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    Cobase602全自動(dòng)免疫分析儀檢測(cè)胃泌素釋放肽前體的性能分析

    2018-03-14 02:15:08林麗珍王建偉鄭欽欽
    關(guān)鍵詞:肺癌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

    林麗珍,王建偉,鄭欽欽

    (1、廈門大學(xué)附屬福州市第二醫(yī)院檢驗(yàn)科,福建 福州 350007;2、福建省立醫(yī)院南院福建省立金山醫(yī)院檢驗(yàn)科,福建 福州350008)

    小細(xì)胞肺癌(SCLC)生長(zhǎng)迅速,易復(fù)發(fā)及早期轉(zhuǎn)移,而對(duì)放療和化療敏感,因此,對(duì)其早期診斷和合理治療尤為重要[1-4]。神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)是公認(rèn)的SCLC腫瘤標(biāo)志物,已應(yīng)用于臨床多年。血清胃泌素釋放肽前體(ProGRP)是目前應(yīng)用較活躍的新的SCLC腫瘤標(biāo)志物,正逐步用于臨床[4,5]。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)是 ProGRP 相對(duì)經(jīng)典的檢測(cè)方法,隨著技術(shù)的不斷革新,電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)ProGRP正被廣泛應(yīng)用。采用電化學(xué)發(fā)光法,可以及時(shí)檢測(cè),自動(dòng)化程度更高,減少人工誤差,同時(shí)可大大縮短檢測(cè)時(shí)間[6]。根據(jù)ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)[7,8],必須對(duì)其檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行性能評(píng)價(jià),本文通過(guò)分析其精密度、線性、回收率、參考范圍等,從而評(píng)價(jià)該法對(duì)ProGRP檢測(cè)的性能。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來(lái)源 來(lái)自2016年5月13日至5月17日福建省立金山醫(yī)院免疫實(shí)驗(yàn)室接收的23份我院國(guó)內(nèi)體檢健康人血清標(biāo)本。

    1.2 儀器與試劑

    1.2.1 試劑 胃泌素釋放肽前體檢測(cè)試劑盒(批號(hào):190275)、胃泌素釋放肽前體定標(biāo)液(18819)、胃泌素釋放肽前體質(zhì)控液(低水平批號(hào):186304,高水平批號(hào):186305),試劑均來(lái)自上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司。

    1.2.2 儀器 Roche Cobase602全自動(dòng)免疫分析儀(上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司)。

    1.3 檢測(cè)方法

    1.3.1 精密度評(píng)價(jià) 按照CLSI EP15-A2標(biāo)準(zhǔn):2個(gè)濃度水平,5d實(shí)驗(yàn),每天一批,每批每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定3次。

    1.3.2 線性評(píng)價(jià) 選擇低濃度(L)和高濃度(H)患者標(biāo)本各1份,濃度覆蓋儀器說(shuō)明書給出的線性范圍,H和L按等比關(guān)系配制形成系列濃度血清( 如 :1L,0.8L+0.2H,0.6L+0.4H,0.4L+0.6H,0.2L+0.8H,1H)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)樣品在檢測(cè)系統(tǒng)上重復(fù)測(cè)定2次,記錄結(jié)果。將實(shí)測(cè)值與預(yù)期值作比較。采取平均斜率來(lái)確定系列樣品應(yīng)含有的待測(cè)物的預(yù)期值(X),所有樣品重復(fù)測(cè)定的均值為實(shí)測(cè)值(Y),將所有結(jié)果點(diǎn)在X-Y坐標(biāo)圖上,計(jì)算回歸方程:Y=bX+a。1.3.3 回收率 選擇一患者標(biāo)本 (濃度為 28.6pg/ml)為基礎(chǔ)樣本,取 900μl基礎(chǔ)樣本和 100μl蒸餾水作為對(duì)照樣本,分別取900μl基礎(chǔ)樣本、10μl濃度為224Pg/ml和90μl蒸餾水作為回收樣品1;取900μl基礎(chǔ)樣本、60μl濃度為 224Pg/ml和 40μl蒸餾水作為回收樣品2;取900μl基礎(chǔ)樣本、90μl濃度為224Pg/ml和10μl蒸餾水作為回收樣品3。每份樣品在檢測(cè)系統(tǒng)上測(cè)定2次,取平均值。根據(jù)以下公式計(jì)算回收率:回收率=回收濃度/加入濃度×100%;回收濃度=最終測(cè)定濃度-基礎(chǔ)樣本濃度;加入濃度=標(biāo)準(zhǔn)品濃度×標(biāo)準(zhǔn)品體積/(標(biāo)準(zhǔn)品體積+基礎(chǔ)樣本體積)[9]。

    1.3.4 參考區(qū)間 參考 NCCLSC28-A2, 通過(guò)測(cè)定23份我院國(guó)內(nèi)體檢健康人血清標(biāo)本,對(duì)<69.2Pg/ml的生物參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證;若20份標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果均在參考區(qū)間內(nèi)或僅有2個(gè)標(biāo)本超出,則驗(yàn)證通過(guò)。否則,進(jìn)行參考區(qū)間確立實(shí)驗(yàn)。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均在SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件包以及EXCEL表格上進(jìn)行。線性評(píng)價(jià)中,計(jì)算出回歸方程:Y=bX+a。若相關(guān)系數(shù)r≥0.975,b 在 0.95~1.05 范圍內(nèi),a 接近于 0 (小于高值標(biāo)本濃度的1%),則可判斷線性范圍;若a不接近于 0,則做 a 與 0 差異的 t檢驗(yàn),若 t<t(0.05,v),v=n-2,說(shuō)明截距是由統(tǒng)計(jì)引入的,實(shí)際的標(biāo)準(zhǔn)曲線能通過(guò)原點(diǎn),該測(cè)定方法在實(shí)驗(yàn)涉及的濃度范圍內(nèi)呈線性。

    2 結(jié)果

    2.1 精密度驗(yàn)證 低、高水平樣本檢測(cè)的批內(nèi)精密度均<1/4TEa,批間精密度均<1/3TEa。該檢測(cè)方法的批內(nèi)及批間精密度均符合廠家要求小于10%(見(jiàn)表 1)。

    表1 精密度驗(yàn)證結(jié)果

    2.2 線性范圍驗(yàn)證 ProGRP 在 10.59~1565.5pg/ml范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系 (廠家線性范圍3~5000Pg/ml),R2=0.9975,b=0.985 在 0.95~1.05 范圍內(nèi);a=5.086,經(jīng)t檢驗(yàn)顯示 a與 0無(wú)顯著性差異(P>0.05)(見(jiàn)表 2,如圖 1)。

    2.3 回收實(shí)驗(yàn) 根據(jù)相關(guān)公式計(jì)算的檢測(cè)平均回收率為 100.8%(見(jiàn)表 3)。

    2.4 參考區(qū)間 參考區(qū)間為<69.2Pg/ml。其中23份標(biāo)本全部在該參考范圍內(nèi),所檢測(cè)的結(jié)果100%在參考范圍之內(nèi),大于允許值90%,因此我室目前的參考范圍經(jīng)驗(yàn)證可用。(見(jiàn)表4)

    表2 線性范圍驗(yàn)證結(jié)果

    表3 回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    圖1 線性驗(yàn)證數(shù)據(jù)散點(diǎn)圖

    3 討論

    肺癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤,具有惡性度高、發(fā)病快等特點(diǎn)。小細(xì)胞肺癌占肺癌的20%~25%,是一種未分化、惡性程度高、病因復(fù)雜的惡性腫瘤,其生長(zhǎng)迅速,易早期轉(zhuǎn)移,且對(duì)放療和化療高度敏感,SCLC的早期診斷是提高療效的關(guān)鍵。然而早期SCLC缺乏特異性癥狀和體征,影像學(xué)檢查在SCLC早期診斷中具有很大的局限性。SCLC相關(guān)血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)具有較高的靈敏度,血液標(biāo)本易獲取和無(wú)創(chuàng)等特點(diǎn),在SCLC的診斷及治療過(guò)程中日益受到重視[10,11]。神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)作為SCLC標(biāo)記物,其應(yīng)用于臨床診斷已多年,但在局限性SCLC診斷中,常出現(xiàn)陽(yáng)性率過(guò)低,標(biāo)本易受溶血、脂血影響[12,13]。胃泌素釋放肽前體(ProGRP)是目前應(yīng)用較活躍的一種新的小細(xì)胞肺癌腫瘤標(biāo)志物,其敏感性、特異性和可靠性均優(yōu)于NSE,作為診斷小細(xì)胞肺癌最明確的指標(biāo)正逐步用于臨床。

    表4 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

    ProGRP是胃泌素釋放肽(GRP)的前體結(jié)構(gòu)。而GRP和ProGRP在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及其治療中起著重要的作用。ProGRP顯示GRP水平和GRP基因表達(dá),是SCLC的一種新的腫瘤標(biāo)志物,在國(guó)內(nèi)外已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。由于SCLC具有神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的性質(zhì),因此ProGRP和NSE在SCLC的診斷中具有良好的診斷價(jià)值[14,15]。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)ProGRP相對(duì)經(jīng)典的檢測(cè)方法,然而由于手工方法加樣、洗滌,溫育、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線等操作步驟多,則重復(fù)性較差,人為誤差較大,這就迫切需要革新技術(shù),全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光應(yīng)運(yùn)而生。在Cobase602全自動(dòng)化免疫分析儀上用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)檢測(cè)胃泌素釋放肽前體(ProGRP)重復(fù)性好,人為誤差小。

    對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)或檢測(cè)方法進(jìn)行性能評(píng)價(jià)是臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理的重要內(nèi)容。精密度是反映檢測(cè)系統(tǒng)整體性能的首要指標(biāo),也是進(jìn)行其他方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的前體[16]。本研究精密度評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)按照EP15-A2文件進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示在Cobase602全自動(dòng)化免疫分析儀上用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)檢測(cè)胃泌素釋放肽前體(ProGRP),其低、高水平批內(nèi)精密度均<1/4TEa,批間精密度均<1/3TEa,均小于廠家聲明的最小CV。線性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)根據(jù)CLSI EP6-A文件,采用簡(jiǎn)便的平均斜率法,結(jié)果顯示在Cobase602全自動(dòng)化免疫分析儀上用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)檢測(cè)胃泌素釋放肽前體 (ProGRP),在3-5000Pg/ml范圍內(nèi)具良好線性關(guān)系 (Y=0.9854X+5.0860,R2=0.9975),達(dá)到廠家的檢測(cè)聲明。 在定量分析驗(yàn)證時(shí),準(zhǔn)確度通??捎没厥章时硎?,回收率越接近100%表明分析方法準(zhǔn)確度越高。本研究回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,基于磁珠法的HBVDNA檢測(cè)回收率為100.8%,接近100%,準(zhǔn)確度高[17]。根據(jù)NCCLSC28-A2, 參考區(qū)間為<69.2pg/ml驗(yàn)證試驗(yàn)通過(guò)??傊贑obase602全自動(dòng)化免疫分析儀上用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)檢測(cè)胃泌素釋放肽前體(Pro-GRP),實(shí)現(xiàn)了快速縮短檢測(cè)時(shí)間、重復(fù)性好、人為誤差小,具有良好檢測(cè)性能,適合臨床實(shí)驗(yàn)室推廣使用。

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