VEGF、MMP-9和TIMP-1在小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其臨床意義

梁 宇

神經(jīng)母細(xì)胞瘤( neuroblastoma，NB) 是1種兒童常見(jiàn)的惡性腫瘤，主要是由沒(méi)有分化的交感神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成，其腫瘤轉(zhuǎn)移時(shí)間早、療效及預(yù)后較差，因此，探討神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織蛋白表達(dá)，對(duì)臨床治療方法的研究具有重要作用[1-2]。有文獻(xiàn)報(bào)道，VEGF在多種腫瘤中表達(dá)水平高，其可有效調(diào)控血管形成和浸潤(rùn)過(guò)程，而有研究報(bào)道MMP-9/TIMP-1表達(dá)水平與多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[3-4]。為此，本研究探討VEGF、MMP-9和TIMP-1在小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其臨床意義，取得滿意效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取我院2015年1月至2017年1月收治的小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者30例作為研究對(duì)象。所有患兒均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為神經(jīng)母細(xì)胞瘤，且行手術(shù)治療前未曾行化療、放療等輔助治療措施。根據(jù)國(guó)際神經(jīng)母細(xì)胞瘤分期可將患兒分為：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期7例，Ⅳ期5例。使用甲醛將所取患兒組織進(jìn)行常規(guī)固定及石蠟包埋，連續(xù)切片，4 μm厚度，并分別進(jìn)行HE染色及免疫組織化學(xué)染色。

1.2 方法

采用購(gòu)自武漢博士德公司的抗人MMP-9多克隆抗體、抗人TIMP-1多克隆抗體、兔抗人VEGF 多克隆抗體進(jìn)行免疫組化染色，使用常州市郝思琳醫(yī)用儀器有限公司提供的CM3800 切片機(jī)，使用上海光密儀器有限公司的顯微鏡，采用北京福意聯(lián)公司提供的fyl-ys-150恒溫箱對(duì)標(biāo)本進(jìn)行脫蠟，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟進(jìn)行免疫組化S-P法的相關(guān)規(guī)范操作。用子宮內(nèi)膜癌陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS替代一抗進(jìn)行陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

VEGF免疫組化染色結(jié)果判斷[5]。①陽(yáng)性反應(yīng)：以腫瘤細(xì)胞與其附近血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)呈黃色或棕黃色顆粒為VEGF陽(yáng)性反應(yīng)。②陰性反應(yīng)：與背景染色一致淡黃色或無(wú)棕色反應(yīng)顆粒為VEGF陰性。

MMP -9蛋白和TIMP -1蛋白抗[6]。①陽(yáng)性反應(yīng)：均以細(xì)胞呈清晰棕黃色顆粒為組織陽(yáng)性反應(yīng)。并采用雙人雙盲法對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察，隨機(jī)選擇10個(gè)400×高倍鏡視野觀察1000個(gè)細(xì)胞。陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞百分率≥5%為(+)，<5%為(-)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0軟件分析本研究的所有數(shù)據(jù)，采用χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料。

2 結(jié)果

2.1 VEGF、MMP-9和TIMP-1在小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況

MMP-9在組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為73.33%(22/30)、TIMP-1的陽(yáng)性表達(dá)率為46.67%(14/30)，VEGF在組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為70.00%(21/30)(P<0.05);而22例MMP-9陽(yáng)性表達(dá)組織標(biāo)本中TIMP-1陽(yáng)性表達(dá)率為40.90%(9/22)，8例MMP-9陰性表達(dá)組織標(biāo)本中TIMP-1陽(yáng)性表達(dá)率為75.00%(6/8)，21例VEGF陽(yáng)性表達(dá)組織標(biāo)本中TIMP-1陽(yáng)性表達(dá)率為38.09%(8/21),9例VEGF陰性表達(dá)組織標(biāo)本中TIMP-1陽(yáng)性表達(dá)率為77.78%(7/9)(P<0.05)。

2.2 小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤中VEGF、MMP-9和TIMP-1表達(dá)與腫瘤分期相關(guān)性

12例Ⅲ、Ⅳ期患者中MMP-9陽(yáng)性表達(dá)為83.33%(10/12)、VEGF陽(yáng)性表達(dá)為83.33%(10/12)，明顯高于18例Ⅰ、Ⅱ期患者的55.55%(10/18)、50.00%(9/18)(P<0.05)，而TIMP-1在Ⅲ、Ⅳ期患者中陽(yáng)性表達(dá)為25.00%(3/12)，明顯低于Ⅰ、Ⅱ期患者的61.11%(11/18)(P<0.05)。

2.3 小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤中VEGF、MMP-9和TIMP-1表達(dá)的相關(guān)性

TIMP-1表達(dá)與VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(γ1=-0.434,P<0.05)。MMP-9表達(dá)與TIMP-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(γ2=-0.532,P<0.05)。

3 討論

神經(jīng)母細(xì)胞瘤( NB)具有生長(zhǎng)快、惡性度高、病程短的生物特性，腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移以及生長(zhǎng)是1個(gè)復(fù)雜過(guò)程，同時(shí)又是腫瘤復(fù)發(fā)的1個(gè)重要原因[7]。

本研究探討VEGF、MMP-9和TIMP-1在小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其臨床意義，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MMP-9在組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為73.33%、TIMP-1的陽(yáng)性表達(dá)率為46.67%，VEGF在組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為70.00%，TIMP-1與VEGF的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，MMP-9與TIMP-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。這是由于在腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的降解細(xì)胞外基質(zhì)過(guò)程中基質(zhì)金屬蛋白酶家族( MMPs) 可起到重要作用，而MMP-9作為發(fā)揮主要功能的基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的明膠酶，可對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)中Ⅳ、Ⅴ型膠原以及明膠等主要成分進(jìn)行降解，將基底膜打破，并使腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的首要障礙清除，而近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外發(fā)現(xiàn)MMP-9與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但在國(guó)內(nèi)NB組織中的MMP-9的表達(dá)研究報(bào)道較少見(jiàn)[8]。

近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，TIMPs是1種可對(duì)MMPs進(jìn)行功能抑制的物質(zhì)，往往由與分泌MMPs的同樣細(xì)胞合成，它可以1∶1非共價(jià)健結(jié)合活化的間質(zhì)膠原酶、間質(zhì)溶解素以及 MMP-9形成復(fù)合物從而對(duì)其活性進(jìn)行抑制，使細(xì)胞外基質(zhì)的降解降低[9]。因MMP-9 與 TIMP-1在神經(jīng)母細(xì)胞瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有拮抗作用，因此，聯(lián)合檢測(cè)可準(zhǔn)確地將腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的方向顯示出，并為神經(jīng)母細(xì)胞瘤的針對(duì)性治療方案提供參考[10]。而腫瘤能否生存于轉(zhuǎn)移部位，并向遠(yuǎn)處播散，腫瘤內(nèi)血管生成在其中扮演重要角色，也是腫瘤復(fù)發(fā)的重要因素，而腫瘤的血管形成與VEGF等多種相關(guān)因子的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)密切相關(guān)，有大量研究顯示VEGF于人的正常組織以及多種動(dòng)物和腫瘤細(xì)胞株中均存在，VEGF可促使腫瘤新血管形成，在其生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中起重要作用[11-12]。

綜上所述，VEGF、MMP-9和TIMP-1與小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤的惡性程度、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān),可作為預(yù)后的判斷指標(biāo)，為小兒神經(jīng)母細(xì)胞瘤臨床靶向治療提供理論依據(jù)。