腎透明細胞癌組織中趨化因子CXC配體3的表達及意義

齊亞靈 李 玥 隋洪玉 楊 哲 逄德志 張澤宇 向 雨 賈琳琳 王偉群

(佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154002)

腎細胞癌(RCC)占成人惡性腫瘤的3%，據(jù)統(tǒng)計該病每年新發(fā)150 000例，病死約為115 000例。RCC中腎透明細胞癌(RCCC)是最常見的亞型，比例高達85%〔1〕。炎癥反應(yīng)在腫瘤中有重要作用，當(dāng)免疫應(yīng)答不能精確地控制炎癥反應(yīng)時，可導(dǎo)致腫瘤細胞周期、DNA修復(fù)和凋亡相關(guān)基因表達的變化，這些變化連同腫瘤微環(huán)境中的炎性細胞、免疫調(diào)節(jié)介質(zhì)等可共同影響腫瘤的進程和轉(zhuǎn)移〔2〕。本實驗探討炎性趨化因子CXC配體(L)3在 RCCC中的重要作用。

1 材料與方法

1.1主要材料及試劑 組織芯片(上海芯超生物有限公司)；兔抗CXCL3單克隆抗體(Immunoway,美國)；免疫組化二抗(SABC)試劑盒(博士德，武漢)；光學(xué)顯微鏡(奧林巴斯,日本)；3，3′-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑(博士德，武漢)。

1.2組織芯片信息 組織芯片包括30例RCCC組織和30例相應(yīng)的癌旁組織。

1.3免疫組織化學(xué)染色 組織芯片常規(guī)脫蠟入水；芯片置于10 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液中(pH6.0)用微波進行抗原修復(fù)20 min；待冷卻后，芯片置于3%過氧化氫中室溫撫育20 min以消除內(nèi)源性過氧化物酶；用正常兔血清室溫封閉20 min，勿洗；滴加兔抗CXCL3單克隆抗體(1∶150)于4℃冰箱撫育過夜； Tris鹽酸緩沖鹽溶液(TBS)清洗芯片3次×5 min;滴加生物素標(biāo)記山羊抗小鼠IgG，37℃撫育30 min；TBS清洗3次×5 min;滴加SABC，37℃撫育30 min；TBS清洗4次×15 min;滴加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑，鏡下觀察染色情況；待出現(xiàn)著色后立即用自來水終止顯色；行蘇木素復(fù)染、分化、脫水及封片。

1.4結(jié)果分析 CXCL3蛋白染色強度用以下兩個參數(shù)評分:(1)染色強度：無染色計0分；輕度染色計1分；中度染色計2分；強染色計3分。(2)陽性細胞百分比：無著色計0分；1/100著色計1分；1/10著色計2分；1/3著色計3分；2/3著色計4分。用兩個參數(shù)得分之和代表CXCL3蛋白表達量。

1.5統(tǒng)計分析 應(yīng)用SPSS19.0軟件進行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1RCCC與癌旁組織CXCL3表達情況 RCCC組織CXCL3表達水平顯著低于癌旁組織；RCCC組織和癌旁組織腎透明細胞癌Ⅲ級組織CXCL3表達水平均顯著高于Ⅱ級(P<0.05)。見表1和圖1。

表1 RCCC與癌旁組織CXCL3表達差異

與Ⅱ級比較：1)P=0.044，2)P=0.037

圖1 CXCL3在RCCC與癌旁組織表達(DAB，×200)

2.2CXCL3表達與RCCC臨床病理參數(shù)關(guān)系 CXCL3表達水平與RCCC臨床病理參數(shù)如腫瘤大小、性別、年齡不具有相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

表2 CXCL3表達與RCCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討 論

腫瘤微環(huán)境(TME)中含有腫瘤細胞及不同類型的多種細胞，這些細胞可經(jīng)細胞間復(fù)雜的信號交流網(wǎng)絡(luò)參與腫瘤進程。在這其中，細胞間相互通訊的重要調(diào)控分子之一就是趨化因子。在TME中，腫瘤相關(guān)宿主細胞和腫瘤細胞會釋放一系列趨化因子，從而招募和激活不同類型的細胞，影響抗腫瘤和促腫瘤之間的平衡。此外，趨化因子也參與腫瘤的其他進程，如腫瘤細胞生長、轉(zhuǎn)移和血管生成等〔3～5〕。

前列腺癌中CXCL3的相關(guān)研究結(jié)果顯示，外源性CXCL3可顯著促進前列腺癌細胞的遷移，但對細胞的增殖沒有影響，進一步研究表明外源性CXCL3可調(diào)節(jié)前列腺癌細胞腫瘤相關(guān)基因細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)、腫瘤蛋白(TP)73、細胞內(nèi)適應(yīng)蛋白(NUMB)、B細胞淋巴瘤/白血病-2相關(guān)X蛋白(BAX)和N-myc下游調(diào)節(jié)蛋白(NDRG)3的表達〔6〕。隨后，應(yīng)用免疫組化實驗觀察到前列腺癌組織中CXCL3蛋白表達量顯著高于非癌組織〔6〕。本研究表明與前列腺癌相同，CXCL3表達量也隨RCCC的發(fā)展和演進而逐漸增高。腫瘤微環(huán)境中的腫瘤上皮細胞、正常上皮細胞、間質(zhì)細胞及趨化炎性細胞可分泌多種趨化因子，它們可經(jīng)自分泌和旁分泌途徑作用于腫瘤細胞膜上的相應(yīng)趨化因子受體而影響腫瘤的增殖和存活〔7〕。本實驗結(jié)果提示CXCL3可能主要由癌旁組織分泌，然后經(jīng)微環(huán)境作用于癌組織的相應(yīng)受體而參與RCCC進程，即在RCCC 中CXCL3可能主要經(jīng)旁分泌途徑發(fā)揮調(diào)節(jié)功能。

1Siegel R，Naishadham D，Jemal A.Cancer statistics〔J〕.Cancer J Clin，2013;63(1):11-30.

2Eiró N，Vizoso FJ.Imflammation and cancer〔J〕.World J Gastrointest Surg，2012;4(3):62-72.

3Chow MT，Luster AD.Chemokines in cancer〔J〕.Cancer Immunol Res，2014;2(12):1125-31.

4齊亞靈，王偉群，張建華，等.CXC 趨化因子配體 5 對前列腺癌細胞生長的作用〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2014;34(11):3035-6.

5曲修勝，劉媛媛，孫華威，等.趨化因子CXC配體12/CXC受體4在前列腺癌細胞的表達及其對細胞增殖的作用機制〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2017;37(7):1568-70.

6Gui SL，Teng LC，Wang SQ.Overexpression of CXCL3 can enhance the oncogenic potential of prostate cancer〔J〕.Int Urol Nephrol，2016;48(5):701-9.

7Balkwill F.Cancer and the chemokine network〔J〕.Nat Rev Cancer，2004;4(7):540-50.