微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)核心抗體臨床意義的探討

楊森，局軍，張興旺，郭瑞

(甘肅省人民醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，甘肅 蘭州730000)

CMIA技術(shù)具有靈敏度高、線性寬、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn)已應(yīng)用于對(duì)乙肝病毒血清學(xué)感染指標(biāo)的檢測(cè)，并以S/CO值半定量的方式作為結(jié)果。在檢測(cè)核心抗體方面使用原倍血清，其陽性率相比稀釋之后的檢測(cè)方法存在一定的差異[1-3]。國內(nèi)目前多采用ELISA 1：30倍稀釋方法檢測(cè)HBcAb，其結(jié)果具備一定的臨床診斷參考價(jià)值[4-6]。在表面抗原陰性模式中CMIA方法所檢測(cè)的陽性核心抗體是否都具備臨床意義？本研究根據(jù)CMIA方法所測(cè)HBcAb陽性標(biāo)本利用ELISA1：30倍稀釋方法分析比對(duì)，以期能尋找到CMIA檢測(cè)HBcAb具有臨床意義的S/CO值范圍。

1 材料與方法

1．1 研究對(duì)象 標(biāo)本來源于2013年11月至2014年3月本院門診和住院患者，選擇CMIA方法所檢測(cè)的HBsAg陰性、HBcAb陽性標(biāo)本。共收集標(biāo)本654例，男性372例，占56．9%，女性282例，占43．1%。

1．2 儀器與試劑 美國雅培微粒子化學(xué)發(fā)光儀i2000SR及其配套的試劑，校準(zhǔn)品及北京康切斯坦質(zhì)控品。上?？迫A核心抗體ELISA方法檢測(cè)試劑盒。丹麥雷杜RT2100C酶標(biāo)儀。

1．3 方法 根據(jù)雅培i2000SR微粒子化學(xué)發(fā)光儀所檢測(cè)乙肝五項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果，篩選HBsAg陰性、HB-cAb 陽性標(biāo)本（HBsAg S/CO 值＜0．05IU/ml為陰性，HBcAb S/CO值≥1．0為陽性結(jié)果）。標(biāo)本無明顯溶血及黃疸。符合條件即可收集標(biāo)本血清約0．5ml于Eppendorf管中，密封保存于-20℃冰箱內(nèi)，儀器的日常維護(hù)，質(zhì)控管理，樣本測(cè)試均嚴(yán)格按照試劑說明書及相關(guān)的SOP文件執(zhí)行。根據(jù)ELISA試劑盒說明書，采用酶標(biāo)儀對(duì)所收集標(biāo)本進(jìn)行1：30倍生理鹽水稀釋檢測(cè)HbcAb。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18．0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所收集標(biāo)本采用四分位數(shù)描述其結(jié)果。利用ROC曲線分析評(píng)價(jià)CMIA法HB-cAb S/CO值對(duì)ELISA檢測(cè)結(jié)果的診斷價(jià)值，P＜0．05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 對(duì)ELISA三組數(shù)據(jù)的年齡和核心抗體S/CO值進(jìn)行正態(tài)性分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果為右偏態(tài)分布 （表1）。偏度和峰度是以數(shù)學(xué)矩原理檢測(cè)得到的結(jié)果，當(dāng)兩者都為0時(shí)才能滿足正態(tài)分布的要求。本文數(shù)據(jù)偏度為負(fù)數(shù)，表示數(shù)據(jù)分布偏右，峰度＞0表示數(shù)據(jù)分布曲線峰峭比較尖，＜0表示曲線比較平闊。

表1 HbcAb數(shù)據(jù)正態(tài)性檢驗(yàn)表

2．2 本文HBcAb的S/CO值數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性分析為偏態(tài)分布，故以P50(P25，P75)四分位數(shù)表示資料的分布情況。根據(jù)ELISA方法所檢測(cè)核心抗體的結(jié)果，將其分為ELISA陰性組和陽性組，見表2。

根據(jù)CMIA檢測(cè)HBcAb的S/CO值高低，將其分為三組， 低值組 （1．00～3．99）、 中值組 （4．00～6．99）、高值組（7．00～9．99），三組 ELISA 檢出 HB-cAb陽性標(biāo)本的比例有明顯的差異見表3。

表2 HBcAb標(biāo)本基本情況

表3 各組ELISA檢出HBcAb陽性率情況

2．3 利用ROC曲線分析并得到HBcAb S/CO值為7．79作為具有臨床診斷意義的臨界值其曲線下面積為 0．922，95%可信區(qū)間為（0．900，0．944），靈敏度為 79．2%， 特異度為 93．1%，Yunden 指數(shù)為 0．72，P=0．000，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖 1。

圖1 HBcAb S/CO值ROC曲線

3 討論

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染作為一種社會(huì)性疾病在世界范圍內(nèi)分布廣泛，是常見的感染性疾病之一，據(jù)流行病學(xué)調(diào)查研究顯示目前全球HBV慢性感染患者已超過3．5億[7]，1992年流行病學(xué)調(diào)查顯示人群攜帶率約為10%，其中1-59歲年齡段攜帶率約為9．8%。此后由于國家推行乙型肝炎疫苗接種計(jì)劃，表面抗原攜帶率有所下降，根據(jù)2006年國家流行病學(xué)調(diào)查研究顯示1-59歲年齡段攜帶率約為7．2%，5歲以下兒童攜帶率已控制在 1．0%左右[8，9]。

本文根據(jù)ELISA復(fù)檢結(jié)果將其分為陽性組、陰性組。 陽性組四分位數(shù) 8．26（7．77，8．59）高于陰性組及總體標(biāo)本。四分位數(shù)的意義是組內(nèi)有n個(gè)變量＜PX，7．77 為較小四分位數(shù) P25， 組內(nèi)＜7．77 的數(shù)值占25%，＞7．77的數(shù)值占75%，表明ELISA陽性組內(nèi)的標(biāo)本多位于CMIA檢測(cè)核心抗體S/CO值較高的范圍之內(nèi)。

經(jīng)ROC曲線分析，本文選擇CMIA檢測(cè)核心抗體S/CO值7．79作為具有臨床診斷參考價(jià)值的界點(diǎn)，其靈敏度為 79．2%，特異度為 93．1%，Yunden指數(shù)為0．72；Yunden指數(shù)為判斷界點(diǎn)診斷效用的綜合指標(biāo)，其取值范圍在-1～1之間，越接近1說明診斷的效用越好。而且7．79恰好位于ELISA陽性組四分位數(shù) 8．26 （7．77，8．59） 范 圍之 內(nèi)， 接 近P257．77。

本文另收集ELISA手工方法一周內(nèi)所檢測(cè)表面抗原陰性、HBcAb陽性標(biāo)本，共100例（核心抗體均為1：30倍稀釋后檢測(cè)），利用CMIA技術(shù)對(duì)其分析，共檢出核心抗體陽性標(biāo)本92例，其S/CO值的中位數(shù)（M）為 9．30，高于本文界定值 7．79，分析可能有以下三點(diǎn)原因，第一：由于654例標(biāo)本的存儲(chǔ)時(shí)間較長等人為影響因素，可能導(dǎo)致本文所得結(jié)論相對(duì)偏低；第二：ELISA檢測(cè)核心抗體均為1：30倍稀釋后檢測(cè)，而雅培化學(xué)發(fā)光采用原倍濃度檢測(cè)，兩種方法檢測(cè)原理的不同也可能導(dǎo)致所得結(jié)果有所差異；第三：ELISA核心抗體檢測(cè)試劑盒為國產(chǎn)科華試劑，雅培化學(xué)發(fā)光所用試劑為美國進(jìn)口，兩種試劑的不同，也可能造成結(jié)果之間有所差異。但兩種方法所得核心抗體結(jié)果的S/CO值都處在較高范圍內(nèi)。并且92例陽性標(biāo)本中S/CO值≥7．79的標(biāo)本約占 77．2%，也證明 ELISA與CMIA這兩種方法在檢測(cè)HbcAb方面具有一定的一致性，在此條件下也反向說明本文所得結(jié)果CMIA技術(shù)檢測(cè)HbcAb的S/CO值≥7．79具有一定的臨床診斷參考價(jià)值。

CMIA方法所檢測(cè)HbcAb的S/CO較高值對(duì)于提示機(jī)體是否存有潛在的HBV復(fù)制或感染，一方面需要結(jié)合患者的臨床病史和其它相關(guān)抗原抗體的檢測(cè)情況；另一方面則需要觀察患者的HBVDNA檢測(cè)結(jié)果[10，11]。針對(duì)傳染性疾病，臨床醫(yī)生對(duì)患者疾病狀況的診斷以及在觀察治療效果期間，需要綜合分析相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)，而我們檢驗(yàn)工作者對(duì)儀器的準(zhǔn)確度，方法學(xué)的敏感性和特異性更要了然于心，陽性和陰性雖是一個(gè)字的差別，但它卻造成患者在精神和心理方面沉重的負(fù)擔(dān)[12]。本文也希望通過這些論證最終得到的結(jié)果能有益于臨床醫(yī)生和檢驗(yàn)工作者，更希望我們臨床和醫(yī)技之間能多些溝通和交流，增加彼此的信任，以使更多患者受益，造福人類。

本文實(shí)驗(yàn)尚有不足之處：本文所得結(jié)論與患者病情的相關(guān)資料未能做一比較，兩者如能聯(lián)系，可進(jìn)一步完善本文的論證。在ELISA手工操作環(huán)節(jié)，檢測(cè)結(jié)果不能避免人為因素的影響。應(yīng)當(dāng)增加觀察標(biāo)本數(shù)量進(jìn)一步證實(shí)CMIA檢測(cè)HBcAb的臨床診斷界點(diǎn)，以映證本文所得結(jié)論。

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