E-cadherin表達(dá)丟失與Vimentin表達(dá)在結(jié)直腸癌預(yù)后判斷中的臨床意義

郭志娟 吉 茹

結(jié)直腸癌是指結(jié)直腸粘膜上皮和腺體部位發(fā)生的惡性腫瘤，外科手術(shù)、輔助放療、化療等是目前晚期結(jié)直腸癌的主要臨床治療手段，但治療后癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移仍是影響治療效果、導(dǎo)致患者死亡的主要原因[1]。眾多研究已經(jīng)表明[2-3]，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是促進(jìn)結(jié)直腸癌、胃癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的獨立危險因素，而E-cadherin表達(dá)丟失與Vimentin的表達(dá)上調(diào)是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要標(biāo)志[4]。但目前關(guān)于E-cadherin與Vimentin的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者術(shù)后的預(yù)后關(guān)系的相關(guān)研究較少見，因此本研究在分析結(jié)直腸癌標(biāo)本中E-cadherin與Vimentin的表達(dá)情況與結(jié)直腸癌患者臨床資料間的關(guān)系的基礎(chǔ)之上，進(jìn)一步分析其對結(jié)直腸癌患者的預(yù)后和生存率判斷的臨床價值，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2012年1月至2014年12月于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院行手術(shù)治療的80例結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌組織標(biāo)本，設(shè)為觀察組，80例患者均病歷資料完整，為原發(fā)性腺癌，手術(shù)前均未接受過放療、化療，術(shù)后病理組織檢查確診為結(jié)直腸癌，且均經(jīng)美國癌癥聯(lián)合會標(biāo)準(zhǔn)行TNM分期以及DUCK分期，其中男性47例，女性33例，年齡30～80歲，平均年齡(60.32±16.88)歲。另收集同期因其他原因于我院切除的正常結(jié)直腸組織標(biāo)本30例，設(shè)為對照組，其中男性18例，女性12例，年齡30～75歲，平均年齡(56.11±16.08)歲。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有組間可比性。

1.2 方法

所有標(biāo)本經(jīng)常規(guī)10%中性甲醛固定、石蠟包埋和4 μm厚度切片，65 ℃烤箱過夜，二甲苯兩次常規(guī)透明后以100%～75%的酒精梯度洗脫，95 ℃下檸檬酸鈉抗原修復(fù)。采用免疫組化方法檢測標(biāo)本中的E-cadherin與Vimentin蛋白的表達(dá)，一抗的陰性對照采用磷酸鹽緩沖溶液，試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，所有檢測過程嚴(yán)格按照試劑盒操作說明進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

每張切片結(jié)果判讀由兩名病理醫(yī)師盲讀，根據(jù)染色范圍和染色強度的評分結(jié)果綜合判定E-cadherin與Vimentin表達(dá)陽性與否。細(xì)胞中E-cadherin陽性以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為準(zhǔn)，Vimentin陽性以靠近胞膜或胞質(zhì)呈棕黃色為準(zhǔn)；染色范圍：每張切片隨機選取5個高倍鏡視野(*200)，視野中陽性細(xì)胞數(shù)在25%及以下計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，75%以上計4分；染色強度：染色與背景相似計0分，染色略微高于背景色計1分，染色明顯高于背景色計2分，呈深棕黃色計3分。將染色范圍和染色強度的評分結(jié)果相加，0～3分者定義為此標(biāo)本E-cadherin或Vimentin表達(dá)陰性，3分以上者為此標(biāo)本E-cadherin或Vimentin表達(dá)陽性[5]。

1.4 觀察指標(biāo)

比較觀察組和對照組標(biāo)本中E-cadherin與Vimentin蛋白表達(dá)陽性率；收集80例結(jié)直腸癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理分級等臨床資料，分析各臨床資料與E-cadherin與Vimentin蛋白表達(dá)陽性率的關(guān)系；80例患者均術(shù)后通過電話隨訪2年，統(tǒng)計2年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況及存活與否。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計量資料以均值標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異比較采用t檢驗，計數(shù)資料以百分率表示，組間差異比較采用卡方檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組結(jié)直腸組織中E-cadherin及Vimentin表達(dá)情況比較

結(jié)直腸癌組E-cadherin表達(dá)丟失率(77.50%)和Vimentin表達(dá)陽性率(51.25%)，均顯著高于對照組(16.67%，10.00%)(P<0.05)，見表1。

表1 兩組結(jié)直腸組織中E-cadherin與Vimentin表達(dá)陽性情況比較(例，%)

注：與對照組比較，*為P<0.05。

2.2 E-cadherin、Vimentin表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理關(guān)系

E-cadherin的表達(dá)丟失與結(jié)直腸癌腫瘤大小、病理分化程度、TNM臨床分期、DUCK分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)；Vimentin的陽性表達(dá)與結(jié)直腸癌腫瘤大小、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，見表2。

表2 E-cadherin、Vimentin表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理的關(guān)系(例，%)

注：組間比較，*為P<0.05。

2.3 E-cadherin、Vimentin表達(dá)與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系

生存時間<2年、2年內(nèi)發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的E-cadherin的表達(dá)丟失率和Vimentin表達(dá)陽性率，均顯著高于生存時間>2年、2年內(nèi)未發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者(P<0.05)，見表3。

表3 E-cadherin、Vimentin表達(dá)與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系(例，%)

注：組間比較，*為P<0.05。

3 討論

近年來隨著我國人口老齡化、生活方式和飲食習(xí)慣的改變，動物脂肪和高蛋白的過度攝入，食物纖維的攝入不足等因素的影響，我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈顯著升高趨勢，其中以經(jīng)濟發(fā)達(dá)地區(qū)的發(fā)病率升高更為明顯[6]。雖然近年來結(jié)直腸癌的診療水平在不斷的提升，5年生存率有了顯著的提高，但腫瘤細(xì)胞的去分化、凋亡與增殖之間的平衡失調(diào)、侵襲、轉(zhuǎn)移仍是目前惡性腫瘤的常見臨床特征，亦是目前臨床治療惡性腫瘤需要克服的難點和熱點問題[7-8]。上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的機制之一，是指上皮細(xì)胞內(nèi)分子重新編程、細(xì)胞表型特征發(fā)生改變，如喪失E-cadherin蛋白，獲得Vimentin蛋白，引起細(xì)胞極性的轉(zhuǎn)變，最終使缺乏運動能力的上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)檫\動能力較強的間充質(zhì)細(xì)胞[9]。

E-cadherin蛋白是指存在于細(xì)胞和細(xì)胞間、具有粘附作用的鈣粘蛋白中的1個亞型，是上皮組織存在的基礎(chǔ)[10]。Vimentin即波形蛋白，是間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物之一，具有促進(jìn)上皮細(xì)胞形態(tài)改變、增加細(xì)胞運動能力的作用[11]?？祻姷萚12]研究表明E-cadherin蛋白的表達(dá)丟失與Vimentin蛋白的表達(dá)上調(diào)與肝內(nèi)膽管癌的TNM分期、腫瘤分化、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移等顯著相關(guān)；陳穎等[5]研究顯示，E-cadherin與Vimentin蛋白的表達(dá)情況與結(jié)直腸癌患者的腫瘤大小，分化程度、TNM分期等密切相關(guān)；本研究結(jié)果同樣顯示，結(jié)直腸癌組的E-cadherin表達(dá)丟失率和Vimentin表達(dá)陽性率均顯著高于對照組，E-cadherin的表達(dá)丟失與結(jié)直腸癌患者的腫瘤大小、病理分化程度、TNM臨床分期、DUCK分期、淋巴是否轉(zhuǎn)移相關(guān)，腫瘤直徑越大、腫瘤細(xì)胞分化程度越低、TNM臨床分期和DUCK分期越高、淋巴轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的E-cadherin的表達(dá)丟失率越高；Vimentin的表達(dá)陽性僅與腫瘤大小、淋巴是否轉(zhuǎn)移相關(guān)，腫瘤直徑越大、淋巴轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的Vimentin表達(dá)陽性率越高，與病理分化程度、TNM臨床分期、DUCK分期關(guān)系不顯著，同時與姚俊霞等[13]研究結(jié)果不一致的原因可能為，本研究樣本量較少，致使結(jié)果存在一定的偏倚。

上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化不僅是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的機制之一，同時也是腫瘤細(xì)胞對化療藥物耐藥的機制之一，不僅影響結(jié)惡性腫瘤患者化療的療效，同時會縮短患者的生存時間[14-15]。因此本研究還進(jìn)一步對80例接受手術(shù)治療的結(jié)直腸癌患者進(jìn)行了跟蹤隨訪，結(jié)果顯示，生存時間<2年、2年內(nèi)發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的E-cadherin的表達(dá)丟失率和Vimentin表達(dá)陽性率均顯著高于生存時間>2年、2年內(nèi)未發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者(P<0.05)，提示術(shù)后對結(jié)直腸癌患者的E-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)情況的分析，對生存時間及術(shù)后發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)判具有一定的參考價值。

綜上所述，E-cadherin表達(dá)丟失與Vimentin的表達(dá)上調(diào)與結(jié)直腸癌患者的腫瘤大小、病理分化程度、TNM臨床分期、DUCK分期、淋巴是否轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，且對患者術(shù)后的生存時間和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)判具有一定的臨床應(yīng)用價值。

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