雞血液樣品的采集與制備

唐玉香

（四川省中江縣畜牧局，四川 中江 618100）

1 采血用品

5mL一次性注射器、試管、試管架、75%酒精棉球、干棉球、標(biāo)簽、記號(hào)筆、采樣箱、冰袋、冷藏容器、相關(guān)表格及個(gè)人防護(hù)用品等。

2 采血方法

采血部位與采血方法應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)方法、檢測(cè)項(xiàng)目、所需血量以及雞的日齡等確定。

用血量較少的，如制血液涂片，可刺破雞冠，以吸管或毛細(xì)吸管直接取血；采中等血量可從雞翼下靜脈血管采血，如檢測(cè)血清中禽流感、新城疫抗體效價(jià)；采血量較多的，可從心臟采血，如配制雞紅細(xì)胞懸液。

2.1 雞冠采血法 用針頭刺破雞冠后吸取血液或剪去雞冠尖端后取血。吸取血液時(shí)需擠壓雞冠，一次可吸取30～80μL血液。采雞冠血時(shí)要注意用濃碘酒涂抹采血部位，以防感染。

2.2 頸靜脈采血法 雞左側(cè)頸靜脈較細(xì)，故常于右側(cè)頸靜脈采血。

雞頸部皮膚上的一個(gè)無(wú)毛溝處是右側(cè)頸靜脈所在位置。采血者左手食指和中指夾住雞的頭部，使頭偏向左側(cè)，無(wú)名指、小指和手掌握住雞的軀干，拇指輕壓雞頸椎部使靜脈怒張。采血部位消毒后，采血者右手持注射器抽取血液。采血完畢壓迫傷口止血。15～45日齡的雛雞可采用此法采血，成年雞單人操作較難，且成年公雞皮色較深不易找到血管，故不采用此法采血。應(yīng)注意的是雞頸部皮膚松弛，靜脈游離性大，采血后易形成血腫。

2.3 翅靜脈采血法 翅靜脈采血法是常用的一種采血方法，此法適用于30日齡以上的雞，尤其是成雞。雛雞翅靜脈較細(xì)，若拔去絨羽采血會(huì)造成毛細(xì)血管滲血而不易看清靜脈位置，另外雛雞翅內(nèi)側(cè)皮膚松軟，采血時(shí)容易滾針，造成瘀血，故雛雞不宜用此法采血。

采血時(shí)由助手保定雞只，使其翅膀展開(kāi)，露出腋窩部，并拔掉該處羽毛，拔羽后即可見(jiàn)到一條較粗的靜脈，其遠(yuǎn)心端則是翼下靜脈。采血者左手拇指壓迫血管近心端，待血管怒張后，用裝有針頭的注射器由翼根向翅膀方向平行刺入靜脈，見(jiàn)血液回流后，慢慢回抽針芯抽取血液。抽血?jiǎng)幼鲬?yīng)緩慢，靜脈血管回血流速較慢，若抽血過(guò)快容易導(dǎo)致血管壁塌陷而阻塞針頭，影響采血。采血時(shí)進(jìn)針不宜過(guò)深，針頭切口面應(yīng)向上刺入皮下再刺入血管。采血完畢，采血局部消毒并按壓30 s。如需反復(fù)采血，應(yīng)自遠(yuǎn)心端開(kāi)始采血，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈的采血。

采血前要用酒精棉球消毒采血部位，酒精有擴(kuò)張血管的作用。采血完畢應(yīng)用干棉球壓迫采血部位。酒精會(huì)引起溶血，造成血液凝固不良，故不宜用酒精棉球壓迫止血。

2.4 心臟采血法 心臟采血對(duì)心臟損傷較大，如操作不慎，易引起大出血，特別是雛雞，其常因針頭刺破心臟和肝臟而死亡。同時(shí)心臟的修復(fù)能力差，若采血操作不當(dāng)對(duì)雞的生長(zhǎng)影響較大。此法多用于剖檢前的血液采集，常規(guī)免疫監(jiān)測(cè)中較少使用。心臟采血雖有難度，但采血速度快、采血量多，尤其適用于需血量較多時(shí)。

2.4.1 采雛雞心血 采血可由一人獨(dú)立完成。雞仰臥保定，采血者左手抓雞，右手持采血針平行頸椎從胸腔前口插入針頭，回抽注射器見(jiàn)回血時(shí)，即將針芯向外拉，使血液流入采血針。

2.4.2 采成年雞心血 側(cè)臥法：助手抓住雞的兩翅及兩腿右側(cè)臥保定，采血者在心搏明顯處，或胸骨脊前端至背部下凹處連線的1/2處消毒后，垂直進(jìn)針2～3cm，回抽針管見(jiàn)有回血時(shí)，針芯外拉收集血液。仰臥法：雞仰臥保定，拔去胸上部少許羽毛，用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窩后，右手持針自胸骨上方凹窩斜向前下方心臟方向刺入，邊刺邊抽動(dòng)活塞，若刺入心臟，便有血液涌入注射器。采血完畢，局部消毒。

心臟采血在雞嗉囊空虛時(shí)進(jìn)行較好，一般大雞取30mL心血不致造成死亡。

3 注意事項(xiàng)

3.1 采血前12h雞不要飼喂。

3.2 采血前注射器或盛血容器等應(yīng)消毒、干燥處理。

3.3 采血人員要嚴(yán)格按消毒、防疫規(guī)定操作，口罩、乳膠手套、防護(hù)鞋帽等穿戴整齊后方可入場(chǎng)。

3.4 采血部位要剪毛、清拭并用酒精棉球消毒。采血完畢應(yīng)用干棉球按壓止血。

3.5 做好現(xiàn)場(chǎng)記錄，規(guī)范填寫(xiě)采血表格，包括雞場(chǎng)名稱，雞的品種、日齡，樣品數(shù)量和免疫情況等。樣品做好標(biāo)記，并核對(duì)瓶簽，嚴(yán)防瓶簽損失、混淆和污染。

3.6 應(yīng)根據(jù)檢測(cè)要求采血，一般采血量為2～5mL，有特殊要求的可多量采取。需抗凝的要預(yù)先加入抗凝劑，需分離血清的，試管要靜置、斜放，以便血清析出。

3.7 樣品布點(diǎn)應(yīng)合理，有代表性。一般一個(gè)批次采集15份樣品，每份樣品2～5mL。

3.8 采樣時(shí)應(yīng)做好個(gè)人防護(hù)，避免被雞抓傷和感染人畜共患病。

3.9 采血留下的廢棄物應(yīng)進(jìn)行焚燒或深埋處理。

4 血液樣品制備

4.1 抗凝血制備 采血前真空采血管或其他容器內(nèi)按每10 mL血液預(yù)加入0.1%肝素或3.8%檸檬酸鈉1 mL，或EDTA（乙二胺四乙酸）20mg。血液注入容器后，立即與抗凝劑充分混合，防止溶血和凝固。采集的血液密封后貼上標(biāo)簽冷藏送檢。必要時(shí)，可在每毫升血液中加入青霉素和鏈霉素各500～1000國(guó)際單位。抗凝血經(jīng)過(guò)靜置或2000～3000r/min離心10min后，其上清液為血漿。

4.2 非抗凝血制備 即不加抗凝劑，等血液凝固后析出血清，非抗凝血一般用于血清學(xué)試驗(yàn)。

血清分離方法：將采集的全血轉(zhuǎn)入盛血試管后，于室溫（20～25℃）下傾斜 45°～60°放置 2～4h，血液凝固后自然析出血清，或?qū)⒀红o置0.5 h后，2000～3000r/min 低速離心 5～10min，其上清液即為血清。如離心后有輕微溶血，可挑出血凝塊，將混有紅細(xì)胞碎片的血清再次離心，收集血清，如血清溶血嚴(yán)重，應(yīng)剔出樣品。也可將凝固的血液傾斜放置于冰箱（4℃，約4～8 h），待大量血清析出時(shí)吸出血清，必要時(shí)3000～4000r/min離心3～5min后，吸出血清到另外的離心管中。

每份血清樣品不能少于0.5 mL，樣品應(yīng)封口，貼上標(biāo)簽。

5 血樣保存與送檢

5.1 樣品保存 3d內(nèi)測(cè)定的血清樣品可放置于4℃的冰箱中冷藏保存，待檢時(shí)間超過(guò)3 d的樣品，需-15℃以下冷凍保存。檢驗(yàn)前，樣品須達(dá)到室溫，并顛倒數(shù)次，使血液充分混勻。解凍血清不宜反復(fù)凍融，反復(fù)凍融會(huì)使血清中的脂蛋白和纖維蛋白變性，導(dǎo)致絮狀沉淀物出現(xiàn)。

5.2 血樣送檢 分離到的血液樣品最好在24 h內(nèi)送檢。24 h內(nèi)不能送檢的應(yīng)冷凍。送檢時(shí)要詳細(xì)填寫(xiě)樣品記錄，樣品要密封并加冰袋運(yùn)送。