卡式微柱凝膠技術(shù)在血型鑒定及輸血前紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢驗(yàn)中的作用

陳利紅，楊浩瑩,李玖平△

(1.陜西省漢中市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 723200;2.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬三二〇一醫(yī)院輸血科，陜西漢中 723000)

不規(guī)則抗體指除抗-A和抗-B(ABO血型系統(tǒng))以外的其他抗體，以Rh血型抗體最為常見[1]。不規(guī)則抗體是引起輸血不良反應(yīng)、疑難配血、血型鑒定困難及新生兒溶血疾病的主要原因，對于有妊娠史及輸血史的患者，不規(guī)則抗體檢驗(yàn)是預(yù)防新生兒溶血病及輸血安全的重要手段[2]?？谷饲虻鞍追?、聚凝胺法、蛋白酶法及鹽水法等傳統(tǒng)輸血檢驗(yàn)方法在配血的過程中需要反復(fù)洗滌紅細(xì)胞，靈敏度低，影響因素多，耗時(shí)長且操作繁瑣，嚴(yán)重威脅輸血者的生命安全[3]?？ㄊ轿⒅z技術(shù)能夠快速、準(zhǔn)確地進(jìn)行血型匹配，且血液樣品需要?jiǎng)┝可?、污染小，是一種靈敏、快速、安全的免疫檢驗(yàn)血型血清的方法，現(xiàn)將卡式微柱凝膠技術(shù)檢驗(yàn)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的作用報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2014年10月至2015年10月在西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬三二〇一醫(yī)院輸血并行卡式微柱凝膠技術(shù)和聚凝胺法檢驗(yàn)的1 175例患者不規(guī)則抗體及鑒定ABO和RhD血型。其中男632例，女543例；年齡15～66歲，平均(40.58±11.46)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡15～67歲；(2)患者意識清醒無精神或神經(jīng)性疾??；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并有原發(fā)性疾病抑制免疫功能；(2)嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能障礙；(3)嚴(yán)重血液科疾病；(4)依從性差無法配合治療者。

1.2方法 輸血前患者均在空腹?fàn)顟B(tài)下抽取2 mL外周靜脈血，放入乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝真空無菌采血管。分別采用卡式微柱凝膠技術(shù)(研究組)和聚凝胺法(對照組)鑒定ABO和RhD血型及檢驗(yàn)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體。具體方法如下。

1.2.1卡式微柱凝膠技術(shù) 采用江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限責(zé)任公司凝膠卡進(jìn)行標(biāo)記，用低離子溶液將3種譜紅細(xì)胞配成0.5%～0.8%濃度，分別加入標(biāo)記好的微管中，各50 μL。分離血漿，并分別于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔內(nèi)加入50 μL血漿，然后在對應(yīng)加入50 μLⅠ、Ⅱ、Ⅲ號不規(guī)則抗體篩查譜細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供)，最后放入37 ℃孵育器中孵育15 min；使用專用離心機(jī)離心5 min：900 r/min離心2 min，1 500 r/min離心3 min，取出。觀察結(jié)果，根據(jù)譜紅細(xì)胞反應(yīng)格局來判定結(jié)果，陰性結(jié)果：紅細(xì)胞完全沉降于凝膠管底部，說明受血者和獻(xiàn)血者交叉配血相合；陽性結(jié)果：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中端，說明受血者和獻(xiàn)血者交叉配血不相合；如果出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，則也說明為陽性反應(yīng)?？ㄊ轿⒅z技術(shù)ABO、RhD血型鑒定按說明書進(jìn)行操作。

1.2.2聚凝胺法 采用珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的聚凝胺試劑盒，將3支相同試管分別標(biāo)記為主測管、次測管和對照管。主測管：取1滴獻(xiàn)血者3%～5%紅細(xì)胞滴入受血者血漿中；次測管：取1滴受血者3%～5%紅細(xì)胞滴入獻(xiàn)血者血漿中；對照管：取1滴獻(xiàn)血者3%～5%紅細(xì)胞滴入陽性對照血漿中。在試管中分別計(jì)入0.65 mL低離子溶液和2滴凝聚胺溶液，混合均勻后，分別于室溫下孵育1 min和15 s。3 400 r/min離心10 s，留取上清液0.1 mL，檢測紅細(xì)胞有無凝聚反應(yīng)(若無則試驗(yàn)失敗)。最后滴加復(fù)懸液2滴，混合均勻后倒在玻璃片上，顯微鏡或肉眼觀察有無凝集，凝集表示獻(xiàn)血者血液與受血者不合；無凝集表示適合。ABO、RhD血型鑒定按說明書進(jìn)行操作。

1.3觀察指標(biāo) (1)觀察兩種方法在ABO和RhD血型鑒定情況；(2)兩種方法不規(guī)則抗體檢出情況；(3)不規(guī)則抗體高?？剖曳植记闆r。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0軟件行數(shù)據(jù)分析處理，計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩種方法在ABO和RhD血型鑒定情況比較 研究組ABO血型的一次性準(zhǔn)確率為99.83%，高于對照組的98.72%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.532，P=0.002)；研究組RhD血型的一次性準(zhǔn)確率為99.91%，高于對照組的99.32%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.015，P=0.039)。

2.2兩種方法不規(guī)則抗體檢出情況比較 研究組16例患者表現(xiàn)為陽性，陽性率為1.36%；對照組10例患者表現(xiàn)為陽性，陽性率0.85%，見表1。

表1 兩種方法不規(guī)則抗體檢出情況比較[n(%)]

2.3科室分布 26例不規(guī)則抗體陽性患者中血液科、腎病科和感染科共占21例(84.00%)，其他科室占5例(19.23%)；有輸血史者22例(88.00%)，有妊娠史者12例(48.00%)。

3 討 論

當(dāng)輸注的紅細(xì)胞與患者血清中的免疫抗體不合時(shí)，會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重輸血反應(yīng)，所以在輸血前對近期多次輸血、有妊娠史、有輸血史等類型的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查非常重要[4-5]。傳統(tǒng)的輸血檢測方法包括聚凝胺法、酶法及鹽水法等，均具有人為影響因素多、不容易被標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化程度低、操作過程繁瑣及最低檢測限高等缺點(diǎn)。眾所周知，需要輸血者往往是危急重病患者，輸血不及時(shí)輕則致殘、重則致死；而如果血型不匹配，則會(huì)發(fā)生抗凝現(xiàn)象，導(dǎo)致血管內(nèi)栓塞甚至心血管疾病，后果更為嚴(yán)重，因此患者受血前進(jìn)行準(zhǔn)確快速的血液配對試驗(yàn)是重中之重[6-7]。為降低輸血反應(yīng)的發(fā)生率，美國血庫協(xié)會(huì)(AABB)規(guī)定交叉配血前必須對紅細(xì)胞抗原中的不規(guī)則抗體進(jìn)行檢測[8]。

不規(guī)則抗體造成的輸血反應(yīng)以免疫溶血反應(yīng)最多，是較為嚴(yán)重的輸血反應(yīng)，且該抗體多為IgG單倍體，本研究兩組患者檢出的不規(guī)則抗體抗-D、抗-E、抗-e、抗-C、抗-c均屬于IgG抗體。IgG抗體是溫抗體類型，抗體分子長度為24 nm，由輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生，對相應(yīng)的紅細(xì)胞有致敏作用，且輸血過程中發(fā)生的輸血反應(yīng)與IgG效價(jià)的強(qiáng)弱有直接關(guān)系，遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)便是由IgG抗體引起的。經(jīng)過檢測，研究組和對照組不規(guī)則抗體陽性率分別為1.36%和0.85%，與李慧等[9]報(bào)道的結(jié)果(1.03%)相似，其中研究組陽性率較高的是抗-D和抗-E抗體，分別為0.34%和0.43%，與長期臨床實(shí)踐中溶血性輸血反應(yīng)抗-E抗體居首位，抗-D次之的結(jié)果相一致[10-11]，證明了本研究結(jié)果的真實(shí)性。對照組不規(guī)則抗體陽性檢出率僅為0.85%，考慮與IgG抗體分子鏈短小，無法有效凝聚有關(guān)。

聚凝胺主要通過低價(jià)離子介質(zhì)將紅細(xì)胞表面負(fù)電荷破壞并凝集在一起，凝聚液加入后，凝集不散開則表示為特異性，散開表示為非特異性。但是聚凝胺法的結(jié)果會(huì)受多種因素的影響，如液體加入量的多少，存放時(shí)間的長短等[12-13]。作為新型的血清血型配對方法，卡式微柱凝膠技術(shù)能夠與系統(tǒng)調(diào)控的離心速率配合，在細(xì)小的凝膠顆粒濾網(wǎng)下，快速分離非凝結(jié)和凝結(jié)的紅細(xì)胞，且每個(gè)微柱孔徑只允許通過1個(gè)紅細(xì)胞，如果紅細(xì)胞凝結(jié)成塊則無法通過，留于凝膠之上以顯示陽性結(jié)果，反之則為陰性[14]。卡式微柱凝膠技術(shù)的靈敏度與傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法比較，均高出1～5個(gè)滴度，還能夠同時(shí)檢驗(yàn)出IgM、IgG，捕捉到非常微弱的抗原抗體反應(yīng)。祁琳等[15]學(xué)者對微柱凝膠和凝聚胺法的敏感度進(jìn)行測驗(yàn)，結(jié)果顯示，前者的敏感度為100.00%，后者為88.00%。所以，卡式微柱凝膠的結(jié)果準(zhǔn)確性高，為臨床輸血安全帶來了極大的保障。

本研究26例不規(guī)則抗體陽性患者中，血液科、腎病科和感染科共21例(84.00%)，其他科室5例(19.23%)，表明這些科室為本院的高危科室。經(jīng)過調(diào)查，以上科室出現(xiàn)不規(guī)則抗體的原因均與患者自身慢性病引發(fā)貧血有一定的相關(guān)性。如血液科患者由于各種血液病的關(guān)系，長期貧血，需要輸血支持治療。腎病患者，尤其是腎病終末期者體內(nèi)常會(huì)聚集大量毒素，促紅細(xì)胞生成素也會(huì)因此而缺失，最終導(dǎo)致貧血癥狀。感染肝炎病毒的患者，機(jī)體本身抗體長時(shí)間受慢性病毒刺激；肝硬化患者尤其是慢性肝硬化患者，常會(huì)因紅細(xì)胞不能上升而要求醫(yī)生多次幫其輸注血液。每輸注1單位血漿或紅細(xì)胞，患者便要承擔(dān)至少1%的紅細(xì)胞致敏風(fēng)險(xiǎn)，而多次輸血之后，同種抗體發(fā)生率便會(huì)上升至20%左右[16]。

綜上所述，卡式微柱凝膠與傳統(tǒng)不規(guī)則抗體檢驗(yàn)方法比較，可以有效避免試驗(yàn)過程中生物污染的發(fā)生，提高了血型鑒定準(zhǔn)確率，操作流程簡單，靈敏度高，檢驗(yàn)結(jié)果能夠長時(shí)間于室溫下保存，方便病理回顧研究，可在臨床推廣使用。

[1]許基平，練正秋，李翠瑩．不規(guī)則抗體篩查與臨床安全輸血[J]．中國輸血雜志，2012，25(9)：876-878．

[2]張晨光，張婧婧，龐桂芝，等．血型不規(guī)則抗體檢測的方法學(xué)評價(jià)[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，25(12)：929-933．

[3]MOHAMMED Y,BEKELE A.Seroprevalence of transfusion transmitted infection among blood donors at Jijiga blood bank,Eastern Ethiopia:retrospective 4 years study[J].BMC Res Notes,2016,9(1):129-134.

[4]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M]．南京：東南大學(xué)出版社，2006：87．

[5]楊世明，潘曉莉，張勇萍，等．紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體篩選及其特異性鑒定[J]．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2010，26(4)：396-397．

[6]劉仁強(qiáng)，何子毅，鄒文濤，等．多次輸血產(chǎn)生不規(guī)則抗體及配血時(shí)間分析[J]．廣東醫(yī)學(xué)，2010，31(14)：1789-1791．

[7]趙穎欣，王德輝，柴慧麗，等．血型不規(guī)則抗體篩查用于預(yù)防和降低臨床無效輸血的發(fā)生[J]．中國輸血雜志，2015，28(1)：48-50．

[8]BUSANI S,GHIRARDINI A,PETRELLA E,et al.A challenging case of pregnancy with placenta accreta and very rare irregular antibodies versus Cromer blood group system:a case report[J].J Med Case Rep,2015,9(9):112.

[9]李慧，徐煥銘，張毅，等．輸血前患者不規(guī)則抗體篩查及鑒定結(jié)果分析[J]．中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2015，23(3)：861-865．

[10]李洋，陳浩飛，劉金龍，等．脊柱手術(shù)自體血回輸后的非免疫性溶血性輸血反應(yīng)分析[J]．醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2014，27(2)：223-224．

[11]DUMAS G,HABIBI A,ONIMUS T,et al.Eculizumab salvage therapy for delayed hemolysis transfusion reaction in sickle cell disease patients[J].Blood,2016,127(8):1062-1064.

[12]呂先萍，胡利亞，李建英，等．凝聚胺法鑒定嬰兒臍血ABO血型1815例[J]．鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2010，45(3)：528-529．

[13]袁曉華，楊春菊．兩種不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)的應(yīng)用比較[J]．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2014，30(3)：316-317．

[14]MEKHEMAR N A,EL-AGWANY A S,RADI W K,et al.Comparative study between benzydamine hydrochloride gel,lidocaine 5% gel and lidocaine 10% spray on endotracheal tube cuff as regards postoperative sore throat[J].Rev Bras Anestesiol,2016,66(3):242-248.

[15]祁琳，溫會(huì)燕，林軍．微柱凝膠法和凝聚胺法檢測IgG抗體效價(jià)的比較[J]．蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2011，31(1)：161-162．

[16]劉芬，汪泱，詹以安，等．大量輸血時(shí)血漿與濃縮紅細(xì)胞不同比例輸注對產(chǎn)后大出血患者凝血功能的影響[J]．實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26(6)：1000-1002．