胃泌素釋放肽前體Pro-GRP的研究現(xiàn)狀及進展

，，( 濟南大學(xué) 山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，山東濟南 2507；2 山東大學(xué)附屬山東省腫瘤醫(yī)院；臨沂市腫瘤醫(yī)院，山東臨沂 276000)

近年來，肺癌已成為威脅人類健康的頭號殺手[1-2]。肺癌按組織病理學(xué)特征可分成小細胞肺癌(Small cell lung carcinoma，SCLC)和非小細胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma，NSCLC)。雖然肺癌患者中只有15%～20%的病人最終確認為SCLC，但它具有惡性化程度高、生長速度迅猛、容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移等特點，因此早期快速特異性的診斷SCLC顯得十分重要。目前,對于SCLC的診斷除病理檢查這個“金標準”外，血清學(xué)中相關(guān)腫瘤標志物水平檢測具有檢查方便、無放射性傷害等優(yōu)點，同時其高靈敏度和高特異性為臨床診療提供科學(xué)依據(jù)。Pro-GRP作為一種新的激素類腫瘤標志物受到臨床醫(yī)師們更多的重視。研究表明Pro-GRP的血清檢測水平在SCLC患者中顯著升高，但我國對Pro-GPR診療SCLC的研究不多。本文對Pro-GRP的生物學(xué)及遺傳學(xué)特點、臨床應(yīng)用、實驗室檢測等方面作簡要歸納和介紹。

1 生物學(xué)特點

1978年，McDonald TJ等從豬的胃組織細胞中分離出來一種蛋白質(zhì)，能夠促進胃泌素的分泌，故取名為胃泌素釋放肽(Gastrin- releasing peptide，GRP)。GRP在哺乳動物胃的神經(jīng)纖維及肺的神經(jīng)內(nèi)分泌組織中分布廣泛，幾乎不存在于健康成人血清中。研究表明，SCLC患者的腫瘤細胞可以合成并釋放GRP。GRP是SCLC組織的重要表達產(chǎn)物，同時也是其早期診斷的重要腫瘤標志物。作為SCLC細胞的自分泌生長因子，結(jié)合細胞膜上的GRP受體，參與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移。但血漿GRP的半衰期僅有2 min，很難直接檢測SCLC患者的血漿GRP水平，因此限制了其臨床應(yīng)用。而Pro-GRP是GRP的前體，有Pro-GRP31-98共同片段的Pro-GRP有3種分子亞型，能在血漿中穩(wěn)定存在。大量研究表明，Pro-GRP的血漿檢測水平能夠準確反映GRP在人體中的水平，是一種新的神經(jīng)內(nèi)分泌源腫瘤標志物，是目前小細胞內(nèi)分泌癌早期診斷的首選敏感腫瘤標志物，在肺部腫瘤診斷中更為突出。

2 臨床意義

2.1Pro-GRP與SCLC的關(guān)系 目前肺部腫瘤常用腫瘤標志物有很多，如癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)、胃泌素釋放肽前體(Pro-gastrin-releasing peptide，Pro-GRP)、細胞角蛋白19的可溶性片段(Cytokeratin19 fragment，CYRA21-1)和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neuron-specific enolase，NSE)等[3]。有學(xué)者研究，Pro-GRP對SCLC診斷特異性高達97%，診斷靈敏度為76%，能夠很好地鑒別SCLC和與NSCLC以及肺部的良性病變[4-5]。研究表明，其它腫瘤組以及其他良性疾病以及健康人群的結(jié)果并無明顯差異，導(dǎo)致Pro-GRP升高一般不超過100 pg/mL，而Pro-GRP在SCLC早期往往升高就超過150 pg/mL。Okusaka T等的研究結(jié)果顯示，SCLC患者中，完全緩解的Pro-GRP升高者占25%，而NSE在這些患者中的濃度是正常的，在復(fù)發(fā)患者中，Pro-GRP升高比NSE早，且比例較NSE高。ROC曲線分析Pro-GRP、NSE濃度對SCLC臨床診斷的價值比較，分別以ProGRP>77.8 pg/mL，NSE>17.8 μg/L為陽性判斷標準，Pro-GRP、NSE診斷肺癌的靈敏度分別為67.6%、56.8%，特異度分別為96.4%、77.5%[6-7]。Pro-GRP、NSE診斷SCLC的ROC曲線下面積分別為0.909(0.850，0.968)、0.815(0.736，0.893)。與NSE相比，Pro-GRP在肺癌的早期診斷中準確性更高。因此，Pro-GRP已成SCLC早期診斷的常規(guī)首選檢測指標。

2.2Pro-GRP在其他腫瘤中的臨床意義 大量研究表明，伴神經(jīng)內(nèi)分泌特征的NSCLC患者血漿Pro-GRP水平異常升高，有潛在的診療應(yīng)用價值。研究表明，Pro-GRP升高的NSCLC患者中有神經(jīng)內(nèi)分泌特征的占64.7%[8]。近年來，有研究也發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸息肉和結(jié)腸癌患者血清中發(fā)現(xiàn)高含量的Pro-GRP，而在手術(shù)切除腫瘤、息肉后，患者血清中Pro-GRP含量將降低。動物實驗發(fā)現(xiàn)，在Pro-GRP轉(zhuǎn)基因小鼠中，血清Pro-GRP高水平表達的小鼠的胃腸道癌癥發(fā)病率也升高。因此，Pro-GRP在胃腸道腫瘤的診斷、預(yù)后評判中有著一定價值[9]。另外，小細胞食管癌患者的血清Pro-GRP升高。

2.3Pro-GRP在SCLC患者疾病進展及預(yù)后復(fù)發(fā)的早期發(fā)現(xiàn) 研究顯示，血漿Rro-GRP濃度水平隨SCLC臨床分期增加而升高；SCLC患者化療有效后血漿Pro-GRP濃度水平顯著降低；統(tǒng)計比對SCLC患者的臨床療效與血漿Pro-GRP濃度值的變化發(fā)現(xiàn)，治療后達到完全緩解的SCLC病人中，血漿Pro-GRP濃度值低于臨界值者高達100%；部分緩解者的血漿Pro-GRP濃度值低于臨界值者也達到了50%；而病情惡化的SCLC患者血清Pro-GRP檢測水平則明顯升高。Okusaka等還發(fā)現(xiàn)血清Pro-GRP檢測水平低于臨界值的SCLC部分緩解者與Pro-GRP持續(xù)高水平的緩解患者相比其生存期明顯延長[10-11]。臨床證實94%的初治患者經(jīng)治療后獲得完全緩解或部分緩解后在復(fù)發(fā)前血清Pro-GRP檢測水平再次升高，明顯高于NSE的37%，而且在SCLC復(fù)發(fā)前35 d患者血清Pro-GRP檢測水平就已經(jīng)開始升高。因此，與其他腫瘤標記物相比，Pro-GRP在監(jiān)測SCLC疾病進展和復(fù)發(fā)中有更高更確切的臨床應(yīng)用價值，可以通過對SCLC患者定期進行血漿Pro-GRP水平檢測來有效評判臨床治療效果和早期發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)。

3 Pro-GRP實驗室檢測

血清Pro-GRP濃度較穩(wěn)定，受如飲食因素、活動情況、精神因素等影響較小，還不受溶血的影響，但慢性腎功能衰竭、甲狀腺髓樣癌以及前列腺小細胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌也可導(dǎo)致血漿Pro-GRP濃度值異常升高。因此，在SCLC診斷過程中，在檢測血漿Pro-GRP水平的同時還要結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和影像學(xué)檢查結(jié)果，從而避免發(fā)生誤診。研究顯示[12-13]，血清Pro-GRP和血漿Pro-GRP濃度并不完全相同，血清中2～8 ℃冰箱儲存24 h，其活性可下降20%，7 d后則下降46%；常溫下2 h Pro-GRP濃度下降17%，24 h下降44%。而血漿中的Pro-GRP更加穩(wěn)定，在-20 ℃冰箱中，至少穩(wěn)定存在1個月；2～8 ℃冰箱儲存24 h Pro-GRP濃度幾乎不變，7 d下降10%～14%。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是血清中的凝血酶能夠降解Pro-GRP從而增加Pro-GRP在血清中的不穩(wěn)定性，使用絲氨酸蛋白酶抑制劑可增強血清Pro-GRP穩(wěn)定性[14]。建議采用血漿標本檢測Pro-GRP，不能及時送檢的標本要及時分離血漿并低溫儲存。

由于Pro-GRP在血清中含量低，所以要求采用具有高靈敏度的方法，如酶免疫分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)、放射免疫分析法(Radioimmunoassay，RIA)、時間分辨免疫熒光分析法(Time resolved fluoroimmunoassay，TRIFMA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析法(Chemiluminescence immune-assay，CLIA)、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(Electrochemiluminescence immune-assay，ECLIA)。其中，ECLIA法是臨床上最常用的檢測方法。利用回收試驗、線性分析、相關(guān)性分析、反復(fù)凍融實驗以及正常參考范圍驗證等方面對電化學(xué)發(fā)光法檢測血漿胃泌素釋放肽前體進行分析評價，發(fā)現(xiàn)ECLIA法檢測性能良好、方法可靠，達到臨床實驗室要求，可全面推廣應(yīng)用[15]。ECLIA法具有靈敏度高、特異性好、檢測速度快的優(yōu)點，易于實現(xiàn)自動化，國內(nèi)外都已有商品試劑盒，用于Pro-GRP檢測。

為評估一個腫瘤標志物的有效性，需要確立參考值，在實際臨床診療和檢測中，檢驗工作者與臨床醫(yī)生最關(guān)注參考值。目前，由于各實驗室所使用的檢測方法不同、實驗儀器不同、實驗的對象也存在差異，各臨床實驗室所采用的Pro-GRP正常參考值也不可能完全相同。這也應(yīng)該引起檢驗人員和臨床醫(yī)生的關(guān)注。

4 存在問題和展望

ECLIA法檢測血漿Pro-GRP具有高敏感性和高特異性，不僅能夠應(yīng)用于SCLC的早期診斷，而且有助于SCLC臨床治療效果評判和腫瘤復(fù)發(fā)的早期發(fā)現(xiàn)。但由于各個實驗室Pro-GRP濃度閾值從33～53 pg/mL不等[16]。因此，準確確劃分SCLC亞型，有助于統(tǒng)一Pro-GRP檢測濃度閾值水平，同時需要排除因腎功能衰竭或甲狀腺癌、前列腺癌等導(dǎo)致的假陽性影響?？偠灾?，血漿 Pro-GRP作為更特異、更敏感的SCLC診療腫瘤標記物，有著廣闊的臨床應(yīng)用前景。

5 小結(jié)

目前，Pro-GRP作為SCLC早期診斷、療效評價及預(yù)后評判的理想腫瘤標志物已成為共識。Pro-GRP正受到越來越多的關(guān)注，其具體的臨床、病理、機制還有待進一步深入研究。Pro-GRP的檢測技術(shù)還需要進一步完善，以更好的滿足臨床需求，并在臨床推廣、應(yīng)用。

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