食用調和油中角鯊烯含量的測定

佟馨 董華 劉濤 張波

摘要 本文建立了氣相色譜法測定食用調和油中功能性成分角鯊烯的檢測方法。樣品經氫氧化鉀-乙醇溶液皂化，再經正己烷萃取凈化、氣相色譜法分析測定、內標法定量。結果表明，線性良好，相關系數(shù)為0.999 8，測得方法檢出限為0.95 mg/kg；在40、80、100 mg/kg的加標水平下，角鯊烯在食用調和油中的平均回收率為96.29%～97.33%，變異系數(shù)為1.18%～1.32%，方法分析時間短，重現(xiàn)性好，靈敏度高，可用于食用調和油中功能性成分角鯊烯含量的測定。

關鍵詞 食用調和油；角鯊烯；含量測定；皂化；萃??；氣相色譜法

中圖分類號 TS277 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）03-0249-02

角鯊烯是一種脂質不皂化物，是最初從角鯊魚肝臟中發(fā)現(xiàn)的多不飽和烯烴。其是由6個六戊二烯組成的二萜，也是一種高度不飽和的直鏈三萜類非極性化合物，其化學結構為2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯。角鯊烯的生理功能顯著，具有強抗氧化作用[1-4]。角鯊烯具有很強的輸氧能力，可增強細胞的活力及抗病力，在醫(yī)學上對心臟病、糖尿病、關節(jié)炎、肝炎及胃炎等均有療效[5]。此外，角鯊烯對防止癌細胞擴散、促進癌細胞失活和加速衰老有重要作用[6]。角鯊烯廣泛存在于動植物體內，在動物中尤以深海魚類（特別是鯊魚）肝臟中含量最為豐富，含量為15%～69%[7-8]，植物中以莧菜籽油含量最多[9]。

本研究采用氫氧化鉀-乙醇溶液皂化、正己烷進行萃取洗凈、氣相色譜（GC-FID）法進行檢測，該方法重現(xiàn)性好，回收率高，可以快速對食用調和油進行檢測。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 原料與試劑。食用調和油由中糧東海糧油生產，將非轉基因豆油、非轉基因菜籽油、非轉基因玉米油、花生油、葵花籽油、芝麻油、亞麻籽油按照一定比例調配而成；角鯊烷標準品（純度≥98%）；角鯊烯標準品（純度≥98%）。

1.1.2 儀器設備。Agilent 7890A氣相色譜（GC-FID）；Labor-ota 4001旋轉蒸發(fā)儀；QYN 100-1氮吹儀。

1.1.3 標準溶液配制。①角鯊烷內標溶液。準確稱取25 mg（精確至0.000 1 g）角鯊烷標準品于25 mL容量瓶中，加入少量正己烷，使其充分溶解后，用正己烷定容至刻度，搖勻，配成1 mg/mL角鯊烷內標溶液。②角鯊烯標準儲備溶液。準確稱取50 mg（精確至0.000 1 g）角鯊烯標準品于50 mL容量瓶中，加入少量正己烷，使其充分溶解后，用正己烷定容至刻度，搖勻，配成1 mg/mL角鯊烯標準儲備液。③含30 μg/mL角鯊烷內標的角鯊烯工作液。將角鯊烯標準儲備液用正己烷稀釋至濃度分別為2.5、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 μg/mL的標準工作液，并在工作液中加入適量的角鯊烷內標溶液，保證每個工作液中角鯊烷濃度為30 μg/mL。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品處理。①稱量。準確吸取300 μL角鯊烷內標溶液于250 mL圓底燒瓶中，在氮吹儀上吹干后，準確稱取0.2～2.0 g食用調和油樣品（精確至0.000 1 g）于此燒瓶中。②皂化。于圓底燒瓶中加入50 mL氫氧化鉀-乙醇溶液后，將燒瓶與回流冷凝管連接好，在80 ℃恒溫水浴鍋中皂化回流50 min，停止加熱，從回流管頂部加入50 mL水，取出燒瓶搖勻，冷卻至室溫。③提取。將燒瓶中的皂化液轉移至250 mL分液漏斗中，用50 mL正己烷分3次洗滌燒瓶，并將洗滌液倒入分液漏斗中，用力搖動分液漏斗2 min，倒轉分液漏斗，小心打開旋塞，間歇地釋放壓力，靜置分層，將下層皂化液轉移至另一個250 mL分液漏斗中，再用相同的方法分別用30、20 mL正己烷對皂化液提取2次，將3次正己烷提取液置于同一分液漏斗中。④洗滌。用25 mL乙醇溶液洗滌正己烷提取液3～4次，每次棄去下層的乙醇水溶液，用pH試紙檢驗直至下層流出液呈中性。⑤濃縮。將洗至中性的正己烷提取液經過鋪有約5 g無水硫酸鈉的濾紙濾入與旋轉蒸發(fā)儀配套的球形蒸發(fā)瓶中，再用約20 mL的正己烷沖洗3次分液漏斗及無水硫酸鈉，并入蒸發(fā)瓶中，在40 ℃水浴中旋轉蒸發(fā)溶劑，待瓶中剩下約2 mL正己烷時，取下蒸發(fā)瓶，立即放入氮吹儀中吹干，最后用正己烷溶解并定容至10 mL，過0.45 μm有機濾膜，待測。

1.2.2 色譜條件。進樣量為1 μL，峰面積外標法定量。載氣為高純氮氣，純度99.999%；恒壓為110.32 kPa；分流比為1∶10；進樣口溫度為250 ℃；柱溫采用程序升溫方式，以15 ℃/min的速率從160 ℃升溫到220 ℃，保持2 min，然后以5 ℃/min的速率升溫到280 ℃，保持20 min，最后以5 ℃/min的速率升溫到300 ℃，保持2 min。FID檢測器：溫度300 ℃，氫氣流速40 mL/min，空氣流速450 mL/min，尾吹氣流速30 mL/min。

2 結果與分析

2.1 標準曲線及限量

用1 mg/mL角鯊烯標準儲備液配制成系列標準工作液，按上述色譜條件，進行定量。得出線性方程Y=18.956X-1.583，相關系數(shù)R=0.999 8，測得方法檢出限為0.95 mg/kg。

2.2 方法精密度及回收率

由表1可知，檢測結果平均值為132.23 mg/kg，變異系數(shù)為1.42%；由表2可知，在40、80、100 mg/kg的加標水平下，角鯊烯在食用調和油中的平均回收率分別為96.88%、96.29%、97.33%，變異系數(shù)分別為1.32%、1.29%、1.18%。

3 結論與討論

本文采用將食用調和油樣品進行皂化，經正己烷萃取凈化，用氣相色譜法進行角鯊烯含量的定量檢測。線性良好，相關系數(shù)為0.999 8，測得方法檢出限為0.95 mg/kg。在40、80、100 mg/kg的加標水平下，角鯊烯在食用調和油中的平均回收率為96.29%～97.33%，變異系數(shù)為1.18%～1.32%，檢測過程時間短，重現(xiàn)性好，定量準確，可實現(xiàn)對食用調和油樣品中角鯊烯的快速檢測。

由于調和油樣品在前處理萃取過程中易發(fā)生乳化現(xiàn)象，導致液液分離效果不佳，可加少許無水乙醇進行消除。各類調和油脂產品中角鯊烯含量不等，在樣品前處理時可視具體樣品按方法調整稱樣量[10]。

4 參考文獻

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