HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地西洋參中人參皂苷Rb1、Re、Rg1的含量

張菊 陳茹 何鵬飛 李艷萍 郭世民

摘要：目的 采用高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地西洋參中人參皂苷Rb1、Re 、Rg1的含量，對(duì)比云南麗江西洋參與其他產(chǎn)地西洋參中人參皂苷Rb1、Re 、Rg1的含量差異。方法 C18柱為色譜柱，流動(dòng)相采用乙腈-0.1%磷酸溶液為緩沖液，梯度洗脫，流速為1.1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，柱溫為40℃。精密吸取溶液各10μL注入高效液相色譜儀中測(cè)定。 結(jié)果 人參皂苷Rb1、Re、Rg1在測(cè)定范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，它的平均回收率分別為99.70、101.19、100.27%，RSD分別為2.3、2.1、1.7%。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確可靠、便于操作且重現(xiàn)性好，應(yīng)用性強(qiáng)。不同產(chǎn)地西洋參的化學(xué)成分大致相同，但各含量間卻存在顯著差異，其中吉林靖宇和云南麗江的三種單體皂苷總含量相對(duì)較高。

關(guān)鍵詞：HPLC 西洋參 人參皂苷Rb1、Re 、Rg1

中圖分類號(hào)：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1007-2349（2018）02-0073-02

西洋參P.quinquefolium L.是多年生宿根名貴藥材，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清熱生津的功效，原產(chǎn)于北美洲東部的闊葉林帶，具有與中國(guó)人參較相似的生態(tài)環(huán)境，在生產(chǎn)過程中忌地性極強(qiáng)。上世紀(jì)50年代末，云南省麗江魯?shù)猷l(xiāng)引種東北人參成功，被植物學(xué)家稱之為“北參南移”的創(chuàng)舉，1984年又成功種植了西洋參[1]。目前，這里已經(jīng)成為全中國(guó)黃河以南唯一、也是最大的人參、西洋參種植基地[2]。

本文采用高效液相色譜法對(duì)不同產(chǎn)地西洋參進(jìn)行含量測(cè)定，對(duì)比西洋參含量差異，以期對(duì)引種30年后的云南麗江西洋參資源進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，為麗江西洋參資源的利用和開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

戴安UltiMate3000高效液相色譜儀，精密電子天平BSA223S-CW（北京塞多利斯科學(xué)儀器有限公司），CQ250超聲波清洗器0030（上海超聲波儀器廠）。

人參皂苷 Rg1對(duì)照品、人參皂苷 Re對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，乙腈為色譜純?cè)噭?，水為超純水，其他試劑均為分析純，麗江西洋參藥材采自麗江市玉龍縣魯?shù)猷l(xiāng)某參場(chǎng)，其它西洋參藥材為各產(chǎn)地市售。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Gemini 5u C18 110A，4.6×250mm；Phernomex C18保護(hù)柱，乙腈（A）和0.1%磷酸（B）為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，（0～25min，19%～20%A；25～60min，20%～32%A；60～90min，32%～50%A；90～105 min，50%～19%A），柱溫40℃，流速1.1mL/min，置于203nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。理論板數(shù)按人參皂苷 Rb1 計(jì)算應(yīng)不低于 5 000。對(duì)照品和西洋參樣品圖譜見圖1、圖2。

2.2 對(duì)照品溶液的制備[3] 取人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1，對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含人參皂苷Rg1 0.1mg，人參皂苷Re 0.4mg，人參皂苷Rb1 1mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取西洋參粉末（過三號(hào)篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇溶液50mL，稱定重量，置水浴中加熱回流提取90 min，放冷，再稱定重量，用水飽和的正丁醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25mL，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關(guān)系考察[4] 精密吸取“2.2”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液各 8、10、12、14、16μL進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，以各對(duì)照品的進(jìn)樣量（μL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為人參皂苷Rg1 Y=0.5165x-0.0249（R=0.9999）；人參皂苷Re Y=4.1656x+8.2318（R=1.000）；人參皂苷Rb1 Y=3.6627x-0.2893（R=1.000）。結(jié)果表明，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1分別在0.08～0.16μg、0.32～0.64μg、0.8～1.6μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10、12、24進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1峰面積的RSD值分別為0.15，0.20，0.42%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液10μL，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定峰面積，結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1峰面積的RSD值分別為0.23，0.18，0.30%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取制備好的供試品溶液適量，平均分成6份，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1峰面積的RSD值分別為1.92，0.51，0.72%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn) 取已知含量的西洋參藥材樣品約0.5g，平行6份，精密稱定，分別加入對(duì)照品溶液適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算人參皂苷 Rg1、Re、Rb1的平均加樣回收率分別為99.70、101.19、100.27%，RSD分別為2.3、2.1、1.7%。

2.9 含量測(cè)定 取制備好的供試品溶液適量，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。

3 結(jié)論

本文采用HPLC法對(duì)6個(gè)不同產(chǎn)地西洋參的主要有效成分人參皂甙Rg1、Re、Rb1進(jìn)行含量測(cè)定，依據(jù)2015版《中國(guó)藥典》[3]要求，西洋參中含人參皂苷 Rg1、Re和 Rb1 的總量不得少于2.0%，結(jié)果顯示，6個(gè)產(chǎn)地樣品均符合《中國(guó)藥典》規(guī)定，不同產(chǎn)地西洋參的化學(xué)成分大致相同，但含量卻存在顯著差異，其中美國(guó)西洋參的Rg1含量最高，加拿大西洋參的Re含量最高，吉林靖宇西洋參的Rb1含量最高，吉林靖宇和云南麗江的三種單體皂苷總含量相對(duì)較高。由以上數(shù)據(jù)可知，云南麗江種植的西洋參質(zhì)量極好，引種30年后西洋參質(zhì)量并沒有發(fā)生質(zhì)的變化[5]，為了更好的保護(hù)和利用西洋參資源，云南麗江有必要開展西洋參的育種工作，相關(guān)研究結(jié)果將為云南麗江西洋參的開發(fā)利用提供一定的參考數(shù)據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳宗蓮.西洋參在云南引種初報(bào)[J].云南植物研究，1984，（3）：35.

[2]華模，李秀春.云藥之鄉(xiāng)展風(fēng)采[N].云南日?qǐng)?bào)，2011，01（26）：11.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：131-132.

[4]張丹，吳蘭芳，王乾，等.不同產(chǎn)地西洋參藥材中8種皂苷類成分含量測(cè)定及指紋圖譜研究[J].中藥材雜志，2016，39（10）：2307-2310.

[5]魏曉雨，陳增松，田義新，等.不同產(chǎn)地西洋參總皂苷及單體皂苷Rb1、Re、Rg1的含量測(cè)定[J].人參研究，2016，（5）：40.