大連地區(qū)表觀健康人群同型半胱氨酸參考區(qū)間的建立*

劉 彤，馬建軍，楊建敏，王 波，薛邦祿

(1.遼寧省大連市中心醫(yī)院檢驗科 116033；2.大連醫(yī)科大學檢驗學院，遼寧大連 116044)

同型半胱氨酸(HCY)是蛋氨酸和半胱氨酸的代謝產(chǎn)物，是人體內(nèi)的一種含硫氨基酸。如今已經(jīng)證實HCY是一種血管損傷性氨基酸，高HCY是心臟、外周腦血管疾病的獨立危險因素[1]。高HCY血癥與糖尿病并發(fā)的腎病具有相關(guān)性，動態(tài)監(jiān)測血清HCY和尿微量清蛋白對糖尿病患者具有重要意義[2]。血清HCY水平升高是腦卒中的一個獨立危險因素，如果HCY水平過高，也會提高腦卒中的危險性[3-4]。因此血清HCY對身體健康水平評估及臨床疾病的診治、預后有著重要意義。但目前為止，國內(nèi)外對HCY水平的流行病學方面的探討研究比較多，其參考區(qū)間的分析相對較少。且大多數(shù)醫(yī)院在進行檢測時選擇以試劑說明書上的參考范圍為標準，忽略了對不同地域、年齡、民族等差異性的分析。本研究采用循環(huán)酶比色法檢測體檢2 449例表觀健康人群，檢測其血清HCY水平，探討性別和年齡對HCY水平的影響，初步建立大連地區(qū)表觀健康人群HCY參考區(qū)間。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取大連市中心醫(yī)院體檢中心2015年12月至2016年12月體檢健康人群的血清標本2 449例，其中男1 314例(≥20～29歲273例、≥30～39歲260例、≥40～49歲361例、≥50～59歲286例、≥60～69歲102例、≥70歲32例)；女1 135例(≥20～29歲267例、≥30～39歲271例、≥40～49歲238例、≥50～59歲223例、≥60～69歲108例、≥70歲28例)。

1.2儀器與試劑 儀器為西門子ADVIA 2400全自動生化分析儀。試劑包括HCY體外診斷試劑盒、校準品及質(zhì)控品，均由北京九強生物技術(shù)股份有限公司提供。

1.3方法

1.3.1標本的選取 對體檢人員進行問卷調(diào)查，調(diào)查人員通過查看體格檢查和實驗室檢查的報告進行篩選，能夠同時滿足以下多種要求方為合格標本[5]。納入標準：(1)自覺健康；(2)無下列疾病，包括糖尿病、高尿酸血癥、痛風、甲狀腺功能亢進癥、甲狀腺功能減退、動脈粥樣硬化、血管疾病、心臟病、肝硬化、膽石病、肺炎、肺結(jié)核、貧血、白血病、肌病、肥胖[體質(zhì)量指數(shù)(BMI)≥28 kg/m2]和消瘦(BMI<18.5 kg/m2)等；(3)2周內(nèi)未服用藥物，4個月內(nèi)未參加過獻血、輸血等活動，6個月內(nèi)未進行手術(shù)；(4)無酗酒(長期飲酒或2周內(nèi)大量飲酒)、嗜煙(吸煙量>20支/天)、營養(yǎng)不良、素食；(5)近期無劇烈運動或重體力勞動；(6)女性未處于妊娠或哺乳期。排除標準：(1)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶>80 U/L；(2)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶>80 U/L；(3)L-γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶>80 U/L；(4)三酰甘油≥2.26 mmol/L；(5)總膽固醇≥6.22 mmol/L；(6)空腹血糖≥7.0 mmol/L；(7)尿素>8.5 mmol/L；(8)肌酐>130 μmol/L；(9)男性尿酸<500 μmol/L，女性尿酸<400 μmol/L；(10)男性血紅蛋白<120 g/L，女性血紅蛋白<110 g/L；(11)乙肝表面抗原陽性、丙型肝炎病毒抗體陽性、艾滋病抗體陽性。

1.3.2標本的采集與處理 受檢者空腹12 h后晨起抽取靜脈血。使用真空采血管取靜脈血4 mL，室溫下靜置30 min后離心(3 500 r/min ×5 min)，將血清分裝于1.0 mL的Eppendorf管內(nèi)，-80 ℃冰箱里凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3標本檢測 HCY檢測按說明書進行參數(shù)設(shè)置，使用校準品獲得校準曲線，每批次進行兩水平室內(nèi)質(zhì)控檢測，保證儀器處于在控狀態(tài)。將冷凍的血清室溫放置1 h溶解，反復混勻，上機檢測，獲得HCY檢測結(jié)果。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0對數(shù)據(jù)進行處理。非正態(tài)分布的計量資料采用中位數(shù)和四分位數(shù)間距[M(P25，P75)]表示。組間采用非參數(shù)Kruskal-WallisH檢驗。HCY參考區(qū)間的建立用P2.5和P97.5計算95%的參考區(qū)間。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1剔除數(shù)據(jù)中異常值 用SPSS22.0軟件對2 449個數(shù)值進行標準化處理，將得到的標準化HCY數(shù)值中絕對值大于2的異常值舍棄，經(jīng)過處理剔除了102個異常值。最后，男性共1 222例(≥20～29歲247例、≥30～39歲232例、≥40～49歲338例、≥50～59歲276例、≥60～69歲101例、≥70歲28例)；女性1 125例(≥20～29歲264例、≥30～39歲270例、≥40～49歲236例、≥50～59歲220例、≥60～69歲108例、≥70歲27例)。

2.2HCY水平性別、年齡差異分析 結(jié)果顯示，大連地區(qū)表觀健康人群的HCY水平在男女之間差異有統(tǒng)計學意義，男性明顯高于女性(P<0.05)。且不論男女性，血清HCY水平的均表現(xiàn)為年齡≥20～29歲到年齡≥30～39歲時降低，40歲以后隨著年齡的增大而逐漸升高。采用非參數(shù)Kruskal-WallisH檢驗，對男、女性人群的6個年齡組分別進行兩兩比較，不同性別不同年齡段的檢測結(jié)果差異也有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。其中男性年齡≥30～39歲與年齡≥60～69歲、≥70歲兩個年齡段比較，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.028、0.007)；≥40～49歲與年齡≥60～69歲、≥70歲兩個年齡段比較，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.015、0.005)。女性年齡≥20～29歲與年齡≥50～59歲、≥60～69歲、≥70歲這3個年齡段比較，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.007、0.001、0.002)；≥30～39歲與年齡≥50～59歲、≥60～69歲、≥70歲這3個年齡段比較，差異有統(tǒng)計學意義(P值均小于0.001)；≥40～49歲與年齡≥50～59歲、≥60～69歲、≥70歲這3個年齡段比較，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.004、0.001、0.002)。同時，經(jīng)分析得到，男、女性的HCY水平在年齡≥20～29歲、≥30～39歲、≥40～49歲這3個年齡段比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，可以合并參考區(qū)間；年齡≥50～59歲、≥60～69歲、≥70歲這3個年齡段比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，可以合并參考區(qū)間。見表1。

表1 不同年齡、性別血清HCY水平[μmol/L，M(P25，P75)]

2.3男、女各年齡段的參考區(qū)間 經(jīng)分析得到，男性年齡≥20～49歲、≥50歲的HCY參考區(qū)間分別為8.12～24.08、8.73～21.53 μmol/L；女性年齡≥20～49歲、≥50歲的HCY參考區(qū)間分別為5.84～17.77、6.52～16.43 μmol/L。

3 討 論

HCY屬于蛋氨酸循環(huán)中的中間產(chǎn)物，是一種含巰基的非必需氨基酸[4]。HCY本身并不參與到蛋白質(zhì)的合成過程中，在正常的生理狀態(tài)下，人體血漿中HCY的水平很低。但是，作為一種反應性血管損傷性氨基酸，任何導致其代謝所需酶或相關(guān)因子缺陷以及代謝物的異常均會對人體血漿中HCY的水平產(chǎn)生影響。如果它在血液中標準數(shù)值高于10 mol/L，就會對血管產(chǎn)生危害。

研究表明，HCY可通過抑制一氧化氮合成或者氧自由基產(chǎn)生，是一種對血管內(nèi)細胞有直接毒性作用的物質(zhì)，可見HCY是心腦血管疾病的危險因素，它的異常參與心腦血管疾病的發(fā)生[5]。HCY水平檢測對判斷心腦血管疾病嚴重程度、預測心腦血管事件的危險有重要的價值，臨床還可以指導高危人群通過飲食和藥物控制HCY的水平，以控制、降低心腦血管疾病的發(fā)病風險[6-7]。同時也有試驗結(jié)果顯示，高HCY血癥與糖尿病腎病的發(fā)病具有相關(guān)性[8-9]。BOYSEN等[10]研究105例曾發(fā)生過腦梗死的患者，結(jié)果顯示腦梗死患者發(fā)病前的血漿HCY水平顯著高于對照組。BOUSHEY等[11]表明HCY除與動脈粥樣硬化相關(guān)之外，還具有致病效應，是導致動脈粥樣硬化性血管病的一個獨立危險因素。35%的2型糖尿病患者伴有高HCY血癥，而在糖尿病腎病、視網(wǎng)膜以及心血管并發(fā)癥的患者中更為顯著[12-13]。以上研究結(jié)果均表明，HCY和其他相關(guān)指標聯(lián)合作用與某些疾病有關(guān)，例如腦出血、糖尿病腎病、老年癡呆癥等，HCY值的改變在這些疾病的發(fā)生、發(fā)展中有明顯的變化，因此可作為某些疾病的診斷與不良事件預測指標[14]。通過文獻已經(jīng)得知，各個地區(qū)人群的HCY值并不相同[15-16]。分析相關(guān)原因，可能不同的性別、民族、年齡的研究對象受到環(huán)境和遺傳因素的影響，血漿HCY水平也存在一定的差異。本研究采用循環(huán)酶比色法檢測標本的HCY水平，由相關(guān)參考文獻得知循環(huán)酶法檢測HCY的方法性能驗證，符合臨床要求[17]。

本研究結(jié)果顯示，2 347例的血清HCY水平不符合正態(tài)分布(P<0.05)，男女HCY水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；各個年齡組組間比較顯示，男女性HCY水平在年齡≥20～29歲、≥30～39歲、≥40～49歲這3個年齡段差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；在年齡≥50～59歲、≥60～69歲、>70歲這3個年齡段差異也均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，因此男性HCY參考區(qū)間：≥20～49歲為8.12～24.08 μmol/L，≥50歲為8.73～21.53 μmol/L；女性HCY參考區(qū)間：20～49歲為5.84～17.77 μmol/L，≥50歲為6.52～16.43 μmol/L。

HCY水平與檢測的試劑、儀器均有關(guān)系，本研究數(shù)據(jù)僅供參考，希望以上結(jié)果能夠?qū)Υ筮B地區(qū)人群的體檢報告、疾病的診斷及鑒別有一定的臨床意義。

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