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    男性不同類型染色體多態(tài)性對常規(guī)體外受精治療結(jié)局的影響

    2018-03-15 08:21:46乜照燕甄秀麗趙素英吳海峰
    中國計劃生育學(xué)雜志 2018年11期
    關(guān)鍵詞:精液精子多態(tài)性

    乜照燕 張 娜 甄秀麗 趙素英 張 軼 吳海峰

    1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院(石家莊,050011);2.河北省胸科醫(yī)院

    染色體多態(tài)性存在于不同人群個體之間,主要包括1、9、16 號染色體次縊痕增加或缺失,D/G組染色體隨體區(qū)變異,9號染色體臂間倒位以及Y染色體長臂長度等變異[1]。一般認(rèn)為染色體多態(tài)性不會引起個體臨床表型變化,但近年研究表明染色體多態(tài)性可能導(dǎo)致某些臨床效應(yīng),如不孕不育、習(xí)慣性流產(chǎn)[2-3]等。在體外受精(IVF)過程中,不同類型的男性染色體多態(tài)性的臨床結(jié)局存在爭議。本文旨在探討男性染色體多態(tài)性與輔助生育結(jié)局的關(guān)系,為輔助生殖咨詢提供相關(guān)臨床依據(jù)。

    1 資料和方法

    1.1 研究對象

    經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)及患者知情同意選擇 2014年6月-2016年6月在本院接受常規(guī)IVF治療的夫婦198對,為排除女性年齡和不孕因素對卵子質(zhì)量、受精、著床等因素的影響,女性配偶以年齡<35歲、單純輸卵管因素不孕、基礎(chǔ)卵泡生成素( FSH)水平≤8 U/L、基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)≥8個、染色體正常、首次行新鮮周期胚胎移植、黃體期長方案為入組條件。根據(jù)男方染色體多態(tài)性分為4組,D/G隨體增加為A組21例,次溢痕增加( 包括1號、9 號、16號染色體)為B組20例,9號染色體臂間倒位者為C組17例,Y染色體變異( 包括大Y和小Y)為D組20例,男性染色體正常者120例作為對照組。

    1.2 研究方法

    1.2.1外周血淋巴細(xì)胞染色體核型分析于IVF-ET術(shù)前, 所有對象進(jìn)行常規(guī)外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng),染色體制備主要采用G顯帶技術(shù)進(jìn)行染色,對至少30個分裂中期細(xì)胞進(jìn)行分析,配對3個核型,顯帶分辨率在400~550條帶,按人類細(xì)胞學(xué)國際命名體制(ISCN2016)進(jìn)行染色體核型分析。

    1.2.2精液常規(guī)檢查取卵當(dāng)日男方收集精液,精液液化后按照參考文獻(xiàn)[4]行精液常規(guī)檢查。精子形態(tài)學(xué)分析采用Diff-Quick快速染色方法染色,采用Kruger精子形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn),頭、頸、中段和尾部均正常的精子認(rèn)定為正常,所有形態(tài)學(xué)處于臨界狀態(tài)的精子均列為異常。計數(shù)精子200條計算正常精子形態(tài)百分率(≥4%為正常)。精子存活率采用伊紅-苯胺黑染色(深圳華康生物醫(yī)學(xué)工程有限公司),計算著色和不著色精子的比例。

    1.2.3體外受精及妊娠結(jié)局采用黃體期長方案控制性促排卵,女方取卵同時男方收集精液,精液充分液化后,用Spermgrad 梯度離心處理精液,調(diào)整精子濃度為10×106/ml,取卵后3~4 h加入精子,16~20h觀察受精情況。72 h觀察胚胎發(fā)育情況,并評定胚胎質(zhì)量,移植胚胎。優(yōu)質(zhì)胚胎標(biāo)準(zhǔn):第3天胚胎細(xì)胞總數(shù)≥7個,碎片≤20%。取卵日開始每日肌注黃體酮60 mg支持黃體。胚胎移植后14d尿妊娠試驗或血β-hCG確定生化妊娠,移植后35d B超見孕囊診斷臨床妊娠,≤12周妊娠終止為早期流產(chǎn)。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計數(shù)資料采用χ2檢驗,多樣本率兩兩比較的χ2分割法,計量資料采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 基本情況

    男方年齡23~45歲,女方年齡27~34歲;不孕年限1~8年。5組對象在女方年齡、體質(zhì)量指數(shù)、基礎(chǔ)性激素水平和卵泡數(shù)等比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

    2.2 女方促排卵情況

    5組對象女方促性腺激素(Gn)用量、Gn天數(shù)、人絨毛膜促性腺激素(hCG)日E2、hCG日內(nèi)膜厚度、獲卵數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0. 05)。

    2.3 男方精液基本情況

    5組精液量、精子濃度、前向運(yùn)動精子百分率、精子存活率以及精子正常形態(tài)相比無差異(P>0.05)。見表1。

    表1 各組對象精液基本情況比較±s)

    2.4 男方IVF結(jié)局情況

    5組對象間正常受精率、總受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、植入率、妊娠率、流產(chǎn)率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

    表2 各組對象體外受精情況比較[%(例)]

    3 討論

    傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為染色體多態(tài)性多是無意義重復(fù)序列,不引起臨床表型異常。但隨著分子細(xì)胞遺傳學(xué)檢測技術(shù)的發(fā)展和對非編碼基因研究的深入,越來越多的研究認(rèn)為染色體的多態(tài)部分可能會在細(xì)胞分裂過程中造成同源染色體配對困難,導(dǎo)致染色體不分離,形成異常配子,胚胎發(fā)生染色體非整倍性改變引發(fā)流產(chǎn)、不育不孕及其它臨床效應(yīng)[5-7]。此外,異染色質(zhì)在著絲粒功能方面起著重要的作用,它是姐妹染色單體結(jié)合和分離所必需的[7],染色體主縊痕區(qū)著絲粒-動粒復(fù)合體(CKC)是染色體運(yùn)動和均等分離的結(jié)構(gòu)和功能基礎(chǔ)。CKC形態(tài)發(fā)生變化,可能會干擾染色體正常運(yùn)動和分離[8]。有研究認(rèn)為染色體多態(tài)性可降低妊娠率增加流產(chǎn)率[9-12]。也有學(xué)者認(rèn)為染色體多態(tài)性與生殖異常沒有直接關(guān)系,不影響生育[13-14]。染色體多態(tài)性對生殖功能的影響一直存在爭議。大部分關(guān)于多態(tài)性的研究都是針對所有多態(tài)性對結(jié)局的影響,對于不同類別多態(tài)性對助孕結(jié)局影響尚需進(jìn)一步研究。

    戴小凡等[15]研究發(fā)現(xiàn)染色體多態(tài)性與精液質(zhì)量無明顯的相關(guān)性。本文資料顯示,不同類型的染色體多態(tài)性男性精液質(zhì)量與對照組相比未見統(tǒng)計學(xué)差異。有研究稱在Y染色體上有一些與男性生殖相關(guān)的基因,Y染色體的結(jié)構(gòu)多態(tài)性變異,可能會對這些功能區(qū)域產(chǎn)生影響,導(dǎo)致精子質(zhì)量下降。由于本研究數(shù)量有限,且所選病例接受常規(guī)IVF助孕,一般都是精液正?;蛘呔嘿|(zhì)量稍差男性,故在本研究中未發(fā)現(xiàn)男性染色體多態(tài)對精液質(zhì)量影響。

    Bhasin等[16]對1978對行IVF不孕不育夫婦進(jìn)行染色體多態(tài)性研究,認(rèn)為染色體多態(tài)性對于IVF-ET的臨床妊娠率、早期流產(chǎn)率及活產(chǎn)率無明顯影響。高輝[17]報道染色體多態(tài)性對于IVF/ICSI-ET治療患者的胚胎種植率、臨床妊娠率和早期流產(chǎn)率均無明顯影響。而郭威等[18]研究認(rèn)為男性染色體多態(tài)性可能導(dǎo)致ICSI-ET中多原核受精率上升,但對IVF/ICSI-ET結(jié)局均無明顯影響。本研究對象為常規(guī)IVF受精,未發(fā)現(xiàn)染色體多態(tài)性患者受精率有異常;不同類型多態(tài)性組與正常組相比,受精率、卵裂率、優(yōu)胚率、胚胎種植率、臨床妊娠率及早期流產(chǎn)率均無差異;在染色體多態(tài)性組,流產(chǎn)率有增高趨勢但無統(tǒng)計學(xué)差異,可能與病例數(shù)較少有關(guān)。

    本研究結(jié)果顯示,男性染色體多態(tài)并不影響IVF助孕治療的結(jié)局。未來可能需要通過分子遺傳學(xué)技術(shù)對特定的多態(tài)區(qū)域的關(guān)鍵基因進(jìn)行檢測確診,以為臨床和遺傳咨詢提供更詳細(xì)的指導(dǎo)。

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