計(jì)算出南極磷蝦調(diào)味粉中的脂肪含量即可。

    2.2.9.4 氨基酸態(tài)氮含量

    準(zhǔn)確稱取5 g南極磷蝦調(diào)味粉,加去離子水定容至100 mL,吸取20 mL試液(南極磷蝦調(diào)味粉水溶液),加入去離子水60 mL,用0.05 mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH為8.2,記錄消耗的NaOH體積。向上述pH為8.2的溶液中加入10.00 mL 36%的中性甲醛溶液,再用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH為9.2,記錄消耗的NaOH體積V1,V2。需將試液換成去離子水進(jìn)行空白滴定。

    氟含量:采用高氯酸浸提-氟離子選擇電極法。精確稱取約1 g樣品于容量瓶中,加入10 mL 0.1 mol/L高氯酸消化2 h,加入TISAB 25 mL,用超純水定容至50 mL,以氟離子選擇電極進(jìn)行測(cè)定即可。

    NaCl含量:采用AgNO3滴定法。準(zhǔn)確稱取南極磷蝦調(diào)味粉2~5 g,放置于坩堝中,炭化至無(wú)黑煙,用去離子水將炭化物完全轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中,冷卻后用去離子水定容至250 mL,用濾紙過(guò)濾,作為試液。吸取25~50 mL試液于錐形瓶中,加入酚酞指示劑,用0.01 mol/L Na2CO3或0.01 mol/L HAC調(diào)至pH為7,加入鉻酸鉀指示劑0.5 mL,以0.1000 mol/L AgNO3標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,直至溶液呈現(xiàn)穩(wěn)定的淡橙色。

    菌落總數(shù)的測(cè)定:按GB/T 4789.2-2016的規(guī)定操作[5]。

    大腸菌群的測(cè)定:按GB/T 4789.3-2003的規(guī)定操作[6]。

    致病菌(沙門氏菌、志賀氏菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌)檢驗(yàn):按GB/T 4789.4-2016、GB/T 4789.5-2012、GB/T 4789.7-2013、GB/T 4789.10-2016的規(guī)定操作[7]。

    2.2.10 南極磷蝦調(diào)味粉游離氨基酸測(cè)定[8]

    準(zhǔn)確稱取1.0000 g南極磷蝦調(diào)味粉,加入5 mL、20%的三氯乙酸溶液,均質(zhì)后以三氯乙酸定容至25 mL,用雙層濾紙過(guò)濾后取上清液。將上清液于4 ℃、10000 r/min離心20 min,取離心上清液過(guò)0.22 μm水膜,采用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定。

    2.2.11 南極磷蝦調(diào)味粉揮發(fā)性風(fēng)味成分測(cè)定[9]

    為鑒定南極磷蝦調(diào)味粉的呈味物質(zhì),采用SPME-GC-MS法對(duì)其揮發(fā)性成分進(jìn)行測(cè)定。

    精確稱取0.3 g左右的南極磷蝦調(diào)味粉,逐漸以1 mL超純水完全溶解后,50 ℃水浴下用50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取頭萃取25 min,180 ℃解吸6 min。

    氣相色譜條件:采用HP-5MS (30 m×0.25 mm×0.25 μm)非極性毛細(xì)管柱,升溫程序:初始溫度35 ℃,保持3 min,然后以8 ℃/min的速度升至250 ℃,保持10 min。進(jìn)樣口溫度180 ℃,不分流;載氣為氦氣,流量1.3 mL/min。

    質(zhì)譜條件:電離方式為EI,電子能量70 eV,接口溫度280 ℃,離子源溫度230 ℃,掃描周期2.84 次/s,質(zhì)量掃描范圍(m/z)5。

    2.2.12 南極磷蝦調(diào)味粉的感官評(píng)價(jià)

    表1 感官評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

    3 結(jié)果與分析

    3.1 二段復(fù)合酶解中固形物含量變化

    圖1 二段復(fù)合酶解過(guò)程中固形物含量隨酶解時(shí)間的變化

    由圖1可知,固形物含量隨酶解時(shí)間增加而增加。在一段酶解中,進(jìn)行到150 min時(shí)達(dá)到最高,但由于其與120 min時(shí)的結(jié)果基本持平,綜合成本考慮,確定一段酶解最佳時(shí)間為120 min,此時(shí)固形物含量為9.629%;二段酶解與一段酶解同理,確定二段酶解最佳時(shí)間為180 min,此時(shí)固形物含量達(dá)到16.126%。

    3.2 南極磷蝦調(diào)味粉的基本成分和微生物安全分析結(jié)果

    表2 南極磷蝦調(diào)味粉的基本成分

    由表2可知,南極磷蝦調(diào)味粉是一種富含蛋白、脂質(zhì)適中、低氟安全的調(diào)味品。

    表3 南極磷蝦調(diào)味粉的微生物指標(biāo)

    由表3可知,南極磷蝦調(diào)味粉在微生物特征尤其是常見(jiàn)致病菌方面具有良好的安全性。

    3.3 南極磷蝦調(diào)味粉的游離氨基酸組成分析結(jié)果

    游離氨基酸代表水解物主要的營(yíng)養(yǎng)成分和風(fēng)味物質(zhì),其含量及組成直接影響到產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)和風(fēng)味[10]。Glu、Gly、Ala和Arg均是蝦類典型的呈味氨基酸,Asp則是南極磷蝦特有的呈味氨基酸。Glu可以增加水解的鮮味,而Gly、Ala、Ser、Thr可以增加水解的甜味。

    表4 南極磷蝦調(diào)味粉中游離氨基酸的分析結(jié)果 mg/mL

    由表4可知,南極磷蝦調(diào)味粉中 Lys 含量最高,達(dá)到4.38 mg/mL,同時(shí)富含Glu、Gly、Ala和Arg這些蝦類典型的呈味氨基酸,其中主要呈鮮味的Glu含量達(dá)到了2.39 mg/mL,主要呈蝦味的Gly、Ala和Arg分別達(dá)到了3.29,2.99,4.86 mg/mL,南極磷蝦特有的呈味氨基酸Asp含量達(dá)到了1.45 mg/mL。因此,南極磷蝦調(diào)味粉水溶液中,游離氨基酸種類及含量十分豐富。據(jù)此可知,南極磷蝦調(diào)味粉是一種鮮味和蝦味特征顯著、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高的調(diào)味品。

    3.4 南極磷蝦調(diào)味粉揮發(fā)性風(fēng)味成分分析結(jié)果

    表5 南極磷蝦調(diào)味粉揮發(fā)性風(fēng)味成分的GC/MS鑒定結(jié)果及其含量

    續(xù) 表

    由表5可知,能有效測(cè)定的南極磷蝦調(diào)味粉的揮發(fā)性呈味成分有32種。其中, 3-呋喃甲醇(含氧化合物)、2-乙?;量?、2,3-二氫-3,5-二羥基-6-甲基-4(H)-吡喃-4-酮(吡啶類及含氮化合物)、5-甲基糠醇(醇類)、苯乙醛、苯甲醛、糠醛(醛類)、十六酸乙酯、9-十六碳烯酸乙酯(酯類)、乙酸(酸類)10種揮發(fā)性成分在南極磷蝦調(diào)味粉的呈味成分中起到?jīng)Q定性作用。3-呋喃甲醇、2-乙酰基吡咯、苯乙醛、苯甲醛、十六酸乙酯、糠醛含量明顯高于其他呈味物質(zhì),含量分別為46.29,26.54,21.47,20.03,18.62,17.69 μg/100 g。其次是乙酸、9-十六碳烯酸乙酯、2,3-二氫-3,5-二羥基-6-甲基-4(H)-吡喃-4-酮,含量分別為10.75,8.71,8.23 μg/100 g。

    3.5 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)合感官評(píng)價(jià)結(jié)果

    表6 復(fù)配調(diào)味單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)合感官評(píng)價(jià)結(jié)果

    由表6可知,方案1和方案3由于適口性差,可直接舍去。方案2和方案4感官評(píng)價(jià)類似,但由于方案2中,南極磷蝦調(diào)味粉基料比重過(guò)大,不利于實(shí)際生產(chǎn)中成本的控制,綜上所述,可確定方案4為最佳配方。

    3.6 南極磷蝦調(diào)味粉感官評(píng)價(jià)結(jié)果

    表7 南極磷蝦調(diào)味粉感官評(píng)價(jià)結(jié)果

    由表7可知,南極磷蝦調(diào)味粉在色澤、滋味與氣味、形態(tài)、雜質(zhì)上均有良好表現(xiàn),其色澤呈淺黃褐色,滋味鮮香適口、蝦味濃郁,質(zhì)地細(xì)膩均勻、不結(jié)塊,無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì),感官評(píng)價(jià)總分達(dá)到95分。因此,南極磷蝦調(diào)味粉是一款感官評(píng)價(jià)良好的調(diào)味粉。

    4 結(jié)論

    以冷凍南極磷蝦為原料,結(jié)合傳統(tǒng)調(diào)味粉的制作方法,打破傳統(tǒng)一段酶解的局限,采用高效的二段復(fù)合酶解,綜合單因素實(shí)驗(yàn)與感官評(píng)價(jià)的結(jié)果,最終確定工藝為:以復(fù)合蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的蛋白酶組合作為水解用酶,分段水解5 h后,加入還原糖和呈味物質(zhì),在100 ℃下進(jìn)行美拉德熱反應(yīng) 6 min,復(fù)配調(diào)味后,噴霧干燥。

    通過(guò)該工藝可制備出一種低氟含量、磷蝦特征明顯、風(fēng)味濃郁的調(diào)味粉,解決了當(dāng)下南極磷蝦體內(nèi)氟含量高,不能為人所食用的缺陷。同時(shí)加入的多種呈味物質(zhì),凸顯了南極磷蝦獨(dú)特的蝦味,并在酶解產(chǎn)生風(fēng)味物質(zhì)的前提下,進(jìn)一步增加了調(diào)味粉的鮮香風(fēng)味;復(fù)配調(diào)味工藝中,多種常見(jiàn)的、低成本調(diào)味用品的加入,大大增強(qiáng)了南極磷蝦調(diào)味粉的適口性,為南極磷蝦的進(jìn)一步加工利用提供了有力的技術(shù)支持。

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