燈盞花乙素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血管舒縮反應(yīng)的影響

陳晨+李清清+張秀娟+杜曉華+代澤蘭+饒嬙+杜庭彥+楊為民

[摘要]目的 利用自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）研究燈盞花乙素（SCU）對(duì)高血壓影響大鼠血管舒縮反應(yīng)的作用。方法 本研究采用分離14、40周的SHR及其對(duì)照品系Wistar-Kyoto大鼠（WKY）的腦基底動(dòng)脈（BA）和冠狀動(dòng)脈（CA）血管環(huán)，應(yīng)用Wire Myograph血管張力分析系統(tǒng)，測(cè)定BA與CA血管環(huán)的張力變化，觀察SCU對(duì)高血壓誘導(dǎo)大鼠心腦血管舒縮反應(yīng)的影響。結(jié)果 在舒張性反應(yīng)測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，SCU給藥孵育可使血管的舒張效應(yīng)均顯著增強(qiáng)（P<0.001），并且40周的血管舒張性強(qiáng)于14周。在收縮性反應(yīng)測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，血管的最大收縮率隨著SCU孵育濃度的加大依次降低，且SCU組的EC50值明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論 SCU對(duì)高血壓誘導(dǎo)大鼠血管的舒張性與收縮性反應(yīng)均有一定的影響。

[關(guān)鍵詞]燈盞花乙素；高血壓；舒縮反應(yīng)

[中圖分類號(hào)] R965.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）1（b）-0004-04

[Abstract]Objective To investigate the effect of Scutellarin （SCU） on angiokinesis responses in rats with spontaneous hypertension （SHR）.Methods In this study，basilar artery （BA） and coronary artery （CA） vascular rings which were isolated for 14 weeks and 40 weeks respectively from SHR and its control of Wistar-Kyoto rats （WKY） were applied.Wire Myograph vascular tension analysis system was applied，and tension changes of BA and CA vascular rings were measured.The effects of SCU on hypertension induced cardiovascular and cerebrovascular angiokinesis in rats were observed.Results In the vasodilator reaction assay，the angiokinesis effect of blood vessels was significantly enhanced by incubation with SCU （P<0.001），and 40 weeks vasodilation was stronger than that 14 weeks.In vasocontraction response assay，the maximum contraction rate of blood vessels was decreased with the increase of SCU incubation concentration，and the EC50 value in the SCU group was significantly higher than that in the control group （P<0.05）.Conclusion Scutellarin has certain influence on the vasodilatation and vasocontraction responses induced by hypertension in rats.

[Key words]Scutellarin；Hypertension；Angiokinesis

世界上有超過1/4的成年人患動(dòng)脈高血壓[1]。心臟和腦血管舒縮功能障礙是高血壓發(fā)生導(dǎo)致血壓增加的重要病理機(jī)制和抗高血壓治療的靶點(diǎn)[2-3]。有報(bào)道顯示，在高血壓患者中出現(xiàn)了血管舒張功能降低與收縮功能增加的現(xiàn)象[4-6]。燈盞花乙素（SCU）是云南特色藥用植物菊科植物短葶飛蓬[Erigeron breviscapus （Vant.） Hand. Mazz.]的干燥全草中提取的黃酮類有效成分[7]，具有抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、調(diào)整血栓素A/前列環(huán)素（TXA/PGI2）平衡等作用以及拮抗缺血再灌注損傷的作用[8-11]，然而，SCU對(duì)高血壓狀態(tài)下心、腦血管舒張與收縮作用的研究少見報(bào)道。本研究采用Myograph微小血管張力測(cè)定技術(shù)，觀測(cè)SCU對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）冠狀動(dòng)脈（CA）和腦基底動(dòng)脈（BA）血管的舒張與收縮功能的變化，旨在為高血壓患者血管性疾病的預(yù)防和治療方面提供基礎(chǔ)研究依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

SCU由昆明龍津藥業(yè)張人偉提供；乙酰膽堿（ACH，批號(hào)：BCBB7511）及生物緩沖劑（MOPS-PSS，批號(hào)：071M00361V）購(gòu)自Sigma公司；血栓素受體激動(dòng)劑U46619（Enzo，批號(hào)：10051602）；其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。選取SHR和Wistar-Kyoto大鼠（WKY）作為對(duì)照組，13～14周齡（13～14周）的體重為250～300 g，39～40周齡（39～40周）的體重為350～400 g，每組大鼠3只，均購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001。

1.2血管環(huán)制備與平衡

SHR和WKY大鼠采用烏拉坦麻醉，迅速取出心臟與大腦，置于4℃ MOPS-PSS液中。在體式解剖顯微鏡下分離CA與BA，剪成長(zhǎng)度約為1 mm的血管環(huán)，用2根60 μm的金屬絲穿掛，置于盛有MOPS-PSS工作液的Wire Myograph血管張力分析系統(tǒng)浴槽中，在恒溫37℃條件下持續(xù)通入O2。每隔20 min更換1次MOPS-PSS營(yíng)養(yǎng)液，平衡90 min。endprint

1.3 SCU對(duì)SHR大鼠血管舒張作用的影響

采用U46619（1 μM）預(yù)收縮血管，然后累積加入SCU（10、30、100、200、400、1000 μM），觀察SHR大鼠CA/BA累積濃度舒張曲線，計(jì)算半數(shù)有效濃度（EC50）與最大有效濃度（Emax）。

1.4 SCU預(yù)處理對(duì)SHR大鼠收縮作用的影響

采用SCU預(yù)先處理SHR大鼠心腦血管環(huán)15 min，對(duì)應(yīng)累積加入U(xiǎn)46619，觀察SCU對(duì)U46619收縮曲線的影響，對(duì)照組加相應(yīng)溶媒。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SigmaStat 10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用Sigma Plot作圖，并模擬計(jì)算出EC50與Emax，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，方差分析采用Two-way ANOVA，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 SCU對(duì)14周和40周 SHR大鼠離體血管的直接舒張作用

SCU對(duì)14、40周WKY、SHR的CA和BA均有一定舒張作用，14周的EC50值明顯高于40周，且40周WKY的EC50值低于40周SHR，提SCU對(duì)40周WKY、SHR的舒張作用強(qiáng)于14周（表1），不同周齡WKY、SHR組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（圖1）。

A.SCU作用于14、40周SHR、WKY大鼠CA的累計(jì)濃度效應(yīng)曲線；B.SCU作用于14、40周SHR、WKY大鼠BA的累計(jì)濃度效應(yīng)曲線

每根血管用1 μmol/L U46199進(jìn)行預(yù)收縮，與14周SHR比較，*P<0.05；與40周SHR比較，#P<0.05，##P<0.01

2.2 SCU預(yù)孵育SHR大鼠CA/BA對(duì)U46619收縮曲線的影響

SCU預(yù)孵育血管后，濃度累積法加入U(xiǎn)46619，獲得U46619的收縮量效曲線。對(duì)照組不加SCU孵育。由表2、圖2可見，SCU組可使U46619的最大收縮率隨孵育濃度的加大依次降低，且SCU組的EC50值明顯高于對(duì)照組（P<0.05），提示SCU可拮抗U46619所致CA/BA收縮。

A.U46619作用于14、40周SHR、WKY大鼠CA的累計(jì)濃度效應(yīng)曲線；B.U46619作用于14、40周SHR、WKY大鼠BA的累計(jì)濃度效應(yīng)曲線

圖2 U46619作用于大鼠CA/BA的累計(jì)濃度效應(yīng)曲線

3討論

SHR出生5周齡，大鼠血壓可達(dá)150 mmHg，成年后血壓平均為170～180 mmHg，最高可達(dá)200 mmHg以上。此鼠除高血壓自發(fā)率達(dá)100%之外，還具有高血壓性心血管病變，適合用來進(jìn)行人類的高血壓病研究[12]，因此，本實(shí)驗(yàn)通過采用SHR大鼠來研究高血壓對(duì)心腦血管舒張與收縮功能的影響。

有多項(xiàng)報(bào)道顯示[13-14]，燈盞花素在臨床上用于治療高血壓病患者的效果甚為明顯，并且也有燈盞花素在SHR上探討治療高血壓的藥理學(xué)研究[15]，而SCU作為燈盞花素的有效活性成分，國(guó)內(nèi)外報(bào)道鮮為少見[16]，因此本文具有一定的創(chuàng)新意義。

本研究結(jié)果顯示，SCU對(duì)SHR大鼠CA/BA均有不同程度的舒張作用，且在一定的濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性，但在最大濃度1000 μM時(shí)，血管出現(xiàn)了收縮，這一情況可能是因?yàn)榻o藥濃度偏大所導(dǎo)致。在血管收縮檢測(cè)試驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SCU可降低U46619血管收縮劑對(duì)血管的收縮作用。另外，CA與BA血管給藥濃度不同，是因?yàn)閮煞N血管對(duì)藥物的敏感程度不同所決定。有研究顯示，BA與CA血管內(nèi)皮細(xì)胞的敏感性存在差異[17]，這一報(bào)道與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

有研究顯示，SCU對(duì)抗大鼠心肌及腦缺血再灌注損傷（IR）時(shí)，曾發(fā)現(xiàn)SCU可通過擴(kuò)張CA/BA血管達(dá)到改善IR的作用[18-20]。在此基礎(chǔ)上，本研究觀察了SCU對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的擴(kuò)血管作用，結(jié)果顯示，SCU可濃度依賴性地舒張自發(fā)性高血壓大鼠的CA/BA，提示SCU可在一定程度上調(diào)節(jié)血管的舒縮反應(yīng)以達(dá)到降低血壓的作用。這一研究結(jié)果的發(fā)現(xiàn)為燈盞花乙素在臨床上治療高血壓疾病提供了一定的藥理學(xué)證據(jù)，并且提示SCU可作為高血壓相關(guān)疾病的潛在治療劑。

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（收稿日期：2017-10-25 本文編輯：祁海文）endprint