我國(guó)雞球蟲(chóng)早期研究概況*

劉 婕 劉賢勇 蔡建平 林昆華 索 勛**

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193； 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，甘肅蘭州 730046)

1674年列文虎克(Antonie van Leeuwenhoek)首先在兔膽管中發(fā)現(xiàn)斯氏艾美耳球蟲(chóng)Eimeriasteidai卵囊，1875年Schneider以德國(guó)動(dòng)物學(xué)家Theodor Eimer之名建立艾美耳屬(GenusEimeria)，但直到1891年法國(guó)著名獸醫(yī)學(xué)家、現(xiàn)代獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)主要奠基人阿爾瑟德·瑞利(Louis-Joseph Alcide Railliet)等首先報(bào)道罹病雞盲腸中存在大量柔嫩艾美耳球蟲(chóng)(Eimeriatenella，當(dāng)時(shí)稱(chēng)Coccidiumtenellum，1913年由Railliet重新命名為現(xiàn)名)卵囊(Railliet，1913)，才將艾美耳球蟲(chóng)與雞的嚴(yán)重消化道損傷聯(lián)系起來(lái)(Chapman, 2014)。此后Railliet等對(duì)家養(yǎng)雞和鵪鶉等的一系列調(diào)查及Harold B. Fantham、Walter T. Johnson、Edward E. Tyzzer等球蟲(chóng)學(xué)先驅(qū)們對(duì)球蟲(chóng)生活史、球蟲(chóng)感染的宿主特異性和致病性、雞球蟲(chóng)種的分類(lèi)及流行調(diào)查系列研究，使人們充分認(rèn)識(shí)到球蟲(chóng)病對(duì)養(yǎng)雞生產(chǎn)的重大危害。

1904年北洋馬醫(yī)學(xué)堂建立，以實(shí)驗(yàn)科學(xué)為主要理論基礎(chǔ)的西方現(xiàn)代獸醫(yī)學(xué)正式傳入中國(guó)，開(kāi)始了病原生物學(xué)教學(xué)和研究的萌芽(李青山，2015)。1936年7月，中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)成立，但是由于人力、物力、財(cái)力不足及戰(zhàn)爭(zhēng)環(huán)境的影響，科研工作受到了極大地制約，第二年學(xué)會(huì)工作就陷入了停滯狀態(tài)。新中國(guó)成立后，百業(yè)待興，1950年起，熊大仕等畜牧獸醫(yī)界人士在北京發(fā)起恢復(fù)學(xué)會(huì)的活動(dòng)，科研工作在動(dòng)蕩中艱難進(jìn)行(http://www.caav.org.cn/showNewsXHJSDetail.asp?nsId=13)。自70年代末，孔繁瑤開(kāi)始組織開(kāi)展獸醫(yī)寄生蟲(chóng)培訓(xùn)班，介紹國(guó)際寄生蟲(chóng)學(xué)進(jìn)展，極大地推動(dòng)了我國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)的發(fā)展。1986年，孔繁瑤等獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)家在廣西南寧創(chuàng)立了中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)，獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)方面的研究工作進(jìn)入了一個(gè)新的局面。

第二次世界大戰(zhàn)結(jié)束后，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步與發(fā)展，禽類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)進(jìn)入迅速發(fā)展階段，開(kāi)始步入機(jī)械化(趙義斌，1991)，50年代末在我國(guó)北京、上海等主要城市周邊開(kāi)始出現(xiàn)集約化養(yǎng)雞生產(chǎn)，雖然只是處于萌芽階段，但是有雞的地方，就有雞球蟲(chóng)的存在(索勛，1998)，伴隨著集約化養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，雞球蟲(chóng)病的暴發(fā)與蔓延也隨之而來(lái)。1951年廖延雄等發(fā)表的《南昌數(shù)種重要的家禽內(nèi)寄生蟲(chóng)病》，對(duì)雞球蟲(chóng)病的流行情況及藥物防治進(jìn)行論述，是我國(guó)雞球蟲(chóng)病流行調(diào)查的首次報(bào)道。20世紀(jì)60年代初，熊大仕帶領(lǐng)學(xué)生在國(guó)內(nèi)開(kāi)展雞球蟲(chóng)病及其防治的研究，但由于文革時(shí)期帶來(lái)的一些限制因素，80年代才將研究的內(nèi)容整理成文、發(fā)表見(jiàn)刊。改革開(kāi)放后，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)建設(shè)的快速發(fā)展，集約化養(yǎng)雞生產(chǎn)日新月異，至1990年全國(guó)肉雞出欄量達(dá)到21億(劉春芳等，2011),雞球蟲(chóng)病研究也如雨后春筍般迅速展開(kāi)?？追爆?、許綬泰、汪志楷、蔣金書(shū)、林昆華、張勤、楊振中、史天衛(wèi)、段嘉樹(shù)、謝明權(quán)等獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)家先后組織與帶領(lǐng)研究生和研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)行了雞球蟲(chóng)病的流行病學(xué)、藥物防治和藥物研制、抗藥性評(píng)價(jià)、免疫預(yù)防、雞胚和細(xì)胞培養(yǎng)、早熟選育等系列研究，取得了一系列進(jìn)展。我國(guó)學(xué)者仿制合成了氯苯胍、氯羥吡啶、二硝托胺、尼卡巴嗪、地克珠利、馬杜霉素等抗球蟲(chóng)藥物，研制生產(chǎn)了海南霉素和雞球蟲(chóng)病早熟致弱活卵囊疫苗，成功主辦第二屆亞洲球蟲(chóng)病國(guó)際大會(huì)和第十屆世界球蟲(chóng)病大會(huì)。至今，我國(guó)學(xué)者在國(guó)際學(xué)術(shù)期刊年發(fā)表球蟲(chóng)病研究論文已近PubMed收錄該領(lǐng)域年發(fā)表論文數(shù)的40%，成為國(guó)際球蟲(chóng)病研究的主力軍。

目前，美國(guó)農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究中心動(dòng)物寄生蟲(chóng)病研究所寄生蟲(chóng)學(xué)家、美國(guó)科學(xué)院院士Jitender P. Dubey博士正著手組織編寫(xiě)《家畜、寵物和人的球蟲(chóng)病》專(zhuān)著，旨在分析過(guò)去28年間即1990年至今的球蟲(chóng)病的研究概況，本文作者索勛受邀參與編寫(xiě)中國(guó)雞球蟲(chóng)病研究一章。而到2018年為止，國(guó)內(nèi)中文期刊已發(fā)表的雞球蟲(chóng)研究、診療或報(bào)道相關(guān)文獻(xiàn)高達(dá)3 600余篇(數(shù)據(jù)來(lái)自中國(guó)知網(wǎng))，數(shù)目龐大、內(nèi)容繁多，發(fā)表時(shí)間的年限跨度長(zhǎng)。所以，不僅是1990年以后的研究對(duì)分析本領(lǐng)域的研究發(fā)展具有參考價(jià)值，1990年以前的早期研究同樣是我國(guó)雞球蟲(chóng)研究發(fā)展進(jìn)程中不可忽視的重要一筆。因此，本文選取1990年作為時(shí)間截點(diǎn)，對(duì)以“雞球蟲(chóng)”為主題在“中國(guó)知網(wǎng)”和“萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)”中進(jìn)行檢索并對(duì)查找的文獻(xiàn)逐一遴選研究性文章，歸納我國(guó)雞球蟲(chóng)研究的早期發(fā)展概況。從發(fā)表文獻(xiàn)的時(shí)間來(lái)看(圖1)，盡管我國(guó)對(duì)雞球蟲(chóng)及雞球蟲(chóng)病的研究到目前為止有近70年的歷史，但可以說(shuō)，我國(guó)雞球蟲(chóng)病研究真正起步始于1980年代，查明病原、明確流行特點(diǎn)、仿制藥物合成工藝、藥效評(píng)價(jià)等是當(dāng)時(shí)主要的研究?jī)?nèi)容。

圖1 1951—1990年國(guó)內(nèi)主要期刊歷年發(fā)表雞球蟲(chóng)病研究文章數(shù)量Fig.1 The number of articles about coccidiosis research published in major domestic journals from 1951 to 1990

1 研究技術(shù)

在早期雞球蟲(chóng)研究中，觀察描述是基本方法，尤其是在蟲(chóng)種分布的調(diào)查方面，通過(guò)對(duì)雞球蟲(chóng)卵囊、裂殖體等不同發(fā)育階段蟲(chóng)體的形態(tài)特征(王善志, 1980)與寄生部位的描述(林昆華等, 1981；張寶祥等, 1986)等鑒定蟲(chóng)種及流行情況，無(wú)疑這些結(jié)果的準(zhǔn)確性存在較大誤差。伴隨著許多技術(shù)與學(xué)科的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)寄生蟲(chóng)學(xué)在60年代以后逐步興起(索勛等，2003)，在描述寄生蟲(chóng)學(xué)的基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)技術(shù)成為研究雞球蟲(chóng)形態(tài)、發(fā)育及致病性等方面的重要手段。

研究雞球蟲(chóng)最基本的一點(diǎn)就是要明確蟲(chóng)種，種等分類(lèi)學(xué)的問(wèn)題搞不清，治療等相關(guān)研究就無(wú)法開(kāi)展。而在自然狀態(tài)下，雞球蟲(chóng)病往往是混合感染，通過(guò)單卵囊分離感染(林維慶等，1980；陳建斌等，1988)獲得純種為種的鑒定提供了一個(gè)有效的方法。此外，還引進(jìn)和建立起一系列球蟲(chóng)學(xué)研究的基本技術(shù)，比如：改良韋氏法純化卵囊以減少雜質(zhì)，提高收獲量(朱冠等, 1987)，用更簡(jiǎn)便、成本更低的方法收取大量純凈的裂殖子(Xieetal., 1990)，尋求適宜濃度的胰酶和雞膽汁實(shí)現(xiàn)子孢子的體外脫囊(趙開(kāi)元，1985)。隨著生物技術(shù)的崛起，特別是在19世紀(jì)70年代以后，獸醫(yī)寄生蟲(chóng)的研究有了新面貌(李祥瑞等，1992)。其他技術(shù)逐漸滲透，如利用切片技術(shù)觀察球蟲(chóng)的內(nèi)生性發(fā)育(張振嵐等, 1990)，利用電鏡技術(shù)觀察卵囊的脫囊過(guò)程(朱冠等, 1990)以及人們逐漸認(rèn)識(shí)到細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在原蟲(chóng)研究中的重要性(李觀娣，1984)。

2 流行病學(xué)

80年代，養(yǎng)雞業(yè)的集約化程度越來(lái)越高，規(guī)模不斷擴(kuò)大(趙義斌，1991)，雞球蟲(chóng)病也在養(yǎng)雞業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展中更加受到養(yǎng)殖戶(hù)及科研工作者的重視。認(rèn)識(shí)雞球蟲(chóng)病的流行病學(xué)特點(diǎn)對(duì)雞球蟲(chóng)病防治至關(guān)重要。早在1959年，在對(duì)雞內(nèi)寄生蟲(chóng)調(diào)查時(shí)就涉及到雞球蟲(chóng)的形態(tài)描述(何承德，1959)，到1990年，可查到的發(fā)表于國(guó)內(nèi)主要期刊的相關(guān)報(bào)道共有17篇,多是對(duì)某一地區(qū)雞球蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行初步調(diào)查。

當(dāng)時(shí)，在世界范圍內(nèi)，對(duì)雞球蟲(chóng)蟲(chóng)種數(shù)目的認(rèn)定并不統(tǒng)一，根據(jù)Becker(1959)的論述，有8種雞球蟲(chóng)，加上Edgar等(1964)發(fā)現(xiàn)的新種，可達(dá)13種之多。當(dāng)時(shí)大部分學(xué)者公認(rèn)有以下9種：柔嫩艾美耳球蟲(chóng)Eimeriatenella、堆型艾美耳球蟲(chóng)E.acervulina、早熟艾美耳球蟲(chóng)E.praecox、毒害艾美耳球蟲(chóng)E.necatrix、巨型艾美耳球蟲(chóng)E.maxima、布氏艾美耳球蟲(chóng)E.bruntti、和緩艾美耳球蟲(chóng)E.mitis、哈氏艾美耳球蟲(chóng)E.hagani、變位艾美耳球蟲(chóng)E.mivati(林昆華等，1981)(哈氏艾美耳球蟲(chóng)和變位艾美耳球蟲(chóng)現(xiàn)已認(rèn)為是無(wú)效種)。明確蟲(chóng)種是重點(diǎn)，并且這在任何時(shí)候的流行病學(xué)調(diào)查中都是首要且基本的任務(wù)。80年代以前，我國(guó)并沒(méi)有整理出流行于我國(guó)的雞球蟲(chóng)病系統(tǒng)資料，所以80年代及以后所進(jìn)行的雞球蟲(chóng)流行病學(xué)在當(dāng)時(shí)對(duì)研究區(qū)系分布具有不可替代的重要參考價(jià)值。

2.1 蟲(chóng)種鑒定

蟲(chóng)種鑒定的依據(jù)主要包括4個(gè)方面：卵囊形態(tài)特征(表1)、最短潛在期、最短孢子化時(shí)間以及蟲(chóng)體寄生部位。卵囊的形態(tài)學(xué)觀察主要包括卵囊的顏色、大小、形狀，有無(wú)卵膜孔和殘?bào)w，以及極體的形狀、數(shù)目及位置(林昆華等, 1981；白啟, 1981；廖麗芳等, 1984；朱冠等, 1986)。由于當(dāng)時(shí)計(jì)算機(jī)等電子設(shè)備的使用并未在我國(guó)普及，科研工作者均是通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察后手繪作圖。潛在期與最短孢子化時(shí)間的測(cè)定可能由于地方株不同、培養(yǎng)的溫度等環(huán)境因素不同以及感染宿主的個(gè)體差異等原因，不同文獻(xiàn)中所報(bào)道的均有不同。對(duì)于寄生部位的觀察則是將感染球蟲(chóng)后一定時(shí)間的雞剖殺，取腸道，觀察腸道病變，刮取腸黏膜，抹片鏡檢，確定蟲(chóng)體的寄生部位以及腸道病變部位與特征。

表1 卵囊形態(tài)特征Tab.1 Morphological characteristics of oocysts of chicken coccidia

圖2 雞球蟲(chóng)卵囊形態(tài)Fig.2 The shape of chicken coccidian oocysts參考文獻(xiàn)(林昆華等，1981；郭媛華，1983；黃德生，1986)繪制。a.巨型艾美耳球蟲(chóng); b.布氏艾美耳球蟲(chóng); c.柔嫩艾美爾球蟲(chóng); d.毒害艾美耳球蟲(chóng); e.早熟艾美耳球蟲(chóng); f.堆型艾美耳球蟲(chóng); g.和緩艾美耳球蟲(chóng)。Reference: Lin et al.,1981；Guo,1983；Huang,1986. a. E. maxima; b. E. brunette; c. E. tenella; d. E. necatrix; e. E. praecox; f. E. acervulina; g. E. mitis.

2.2 流行特點(diǎn)

只有當(dāng)外界環(huán)境中的球蟲(chóng)卵囊完成孢子化后才具備感染能力，而溫度與濕度影響著卵囊的孢子化速度與壽命，最適孢子化的環(huán)境溫度是20～32 ℃，濕度為40%～90%(趙公舜，1988)。影響雞球蟲(chóng)病流行情況的因素有很多，季節(jié)和地區(qū)的氣候條件、地理差異、雞的品種與日齡等都與之密切相關(guān)(李超等，2018)。

3 病例診斷

早期雞球蟲(chóng)病診斷主要是通過(guò)對(duì)患雞的臨床癥狀觀察、病理剖檢以及結(jié)合鏡檢觀察球蟲(chóng)卵囊的形態(tài)特征來(lái)實(shí)現(xiàn)的(表2)。在當(dāng)時(shí)，解決實(shí)際生產(chǎn)問(wèn)題是根本目的——通過(guò)對(duì)養(yǎng)雞場(chǎng)的自然病例進(jìn)行分析來(lái)尋找病因及診療對(duì)策。臨床上，往往還需要研究人員對(duì)可能出現(xiàn)混淆的相似病癥，比如雛雞壞死性腸炎，做出鑒別診斷(何維明等, 1981)。

4 藥物研制與藥效評(píng)價(jià)

雞球蟲(chóng)病每年給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,所以對(duì)于雞球蟲(chóng)病的防治問(wèn)題一直以來(lái)都是相關(guān)研究者關(guān)注的重點(diǎn)。自1939年Levine首先發(fā)現(xiàn)磺胺類(lèi)藥物的抗球蟲(chóng)作用后(Levine，1939)，世界各大主要制藥集團(tuán)(公司)也先后投入大量人力和財(cái)力進(jìn)行抗球蟲(chóng)藥開(kāi)發(fā)，至1988年發(fā)現(xiàn)森杜拉霉素(Seduramycin)并推向市場(chǎng)的50年間，先后研制開(kāi)發(fā)了40多種抗球蟲(chóng)藥物(鄒瑩，1988)，其中30多種藥物廣泛商業(yè)化應(yīng)用，藥物預(yù)防成為防治雞球蟲(chóng)病的主要手段。自50年代末，雞球蟲(chóng)抗藥性被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，科研工作者更加致力于新藥的開(kāi)發(fā)，但是耐藥性發(fā)展迅速，新型抗球蟲(chóng)藥物使用3～4年或更短時(shí)間就會(huì)產(chǎn)生耐藥蟲(chóng)株(趙開(kāi)元等, 1985)，所以研制新藥是確保有效防治雞球蟲(chóng)病效力的重要工作。不同藥物在國(guó)際與國(guó)內(nèi)開(kāi)始使用的時(shí)間以及耐藥性出現(xiàn)的時(shí)間均有不同，在宿主體內(nèi)發(fā)揮作用的高峰期也有差異(表3)。

表2 雞球蟲(chóng)病診斷Tab.2 Diagnosis of chicken coccidiosis

主要參考文獻(xiàn)(趙永福等，1987；索勛，1998；梁長(zhǎng)鈞，1990)整理。

Reference:Zhaoetal.，1987；Suo，1998；Liang，1990.

4.1 化學(xué)合成類(lèi)藥物

磺胺類(lèi)與硝基呋喃類(lèi)藥物是我國(guó)早期一直使用的雞球蟲(chóng)病防治藥物，而非專(zhuān)門(mén)的抗球蟲(chóng)制劑，70年代時(shí)有報(bào)道稱(chēng)在北京地區(qū)雞球蟲(chóng)對(duì)呋喃西林已經(jīng)出現(xiàn)了較強(qiáng)的耐藥性。我國(guó)抗球蟲(chóng)藥物的研制始于1977年，華北農(nóng)業(yè)大學(xué)(今中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué))研制出了第一個(gè)國(guó)產(chǎn)抗球蟲(chóng)病的新藥——球痢靈，同年，氯苯胍也在我國(guó)首次合成，上海農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所對(duì)其研究發(fā)現(xiàn)，30 ppm對(duì)防治雞球蟲(chóng)病即有顯著療效，但是80年代初，某些地區(qū)就已經(jīng)顯示出它的抗藥性。改革開(kāi)放后，隨著我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的快速發(fā)展，大量跨國(guó)制藥集團(tuán)(公司)的專(zhuān)用抗球蟲(chóng)藥物逐步進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，我國(guó)獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)工作者在承擔(dān)這些藥物的抗球蟲(chóng)效果評(píng)價(jià)之同時(shí)，與藥物化學(xué)、有機(jī)合成等學(xué)科專(zhuān)業(yè)人員合作，開(kāi)始進(jìn)行非專(zhuān)利藥物的仿制合成工藝研究，先后研制開(kāi)發(fā)出氯苯胍、氨丙啉等的合成工藝(上海農(nóng)科學(xué)院畜牧所雞球蟲(chóng)病防治研究組，1979；楊振中等, 1983；沈瑞洲等, 1984)。但同樣，在開(kāi)始使用該藥物時(shí)防治雞球蟲(chóng)病效果優(yōu)良，反復(fù)使用后，1987年在廣東就已發(fā)現(xiàn)抗藥蟲(chóng)株(陳漢忠，1990)。相對(duì)于其他一些抗球蟲(chóng)藥，尼卡巴嗪抗藥性產(chǎn)生緩慢，它是國(guó)際上最早研制成功的抗球蟲(chóng)藥，從1955年問(wèn)世，一直到80年代在國(guó)內(nèi)外都可以稱(chēng)得上是比較理想的抗球蟲(chóng)藥(史天衛(wèi)等, 1985)。自使用抗球蟲(chóng)藥物進(jìn)行雞球蟲(chóng)病防治以來(lái)，抗藥性一直都是不容忽視的問(wèn)題，球蟲(chóng)對(duì)某種藥物的抗藥性一旦產(chǎn)生，其防治效果就會(huì)下降甚至失去存在的價(jià)值。

4.2 聚醚類(lèi)抗生素

抗生素是微生物的次級(jí)代謝產(chǎn)物，曾名為“抗菌素”。1974年，Westley首次將分子中含有多個(gè)環(huán)狀醚鍵的抗生素命名為聚醚類(lèi)抗生素(閻曉菊等, 1987)。它具有離子載體的性質(zhì)，將陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)透過(guò)細(xì)胞膜，破壞球蟲(chóng)細(xì)胞膜內(nèi)外滲透壓，使得蟲(chóng)體腫脹死亡從而起到抗球蟲(chóng)作用(于詠蘭等, 2000)。早期作為抗球蟲(chóng)藥物的聚醚類(lèi)抗生素有莫能菌素、鹽霉素、拉沙里菌素等。

4.3 中草藥

中草藥在我國(guó)已有數(shù)千年的歷史，使用中草藥或中草藥提取物來(lái)防治雞球蟲(chóng)病是我國(guó)特有的防治方法。其成本低廉、藥源豐富，可就地取材，更重要的是，它們毒副作用小、不易產(chǎn)生抗藥性，更加安全可靠。早在1978年，就有人嘗試用蟾酥、雷公藤、辣蓼、穿心蓮來(lái)防治包括雞球蟲(chóng)病在內(nèi)的雞病，將雷公藤、辣蓼、穿心蓮直接做草料喂雞、蟾酥煎煮做飲水，再結(jié)合傳統(tǒng)的針刺療法，發(fā)現(xiàn)在臨床上可取得很好的防治效果(諶澄光，1978)。此外，青蒿(朱印生，1981)、苦參、常山、仙鶴草、地榆等在臨床上也都已取得滿(mǎn)意的療效(董華富, 1984)。

其中，青蒿藥用在我國(guó)已有數(shù)千年的歷史，主治瘧疾(云南地區(qū)五二三協(xié)作組，1978)。早在一千多年前東晉葛洪所著《肘后備急方》中，就有青蒿抗瘧的記載(王滿(mǎn)元，2012)；屠呦呦等科研工作者在傳統(tǒng)中藥—“草根樹(shù)皮一鍋湯”的基礎(chǔ)上對(duì)青蒿經(jīng)過(guò)精制、提取等一系列操作得到其有效成分—青蒿素，這是將傳統(tǒng)中藥與現(xiàn)代科學(xué)理論和方法相結(jié)合的產(chǎn)物(Tu, 2011; 李連達(dá)等，2015)，對(duì)治療瘧疾有杰出貢獻(xiàn)。而在非瘧疾病中，它同樣發(fā)揮著重要作用，有實(shí)驗(yàn)表明青蒿素及其合劑(北京市門(mén)頭溝區(qū)獸醫(yī)站，1983)、衍生物(丁璟昌，1984)對(duì)防治雞球蟲(chóng)病有顯著療效。青蒿素僅從青蒿中提取或合成得到(韓福杰，1989)，中國(guó)擁有世界上超過(guò)80%的青蒿素資源(王滿(mǎn)元，2012)，它的出現(xiàn)展現(xiàn)了中國(guó)“古為今用”的科學(xué)力量。

表3 早期使用的幾種抗球蟲(chóng)藥物Tab.3 Use of several anticoccidial drugs in early time

b.主要參考文獻(xiàn)(朱模忠, 1984；樊生超，1990；常曉輝等，2011)。

Mainly refer to(Zhu, 1984；Fan，1990；Changetal.，2011).

5 免疫預(yù)防

自專(zhuān)用抗球蟲(chóng)藥物出現(xiàn)以來(lái)，到19世紀(jì)80年代，世界范圍內(nèi)出現(xiàn)的抗球蟲(chóng)藥物種類(lèi)已達(dá)40～50種之多。藥物防治在養(yǎng)雞業(yè)中一直是控制雞球蟲(chóng)病的主要手段，但是由于藥物費(fèi)用昂貴，以及反復(fù)使用同種藥物易產(chǎn)生耐藥性蟲(chóng)株等問(wèn)題，免疫預(yù)防逐漸受到科研工作者的關(guān)注。過(guò)去人們就發(fā)現(xiàn)，在防治過(guò)程中，相對(duì)于完全抑制卵囊產(chǎn)生的抗球蟲(chóng)藥物，允許產(chǎn)生少量卵囊的抗球蟲(chóng)藥物更可取，因?yàn)樯倭柯涯掖碳に拗鳟a(chǎn)生免疫保護(hù)在實(shí)際生產(chǎn)中具有重要意義(柯新明等，1990)。

5.1 免疫機(jī)制

我國(guó)對(duì)雞球蟲(chóng)免疫的研究起步較晚，早期對(duì)于雞球蟲(chóng)病免疫應(yīng)答機(jī)制的認(rèn)識(shí)多是參考國(guó)外文獻(xiàn)，并對(duì)其進(jìn)行整理、發(fā)表綜述。雞球蟲(chóng)要完成復(fù)雜的生活史需要經(jīng)歷多種發(fā)育階段，所以，宿主在病原刺激下所激發(fā)的免疫應(yīng)答具有多樣性(王宗儀，1985)。體液免疫、細(xì)胞免疫、局部免疫是雞球蟲(chóng)免疫的3種重要方式。體液免疫主要通過(guò)刺激腔上囊B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IgG、IgM、IgA等抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)，細(xì)胞免疫主要通過(guò)刺激胸腺的T淋巴細(xì)胞分化、增殖識(shí)別抗原來(lái)實(shí)現(xiàn)。其中，細(xì)胞免疫居主導(dǎo)地位，體液免疫居次要地位(晉希民, 1981)。1977年，Davis發(fā)現(xiàn)腸道內(nèi)含有不同于血清中的IgA在子孢子入侵時(shí)發(fā)揮抵抗作用，這種IgA是黏膜免疫產(chǎn)生的分泌型IgA(SIgA)，是參與局部免疫反應(yīng)的主要物質(zhì)(樊生超, 1990)。

5.2 球蟲(chóng)病疫苗的研制

早在30年代人們就發(fā)現(xiàn)，成功抵抗雞球蟲(chóng)感染后的雞可以獲得堅(jiān)強(qiáng)的免疫力(王省良，1990)，所以運(yùn)用有活力的正常毒力株球蟲(chóng)卵囊可以使雞產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)。王宗儀(1988)用柔嫩艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊以不同計(jì)量一次和多次感染雛雞進(jìn)行免疫實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)逐漸增大劑量反復(fù)感染雛雞可以使其獲得更牢固的免疫力，但是大劑量的活毒卵囊對(duì)宿主會(huì)造成一定損傷。所以，雖然毒力株可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)，但是存在極大的安全隱患。

Long(1965)首次報(bào)道通過(guò)雞胚接種獲得柔嫩艾美耳球蟲(chóng)，并于1974年發(fā)現(xiàn)通過(guò)在雞胚上傳代可以獲得致病力減弱、繁殖力下降而免疫原性良好的蟲(chóng)株(Long,1974)。1978年，上海農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所楊振中等運(yùn)用同樣的方法選擇柔嫩艾美耳球蟲(chóng)蟲(chóng)株，通過(guò)10年的研究，研制出了柔嫩艾美耳球蟲(chóng)弱毒蟲(chóng)苗，并對(duì)其安全性、保存期和免疫期以及田間免疫觀察進(jìn)行了報(bào)道(楊振中等, 1985； 1986；陳金偉等, 1988)，發(fā)現(xiàn)其免疫保護(hù)效果良好。但是弱毒疫苗仍是活疫苗，在相關(guān)免疫試驗(yàn)中仍存在對(duì)宿主致死的現(xiàn)象(樊其林等, 1986；賴(lài)大煦等, 1988)。此外，是否會(huì)出現(xiàn)毒力返強(qiáng)也是科學(xué)家們所擔(dān)心的另一個(gè)問(wèn)題，因此，滅活疫苗及亞單位疫苗的研制成為科學(xué)家研究的新方向。但是受到分子生物學(xué)技術(shù)等方面的限制，這些工作在早期雞球蟲(chóng)研究中還處于空白(王省良，1990)。

6 營(yíng)養(yǎng)性飼料添加劑

早期關(guān)于雞球蟲(chóng)研究的文獻(xiàn)中關(guān)于飼料添加劑的報(bào)道為數(shù)不多，主要是綜述類(lèi)文章。有些學(xué)者將氨基酸、礦物質(zhì)、維生素這些飼料中本身就存在的物質(zhì)稱(chēng)為補(bǔ)充物，只有像抗生素這種飼料中原先沒(méi)有的成分才稱(chēng)為添加劑(徐維墉，1986)。但有些學(xué)者則把這兩者歸為營(yíng)養(yǎng)性與非營(yíng)養(yǎng)性添加劑(周毓平，1988)。抗生素和化學(xué)合成藥物等作為飼料添加劑時(shí)同樣是為了防治雞球蟲(chóng)病，但是由于藥殘和耐藥性的問(wèn)題，一些藥物如今已被禁止再做添加劑使用。一些研究者試圖尋找其他飼料添加劑來(lái)代替抗球蟲(chóng)藥物的使用。所以，我們這里想要著重闡述的是營(yíng)養(yǎng)性添加劑的使用。

氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位，飼料中適當(dāng)?shù)奶砑拥鞍彼?、?lài)氨酸、色氨酸以補(bǔ)充雞體自身合成的不足，可促進(jìn)其生長(zhǎng)與抗病能力；維生素調(diào)節(jié)著機(jī)體的新陳代謝，維生素A、C、D、E、K、H等均是飼料中常用的添加成分。有實(shí)驗(yàn)表明，在飼料中添加維生素和微量元素會(huì)對(duì)雞的增重起促進(jìn)作用，增強(qiáng)雞的抗病能力(陳宙，1984)。此外，還有將植物或其加工品作為補(bǔ)充添加劑，其實(shí)就是將中藥作為飼料添加劑，這在我國(guó)古代就有記載(張克家，1986)。它們?cè)谏a(chǎn)與防治上都能起到一定作用，更重要的是，植物作為一種天然成分，給動(dòng)物本身帶來(lái)的傷害小而可控。飼料添加劑種類(lèi)多樣，合理規(guī)范的使用飼料添加劑在任何時(shí)候都是保證養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的要素之一。

7 結(jié)語(yǔ)

從早期發(fā)表文章的數(shù)量與研究?jī)?nèi)容來(lái)看，我國(guó)對(duì)雞球蟲(chóng)的研究起步晚于西方國(guó)家，并且由于資金不足、設(shè)備落后、人才短缺等原因以及一些社會(huì)因素，難以達(dá)到國(guó)際水平。從研究?jī)?nèi)容來(lái)看，雞球蟲(chóng)種類(lèi)的調(diào)查等病原學(xué)研究取得了一定的進(jìn)展，利用觀察描述的方法研究雞球蟲(chóng)的區(qū)系分布為球蟲(chóng)病防治等研究工作的開(kāi)展奠定了一定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)技術(shù)的掌握與藥物研制的水平雖然不及西方，但一直在緊跟前沿，奮力追趕；生物技術(shù)的滲入豐富了實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段，化學(xué)藥物的更新保證了藥物防治效力；單卵囊分離、卵囊純化等基本球蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)操作不斷優(yōu)化；仿制合成的一系列國(guó)產(chǎn)抗球蟲(chóng)藥物及球蟲(chóng)早熟活疫苗的成功研制為球蟲(chóng)病的防治帶來(lái)了福音。但是，當(dāng)時(shí)分子與免疫層面的寄生蟲(chóng)學(xué)研究還未深入開(kāi)展，PCR、基因工程等分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用還處于空白。90年代以后，免疫診斷等新的診斷技術(shù)出現(xiàn)，雞球蟲(chóng)免疫保護(hù)機(jī)理及入侵的分子機(jī)制等分子水平方面的研究進(jìn)一步發(fā)展，核酸疫苗、活載體疫苗等多種新型雞球蟲(chóng)疫苗也取得了一定的成就；我國(guó)對(duì)雞球蟲(chóng)的研究在不斷向前推進(jìn)。

致歉在中文數(shù)據(jù)庫(kù)中查找1990年以前所發(fā)表的雞球蟲(chóng)病相關(guān)文章，由于檢索主題詞的差異，在不同數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取的文章數(shù)目有所不同，整理后大致有250余篇，有些年代久遠(yuǎn)的文章難以獲取。由于文章數(shù)目多，以及有些研究工作可能開(kāi)展于1990年以前，但文章卻發(fā)表于1990年之后等原因造成查找缺漏、對(duì)文獻(xiàn)整理不到位，致使并不能將所有研究及作者一一提及，在此深表歉意。但不可否認(rèn)，他們?yōu)殡u球蟲(chóng)病研究做出了杰出貢獻(xiàn)、為推動(dòng)雞球蟲(chóng)研究工作起到了不可忽視的重要作用。