血清胃泌素釋放肽前體31～98片段和神經(jīng)元特異性烯醇化酶聯(lián)合檢測(cè)在小細(xì)胞肺癌診斷中的臨床價(jià)值

尚鵬超 ，謝慧波 ，徐繼業(yè) ，尚勇 ，閆登峰 ，張曉展

(1、周口市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 周口 466000；2、羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司，上海 200131；3、周口市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 周口 466000；4、周口市中心醫(yī)院心胸外科，河南 周口 466000；5、周口市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河南 周口 466000；6、鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州450000)

增殖早、惡性程度高的未分化型小細(xì)胞肺癌（SCLC）約占年新發(fā)肺癌20%左右；及時(shí)發(fā)現(xiàn)、診斷和治療是提高SCLC患者5年生存率的關(guān)鍵。本研究旨在探討評(píng)價(jià)胃泌素釋放肽前體 （ProGRP）31-98片段和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)作為小細(xì)胞肺癌（SCLC）診斷指標(biāo)在SCLC診斷中的臨床價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1．1 對(duì)象 收集2014年6月-2016年5月間在周口市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科、心胸外科、腫瘤內(nèi)科首次就診并確診的SCLC患者49例，非小細(xì)胞肺癌患者172例 （上述病人穿刺病理活檢或內(nèi)鏡組織病理活檢或手術(shù)后組織病理學(xué)確診）；良性肺病患者（臨床診斷上呼吸道感染患者）100例；健康者100例 （均來自周口市中心醫(yī)院同期體檢健康人群）。且排除以上人群無腎?。驒z、血清肌酐、血清尿素氮、血清尿酸、B超檢查結(jié)果正常）、無其他原發(fā)腫瘤對(duì)ProGRP（31-98）檢測(cè)的干擾。

1．2 方法

1．2．1 標(biāo)本采集 分離膠生化試管采集外周血5ml，1h內(nèi)用 Roche cobas671前處理離心機(jī) 25（℃）下10min分離血清，去除脂血、溶血標(biāo)本。

1．2．2 儀器與試劑 儀器采用 Roche cobas e602；血清ProGRP（31-98）和NSE體外診斷試劑盒、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品均購(gòu)自Roche公司。

1．2．3 ProGRP（31-98）和 NSE 檢測(cè) 在設(shè)備運(yùn)行正常、通訊正常、室內(nèi)質(zhì)量控制在允許范圍的情況下，嚴(yán)格按照SOP操作規(guī)程檢測(cè)血清ProGRP（31-98）和NSE濃度。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 IBM SPSS Statistics 19．0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)x表示，多組間比較應(yīng)用方差分析，各組之間兩兩比較應(yīng)用q檢驗(yàn)，ROC曲線分析評(píng)價(jià)臨床應(yīng)用價(jià)值，P＜0．05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 兩組血清 ProGRP（31-98）、NSE 水平比較

表1 兩組血清ProGRP（31-98）、NSE中位數(shù)水平在（健康對(duì)照組、良性肺病組、NSCLC組、SCLC組）組間的比較

2．2 ProGRP（31-98）、NSE 以及 ProGRP（31-98）+NSE診斷SCLC比較 NSE診斷SCLC的ROC曲線下面積為 0．832，P=0．000，95%CI（0．754～0．911），以25ng/ml為臨界點(diǎn)起敏感度和特異度分別為67．1%和 88．3%。 ProGRP （31-98） 診斷 SCLC 的ROC 曲線下面積為 0．864，P=0．000，95%CI（0．794～0．934），以80pg/ml為臨界點(diǎn)起敏感度和特異度分別為 70．4%和 92．3%。 ProGRP（31-98）+NSE 聯(lián)合診斷 SCLC的 ROC曲線下面積為 0．926，P=0．000，95%CI （0．877～0．976），ProGRP （31-98）以80pg/ml為臨界點(diǎn)、NSE以25ng/ml為臨界點(diǎn)敏感度和特異度分別為87．1%和96．7%。

圖1 ProGRP（31-98）、NSE 以及ProGRP（31-98）+NSE 診斷SCLC的ROC曲線比較

3 討論

臨床診斷SCLC的主要方法有影像學(xué)、組織病理學(xué)、相關(guān)血清腫瘤標(biāo)志物；由于SCLC發(fā)病以肺門部位居多以及微小未能成像等原因造成影像學(xué)不易發(fā)現(xiàn)，侵入性組織病理學(xué)檢查有諸多禁忌癥等原因，造成SCLC相關(guān)血清腫瘤標(biāo)志物在診斷早期SCLC方面顯得尤為重要；常用相關(guān)標(biāo)志物有NSE 和 ProGRP（31-98）。

糖分解烯醇酶(2-phospho-D-glycerate hydrolase．EC 4．2．4．11) 由 α、β 和 γ 三種亞單位組成，α亞單位見于哺乳動(dòng)物多種類型組織中，β亞單位則主要見于心臟和肌肉組織。神經(jīng)元特異烯醇化酶（NSE）為αγ和γγ異構(gòu)體，高濃度存在于神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞以及這些細(xì)胞所引發(fā)的腫瘤細(xì)胞中[1]，血清NSE現(xiàn)在主要用于SCLC(70%升高)的鑒別診斷、病情監(jiān)測(cè)、療效評(píng)價(jià)和復(fù)發(fā)預(yù)報(bào)。但由于NSE在紅細(xì)胞中大量存在，標(biāo)本溶血（0．1%的溶血度就可導(dǎo)致結(jié)果假陽性[2]）、未及時(shí)分離血清（Roche要求1h內(nèi)分離血清）都是導(dǎo)致NSE結(jié)果假性大幅升高而造成臨床誤判以至診斷SCLC特異度不高的原因；血漿標(biāo)本不可用導(dǎo)致其使用受限。本實(shí)驗(yàn)中1h內(nèi)分離血清及除外溶血、脂血標(biāo)本都盡可能避免了由此帶來的結(jié)果干擾。

胃泌素釋放肽（GRP）參與調(diào)節(jié)人體生理功能、病理狀態(tài)等，由迷走神經(jīng)節(jié)后纖維釋放的一種胃腸激素，主要刺激胃的G細(xì)胞分泌胃泌素，參與平滑肌細(xì)胞的收縮、發(fā)揮存進(jìn)細(xì)胞間的相互作用（上皮細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散）；大量分布在哺乳動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)、胃腸道、呼吸道。SCLC存在高水平的GRP表達(dá)和分泌、正常肺部上皮低表達(dá)或不表達(dá)、良性肺病低表達(dá)以及上皮來源腫瘤中的低表達(dá)使其成為SCLC診斷的重要腫瘤標(biāo)志物。由于GRP的半衰期只有2min，穩(wěn)定性差，體外實(shí)驗(yàn)難以檢測(cè)[3]，有報(bào)道人工合成GRP的基因編碼產(chǎn)物ProGRP（31-98）在血清中含量穩(wěn)定，水平可代表GRP的水平以及GRP的基因表達(dá)，可臨床用于診斷SCLC的腫瘤標(biāo)志物[4-7]。52．2%慢性腎功能衰竭患者血清ProGRP（31-98）升高[8]，部分甲狀腺髓樣癌和前列腺癌患者 ProGRP（31-98）升高[9]，是造成 ProGRP假陽性的常見因素；

本實(shí)驗(yàn)中 NSE、ProGRP（31-98）、ProGRP（31-98）+NSE均能夠有效地區(qū)分健康人、良性肺病患者、肺癌患者；且 ProGRP（31-98）+NSE 作為聯(lián)合診斷（序列實(shí)驗(yàn)）指標(biāo)與 ProGRP（31-98）、NSE 單診斷指標(biāo)比較優(yōu)勢(shì)明顯：ROCProGRP（31-98）+NSE(0．928)＞ROC ProGRP（31-98）(0．864)＞ROCNSE(0．832)；敏感度：ProGRP（31-98）+NSE（89．1）＞Pro-GRP（31-98）（70．4）＞NSE （67．1）； 特異度：ProGRP（31-98）+NSE（96．7）＞ProGRP（31-98）（92．3）＞NSE（88．3）。 與王敏[10]、楊興[11]、劉運(yùn)秋[12]倪軍[13]張萍[14]張素真[15]報(bào)道結(jié)果一致。本研究采用的電化學(xué)發(fā)光法相比傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法優(yōu)勢(shì)明顯：⑴標(biāo)記物再循環(huán)利用，發(fā)光時(shí)間長(zhǎng)、強(qiáng)度高、易于測(cè)定；⑵敏感度高(NSE 可達(dá) ng/m、ProGRP（31-98）可達(dá) pg/ml)；⑶線性范圍寬；⑷18min以內(nèi)可完成測(cè)定；結(jié)果相對(duì)更加可靠。

綜上所述，ProGRP （31-98）、NSE 在 SCLC 的診斷和鑒別中，ProGRP（31-98）優(yōu)于 NSE，但由于部分腫瘤單指標(biāo)的低表達(dá)，聯(lián)合應(yīng)用可提高SCLC的早期診斷，電化學(xué)發(fā)光法的應(yīng)用使本實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具信服力；同時(shí)在試驗(yàn)前后應(yīng)避免其他疾病和樣本處理對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。

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