非小細胞肺癌組織中TAZ、YAP蛋白表達變化及意義

陳鵬，趙景嵐，魯瑞珍，董紹安，隋英忠(青島市中心醫(yī)院，山東青島266042)

肺癌是臨床常見的惡性腫瘤，在我國肺癌的發(fā)病率和病死率呈上升趨勢，嚴重威脅居民健康[1]。肺癌預后較差，患者5年生存率低于15%[2]。大部分患者確診時已屬晚期。雖然近年來靶向治療、免疫治療不斷發(fā)展，但總生存率仍未有明顯提高。Hippo通路是目前臨床研究的熱點，該通路與細胞增殖和凋亡關系密切[3]。轉錄共激活因子(TAZ)及Yes相關蛋白(YAP)均為Hippo通路的下游效應分子。TAZ是Hippo通路的主要成員，同時也參與了細胞生長與凋亡。TAZ在肺癌組織中存在過表達現(xiàn)象[4]。YAP基因表達升高能夠促進多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展[5]。TAP與YAP的表達變化是否與非小細胞肺癌有內(nèi)在聯(lián)系，目前尚無相關研究。本研究探討TAZ、YAP在非小細胞肺癌中的表達變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集本院2014年10月～2015年10月?lián)衿谑中g的非小細胞肺癌標本60例?；颊咝g前均未經(jīng)任何放化療和免疫治療，男38例、女22例、年齡46～77歲；依據(jù)WHO肺癌分類標準分為鱗癌19例、腺癌41例；TNM分期Ⅰ期28例、Ⅱ期17例、Ⅲ期13例、Ⅳ期2例。癌旁組織樣本取自距離腫瘤組織邊緣2 cm處的正常肺癌組織。標本均經(jīng)常規(guī)HE染色并經(jīng)病理檢查證實診斷。

1.2 組織中TAZ、YAP蛋白表達檢測 采用免疫組化MaxVision法。參照試劑盒說明書進行操作。標本經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋后切片。經(jīng)脫蠟，乙醇脫水，高壓抗原修復。室溫下冷卻，加PBS沖洗，沖洗后孵育加一抗，再次孵育過夜，PBS沖洗，加二抗后再次孵育。PBS沖洗，DAB顯色劑顯色，水洗后蘇木紫復染。用鹽酸酒精分化標本，氨水返藍，常規(guī)乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片后于顯微鏡下觀察。TAZ抗體和YAP兔抗人單克隆抗體、即用型快捷免疫組化MaxVision試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。采用半定量積分法進行結果判定。根據(jù)顯色強度和染色細胞百分比進行評分，無顯色計0分，弱染色(淡黃色)計1分，中染色(棕黃色)計2分，強染色(棕褐色)計3分；染色細胞百分比為0計0分，<10%計1分，10%～50%計2分，51%～80%計3分，>80%計4分。以上兩項分數(shù)相乘<6為低表達、≥6為高表達。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；相關性采用Spearman等級相關進行分析；P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 肺癌組織、癌旁組織中TAZ蛋白表達比較 肺癌組織中TAZ蛋白高表達43例(71.7%)，癌旁組織中TAZ蛋白高表達30例(50.0%)，二者比較差異有統(tǒng)計學意義差異(P<0.05)。41例腺癌組織中TAZ蛋白高表達27例(65.9%)，19例鱗癌組織中TAZ蛋白高表達16例(84.2%)，二者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。45例Ⅰ～Ⅱ期肺癌組織中TAZ蛋白高表達29例(64.4%)，15例Ⅲ～Ⅳ期肺癌組織中TAZ蛋白高表達14例(93.3%)，二者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 肺癌組織、癌旁組織中YAP蛋白表達比較 肺癌組織中YAP蛋白高表達41例(68.3%)，癌旁組織中YAP蛋白高表達25例(41.7%)，二者比較差異有統(tǒng)計學意義差異(P<0.05)。41例腺癌組織中YAP蛋白高表達25例(61.0%)，19例鱗癌組織中YAP蛋白高表達16例(84.2%)，二者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在45例Ⅰ～Ⅱ期肺癌組織中YAP蛋白高表達27例(60.0%)，15例Ⅲ～Ⅳ期肺癌組織中YAP蛋白高表達14例(93.3%)，二者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.3 非小細胞肺癌組織中TAZ與YAP蛋白表達的相關性 根據(jù)Spearman相關分析結果顯示，非小細胞肺癌組織中TAZ與YAP蛋白表達呈正相關(r=0.526，P<0.05)。

3 討論

肺癌是臨床高發(fā)的惡性腫瘤，近年來，其在亞洲國家的發(fā)病率不斷增高[6]。對于肺癌早期診斷和早期治療十分重要。因此對腫瘤分子層面的研究，尤其是對評估腫瘤生物學行為的研究有重要意義。Hippo信號轉導通路是一條重要的抑癌通路，有許多原癌基因和抑癌基因參與其中。Hippo信號轉導通路能夠調(diào)節(jié)細胞增殖和凋亡與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。研究表明，TAZ、YAP與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉移有密切聯(lián)系[7]。也有研究認為，骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展及遠處轉移與TAZ、YAP有關[8]。TAZ、YAP是否也對肺癌有協(xié)同效應，對于了解肺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉移有重要意義，有可能為肺癌的診斷和治療提供新思路。

TAZ是Hippo-TAZ通路的效應分子。TAZ含有轉錄調(diào)控因子結構域，有兩個保守位點的色氨酸殘基模序，能夠與具有PPXY結構的轉錄因子結合，發(fā)揮轉錄激活的作用。已經(jīng)證實在多種腫瘤組織中，TAZ是癌基因，TAZ表達失調(diào)控后，細胞便呈無限增殖狀態(tài)，促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展[9]。肺癌組織中TAZ表達升高，沉默TAZ的表達，肺癌細胞增殖活性受到抑制[10]。有研究[11]表明，非小細胞肺癌患者預后不良與TAZ的高表達有關。本研究結果也表明，肺癌組織中TAZ蛋白表達較癌旁組織高，并且TAZ的高表達與腫瘤臨床分期有關，而臨床分期較晚患者預后差?？梢奣AZ參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展。

TAZ是YAP的旁系同源物，約有50%的同源性，在拓撲結構上十分相似。兩者的功能相似，高度依賴TEAD家族轉錄因子發(fā)揮轉錄活性[12]。人類YAP基因，位于染色體11q22上，相對分子質量約65 kDa。YAP也是Hippo信號轉導通路中的重要信號蛋白，可以調(diào)控細胞分化和凋亡[13]。YAP主要促進細胞生長，阻止細胞凋亡。當YAP活化后，誘導生長因子及凋亡抑制因子過表達，導致細胞惡性轉化。有研究[14]表明，在前列腺癌、肝癌、結腸癌、卵巢癌等腫瘤組織中，YAP的表達較正常組織與癌旁組織高。本研究非小細胞肺癌組織中YAP蛋白表達較癌旁組織高。這與相關文獻[15]報道類似?？梢奩AP參與了肺癌的發(fā)生發(fā)展過程。并且YAP蛋白表達與腫瘤臨床分期有關，分期越晚，其蛋白表達越高。TAZ與YAP同屬Hippo通路下游的效應分子，本研究結果顯示二者存在正相關關系。有研究認為，在Hippo通路的上游，LATS1/2磷酸化受限，導致TAZ與YAP表達同時升高，從而抑制了細胞凋亡，促進了細胞間充質轉化[16]。即因為上游磷酸化的緣故，二者表達呈正相關。另外，在腦膠質瘤的研究中得出，TAZ和YAP的高表達與腦膠質瘤的臨床病理參數(shù)相關，并據(jù)此推測TAZ和YAP可能是同一個癌基因，或TAZ可促進YAP的表達，二者存在協(xié)同關系。

綜上所述，TAZ與YAP在非小細胞肺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。針對這一特點，尋找同時作用于兩者的相關藥物對患者進行干預，有可能抑制腫瘤的惡性轉化。另外，本研究樣本少，還需通過大樣本量的研究得到更為精確的結論。

參考文獻：

[1] 陳萬青，張思維，鄒小農(nóng).中國肺癌發(fā)病病死估計和流行趨勢研究[J]．中國肺癌雜志，2010，13(5)：283-285．

[2] Jemal A, Siegel R, Ward E,et al. Cancer statistics, 2007[J]. CA Cancer J Clin, 2007,57(1):43-46.

[3] 張軍普，許雯，劉向輝.PTEN、E-ed和MMP-9在人腦膠質瘤的表達和意義[J]．山東大學學報(醫(yī)學版)，2010，48(2)：109-112．

[4] Lau AN, Curtis SJ, Fillmore CM, et al. Tumor-propagating cells and Yap/Taz activity contribute to lung tumor progression and metastasis[J]. EMBO J, 2014，33(5)：468-481．

[5] 趙有光，俞光榮.YAP與腫瘤關系的研究進展[J].同濟大學學報(醫(yī)學版)，2013,34(6):133-137,149.

[6] 何艷玲,涂紅纓.miRNA與非小細胞肺癌診治相關性的研究進展[J].山東醫(yī)藥,2017,57(4):110-112.

[7] 賈楠，張迎龍,劉濤,等.YAP和TAZ在骨肉瘤組織中的表達及臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2015,23(22):3330-3333.

[8] Johnson F, Halder G. The two faces of Hippo: targeting the Hippo pathway for regenerative medicine and cancer treatmentl[J]. Nat Rev Drug Discov, 2014,13(1):63-79.

[9] Zhou Z, Hao Y, Liu N, et al. TAZ is a novel oncogene in non-small cell lung cancer[J]. Oncogene, 2011,30(1):2181-2186.

[10] Xie M, Zhang L, He CS, et al. Prognostic significance of TAZ espression in resected non-small cell lung cance[J]. J Thorac Oncol, 2012,7(5):799-807.

[11] Pan D. The Hippo signaling pathway in development and cancer[J]. Dev Cell, 2010,19(4):491-505.

[12] Yu S, Cai X, Wu C, Wu L, et al. Adhesion glycoprotein CD44 functions as an upstream regulator of a network connecting ERK, AKT and Hippo-YAP pathways in cancer progression[J]. Oncotarget, 2015,6(5):2951-2965.

[13] Steinhardt AA, Gayyed MF, Klein AP, et al. Expression of yes-associated protein in common solid tumors[J]. Hum Pathol, 2008,39(11):1582.

[14] Wang YD, Qiu X. Overexpression of yes-associated protein contributes to progression and poor prognosis of non-small-cell lung cancer[J]. Cancer Sci, 2010,101(5):1279-1285.

[15] Pan D. The Hippo signaling pathway in development and cancer[J]. Dev Cell， 2010,19(4)：491-505．

[16] 聶柳，郭洪志，劉興吉,等.YAP和TAZ在老年腦膠質瘤中的表達及臨床意義[J].中國老年學雜志，2015,19(35):5526-5528.