測(cè)定大米中敵敵畏殘留量的處理方法比較

◎ 陳瑞霞，梁曉涵，周考根

（1.海南省食品藥品檢驗(yàn)所瓊海分所，海南 瓊海 571433；2.海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，海南 ?？?570314）

敵敵畏是一種有毒的有機(jī)磷農(nóng)藥，對(duì)害蟲有胃毒、觸殺和熏蒸作用[1]，價(jià)格低廉，故廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物生產(chǎn)中。由于敵敵畏揮發(fā)性強(qiáng)，熏蒸作用突出，一些不法生產(chǎn)大米的糧油企業(yè)利用這一特性，在糧倉(cāng)噴灑劇毒農(nóng)藥敵敵畏，達(dá)到防蟲殺蟲的目的。這樣的行為給大米質(zhì)量帶來安全隱患，對(duì)大米中敵敵畏的殘留檢測(cè)不容忽視。為了找到更多、更簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法，本文對(duì)國(guó)標(biāo)GB/T 5009.20-2003改進(jìn)法[2-3]及QuEchERS[4-5]兩種不同方法進(jìn)行比較研究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

儀器：氣相色譜儀，島津GC 2010 PLUS，配FPD檢測(cè)器；電子天平，F(xiàn)A2104；旋渦振蕩器，德國(guó) Heidolph；離心機(jī)SIGMA 3-30KS；均質(zhì)機(jī)，德國(guó)IKA公司，T25 digital TURRAX；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，BUCHI Rotavapor R-3；超純水機(jī)，ULTRAPURE WATER 優(yōu)普純水機(jī)；氮吹儀，HN200 多功能氮吹儀，海能儀器。

試劑：標(biāo)準(zhǔn)品為丙酮中敵敵畏，1.2 mL，1 000 μg/mL，編號(hào)GBW（E）082244，購(gòu)自北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；乙腈為色譜純；丙酮為色譜純；氯化鈉，分析純；水，超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密取1.0 mL敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)液于10 mL的容量瓶中，用丙酮稀釋并定容至刻度，混勻，即得100 μg/mL敵敵畏貯備液，并儲(chǔ)存于4 ℃冰箱中。

標(biāo)準(zhǔn)使用液：精密吸取100 μg/mL敵敵畏儲(chǔ)備液0.1 mL置于10 mL的容量瓶中，得到1 μg/mL敵敵畏使用液。

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用陰性大米樣品提取作為溶劑，得濃度分別為0.008、0.01、0.02、0.05、0.08、0.10、0.15、0.2 μg/mL的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3 樣品前處理

1.3.1 國(guó)標(biāo)GB/T 5009.20-2003改進(jìn)法

稱取10 g已磨碎的大米樣品于250 mL燒杯中，加入15 mL純水浸泡30 min后，加入40 mL乙腈，勻漿2 min，混勻，在100 mL具塞量筒中加入10 g氯化鈉，將勻漿后樣品過濾入此量筒中，劇烈振搖2 min，靜置30 min，取20 mL上清液于100 mL圓底燒瓶中，38 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，用丙酮將圓底燒瓶?jī)?nèi)樣液定容至5 mL，搖勻，過0.22 μm濾膜，上機(jī)檢測(cè)。

1.3.2 QuEChERS法

稱取10 g已磨碎的大米樣品于50 mL離心管中，加入15 mL純水浸泡30 min，再加入10 mL乙腈，振搖3 min，超聲30 min，加入4 g無水硫酸鎂和1 g氯化鈉，渦旋2 min，8 000 r/min離心5 min。

取5 mL上清液于加入150 mg PSA吸附劑及150 mg C18和900 mg無水硫酸鎂的15 mL離心管中，渦旋2 min，取2 mL上清液于10 mL玻璃離心管中，40 ℃水浴氮?dú)獯抵两?，然后? mL丙酮定容，過0.22 μm濾膜，待測(cè)。

1.4 色譜條件

DB-17色譜柱（30.0 m×0.32 mm×0.25 μm）；不分流方式自動(dòng)進(jìn)樣1.0 μL，進(jìn)樣口溫度220 ℃；FPD檢測(cè)器溫度250 ℃；載氣為氮?dú)猓兌?9.999%，流速4.55 mL/min；氫氣，62.5 mL/min；空氣，90 mL/min；柱箱升溫程序，初始100 ℃，以10 ℃/min升溫至150 ℃，再以6 ℃/min升溫至250 ℃保持2 min。本實(shí)驗(yàn)中，敵敵畏出峰時(shí)間4.033 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 兩種前處理方法比較

針對(duì)國(guó)標(biāo)GB/T 5009.20-2003中的提取溶劑選取，用乙腈代替丙酮及二氯甲烷。大米中含有大量的淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)。丙酮及二氯甲烷會(huì)提取大米中更多的脂肪類雜質(zhì)，乙腈對(duì)非極性成分如色素、脂肪等提取能力相對(duì)少，且旋蒸時(shí)乙腈能與水分形成共沸將水分蒸發(fā)，提取效率相對(duì)高[2]。

QuEChERS的前處理與國(guó)標(biāo)GB/T 5009.20-2003改進(jìn)法相比，多了凈化過程，通過添加PSA吸附劑及C18除去大米基質(zhì)中的脂肪類等非極性物質(zhì)，加無水硫酸鎂進(jìn)一步除水，且不需要旋蒸。

比較國(guó)標(biāo)GB/T 5009.20-2003改進(jìn)法與QuEChERS法的色譜圖，如圖1、2所示，從色譜圖可看出，QuEChERS法基線相對(duì)平緩，雜峰相對(duì)少，凈化效果好些。

圖1 國(guó)標(biāo)GB/T 5009.20-2003改進(jìn)法色譜圖

圖2 QuEChERS法色譜圖

2.2 樣品的加水量對(duì)殘留提取的影響

大米為干制樣品，為了讓提取液與樣品更好地接觸，提取前需加水讓其充分浸潤(rùn)。通過加不同水量（與樣品量的比例）0.0%、20%、40.0%、60%、80%、100%，發(fā)現(xiàn)加水量對(duì)提取回收率沒多大影響，但加水量為樣品量的60%～80%時(shí)，效果較佳。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)研究

基質(zhì)效應(yīng)在農(nóng)藥殘留分析中不可避免[6-7]，為了減少基質(zhì)效應(yīng)的干擾，本實(shí)驗(yàn)用基質(zhì)匹配標(biāo)樣進(jìn)行校準(zhǔn)。通過做溶劑標(biāo)曲與基質(zhì)標(biāo)曲的比較，直接提取法用基質(zhì)匹配標(biāo)曲效果更佳，采用QuEChERS前處理方法，基質(zhì)效果相對(duì)較小，也可直接用標(biāo)樣配制工作曲線。

2.4 線性范圍，相關(guān)系數(shù)及檢出限

分別按照國(guó)標(biāo)GB/T 5009.20-2003改進(jìn)法（方法一）及QuEchERS（方法二）得到陰性大米樣品基質(zhì)液，用基質(zhì)液配制工作曲線，濃度范圍在0.008～0.2 μg/mL時(shí)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果與敵敵畏濃度都呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)都大于0.999。分別以最低限加標(biāo)樣品的基線信噪值，按照信噪比S/N=3計(jì)算得敵敵畏的檢出限（LOD），見表1。

表1 兩種方法線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)表

2.5 回收率與精密度

按照方法一及方法二對(duì)陰性樣大米進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，分別以0.01、0.05、0.1 mg/kg為加標(biāo)水平，每個(gè)濃度做6個(gè)平行樣，計(jì)算回收率及相對(duì)偏差（RSD），結(jié)果見表2。

表2 不同添加水平的回收率和RSD表

2.6 實(shí)際大米檢測(cè)

采用方法一與方法二對(duì)購(gòu)自市場(chǎng)上的大米進(jìn)行敵敵畏檢測(cè)，每個(gè)樣平行測(cè)試3次，結(jié)果均未檢出敵敵畏。

3 結(jié)論

通過對(duì)兩種前處理方法的比較，發(fā)現(xiàn)兩種方法沒有明顯的差異，根據(jù)GB2763-2016食品中農(nóng)藥最大殘留量，兩個(gè)方法前處理重現(xiàn)性、檢出限、回收率都滿足對(duì)批量大米殘留中的敵敵畏的檢測(cè)要求，可應(yīng)用實(shí)際批量樣品檢測(cè)。

[1]詹重清.GPC-GC-MS 法測(cè)定大豆中的敵敵畏[J].廣州化工，2014（12）：129-130.

[2]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.GB/T 5009.20-2003食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測(cè)定[S].北京：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[3]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.NY/T 761.1-2008 蔬菜和水果中有機(jī)磷類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法[S].北京：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[4]陳 溪，董振霖，孫玉玉，等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)大米中20種農(nóng)藥殘留[J].分許測(cè)試學(xué)報(bào)，2016，35（4）：394-399.

[5]熊小青，葉 琴.QuEChERS 法測(cè)定大米中有機(jī)磷類多農(nóng)殘[J].食品研究與開發(fā)，2010（12）：345-352.

[6]黃寶勇，歐陽(yáng)喜輝，潘燦平.色譜法測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留時(shí)的基質(zhì)效應(yīng)[J].農(nóng)殘學(xué)學(xué)報(bào)，2005，7（4）：299-305.

[7]趙海峰，王建華，邴 欣，等.菜農(nóng)藥殘留GC-MS分析方法改進(jìn)與基質(zhì)效應(yīng)探討[J].中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，36（1）：76-80.