• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于SRK基因序列分析的甘藍(lán)自交不親和系單倍型鑒定及驗(yàn)證

    2018-03-08 03:19:00朱陳曾劉夢(mèng)慈徐冰冰馬存發(fā)李勤菲任雪松宋洪元
    中國(guó)蔬菜 2018年3期
    關(guān)鍵詞:不親結(jié)籽親和性

    鄭 敏 朱陳曾 劉夢(mèng)慈 徐冰冰 馬存發(fā) 李勤菲 任雪松 司 軍 宋洪元

    (西南大學(xué)園藝園林學(xué)院,南方山地園藝學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶市蔬菜學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶 400715)

    甘藍(lán)(Brassica oleraceaL. var.capitataL.)為十字花科蕓薹屬甘藍(lán)種的一個(gè)變種,由不結(jié)球的野生甘藍(lán)經(jīng)長(zhǎng)期栽培演化而來(lái),是世界各地廣泛栽培的蔬菜種類之一。甘藍(lán)作為典型的異花授粉作物,具有花期自交不親和的特性,屬于孢子體自交不親和性植物(sporophytic SI,SSI)(Tantikanjana et al.,2010)。自交不親和系在遺傳上由多個(gè)復(fù)等位基因高度多態(tài)性的S位點(diǎn)控制(Takasaki et al.,2000)。S位點(diǎn)基因通常以一個(gè)單位遺傳給后代,幾乎不會(huì)發(fā)生重組現(xiàn)象,因此S等位基因又稱作S單倍型。目前,已經(jīng)分離到3類與該位點(diǎn)連鎖的基因:SRK受體激酶基因(S-locus receptor kinase)(Nasrallah et al.,1985)、SLG糖蛋白基因(S-locus glycoprotein)(Stein et al.,1991)、SCR(S 富 含 半胱氨酸蛋白基因,S-locus cysteine rich)/SP11(S蛋白 11基因,S-locus protein11)(Schopfer et al.,1999)。SLG基因和SRK基因在雌蕊柱頭中表達(dá),SCR/SP11基因在雄蕊花藥中表達(dá),這3個(gè)基因緊密連鎖,在花粉、柱頭識(shí)別過(guò)程中起重要作用(Kusaba et al.,2000;Takasaki et al.,2000; 盧軍 等,2007),其中SRK基因與SLG基因均呈高度多態(tài)性,同一S等位基因系中的SLG基因與SRK基因在序列上協(xié)同進(jìn)化,因此將這兩個(gè)基因及其連鎖序列合稱為一種S單倍型(S-haplotype)(Boyes & Nasrallah,1993;Okamoto et al.,2004)。迄今,蕓薹屬中已有逾100個(gè)S單倍型被確定,在甘藍(lán)中已經(jīng)找到了逾50個(gè)S單倍型(Ockendon,2000)。不同S單倍型自交不親和系之間花期授粉能正常結(jié)籽,相同S單倍型之間花期授粉不能結(jié)籽或結(jié)籽率極低。因此,利用不同單倍型的自交不親和系進(jìn)行雜種一代配制是目前甘藍(lán)雜種優(yōu)勢(shì)利用的重要途徑之一。

    目前,甘藍(lán)育種家通過(guò)連續(xù)自交、小孢子培養(yǎng)等途徑育成大量的自交不親和系,這些在球形、熟性、抗病性等農(nóng)藝性狀表型不同的自交不親和系存在相同的S單倍型情況。在育種實(shí)踐中,不同自交不親和系之間雜交組合配制時(shí)除了進(jìn)行蕾期徹底去雄外,還需同時(shí)進(jìn)行花期雜交,確認(rèn)參與配組的兩個(gè)自交不親和系是否屬于同一個(gè)單倍型。該方式在一定程度上降低了雜交組合設(shè)計(jì)的針對(duì)性,且田間工作量大。因此,在甘藍(lán)雜交育種工作中進(jìn)行不同自交不親和系的單倍型鑒定和分析是非常重要的。早期的自交不親和系單倍型鑒定和分析方法,如花期親和指數(shù)法(方智遠(yuǎn) 等,1983)、熒光顯微法(張恩慧,1989;陳世儒 等,1990)、免疫測(cè)定 法(Kandasamy et al.,1989;Chen & Nasrallah,1990)、等電聚焦電泳法(Nishio & Hinata,1978)等方法存在易受環(huán)境條件影響、操作過(guò)程繁瑣復(fù)雜、應(yīng)用難度較大等問(wèn)題(高啟國(guó) 等,2011);基于DNA分子的PCR-RFLP(restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction,限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))鑒定法受酶切片段多態(tài)性的限制難以準(zhǔn)確進(jìn)行多個(gè)單倍型的區(qū)分(Nasrallah & Nasrallah,1989;朱利泉和王小佳,2000;張愛(ài)芬 等,2008);根據(jù)SRK激酶區(qū)序列設(shè)計(jì)ClassⅠ型以及ClassⅡ型引物僅能將不同自交不親和系分為ClassⅠ型和ClassⅡ型,無(wú)法確定相應(yīng)的S單倍型(田磊 等,2011)。隨著蕓薹屬植物自交不親和性研究的深入,包括甘藍(lán)在內(nèi)的大量S單倍型所含的SLG、SRK和SCR基因序列的確定以及DNA測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展,結(jié)合生物信息學(xué)分析,使得在基因序列水平上快速鑒定蕓薹屬自交不親和S單倍型成為可能(李霞 等,2015)。根據(jù)SRK基因序列比對(duì),甘藍(lán)自交系所屬S單倍型(高啟國(guó) 等,2011;田磊 等,2011;Tian et al.,2013)以及一代雜種所屬的S單倍型可被確定(苗雯雯 等,2013)。然而,基于SRK基因序列分析的單倍型鑒定法是否與傳統(tǒng)的花粉管萌發(fā)熒光鑒定法、花期親和指數(shù)鑒定法具有一致性仍缺少相應(yīng)的報(bào)道。

    本試驗(yàn)針對(duì)自交不親和雌蕊決定因子SRK基因設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,對(duì)23個(gè)穩(wěn)定的甘藍(lán)自交不親和系SRK基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增、克隆測(cè)序,獲得的SRK基因序列進(jìn)行NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)分析以及相互之間的序列比較分析,確定相應(yīng)自交不親和系的單倍型;并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行相同單倍型之間、不同單倍型之間花期雜交的熒光顯微法鑒定以及花期親和指數(shù)鑒定,以期驗(yàn)證基于SRK基因序列分析可否快速確定相應(yīng)甘藍(lán)自交不親和系所屬單倍型,從而實(shí)現(xiàn)有計(jì)劃地設(shè)計(jì)甘藍(lán)雜交組合,提高育種效率。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    供試材料為23份穩(wěn)定的甘藍(lán)自交不親和系(表1),均由西南大學(xué)十字花科蔬菜研究所保存提供。2016年7月育苗,8月定植于西南大學(xué)十字花科蔬菜研究所歇馬基地。

    表1 參試甘藍(lán)自交不親和系來(lái)源及特征特性

    1.2 甘藍(lán)基因組DNA的提取

    分別取甘藍(lán)自交不親和系植株幼嫩葉片,利用改良的CTAB法(王關(guān)林 等,2014)提取基因組DNA,用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA濃度和純度,電泳條帶單一且分光光度計(jì)檢測(cè)D260/D280比值在1.8~2.0范圍內(nèi)的DNA樣品為合格樣品,置于-20℃冰箱備用。

    1.3 SRK基因引物設(shè)計(jì)及PCR擴(kuò)增

    根據(jù)甘藍(lán)SRK基因序列保守區(qū)域設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物:SRK-F:5′-TCAAVCAAYAGAACACTT-3′和SRK-R:5′-CTTYATCCTKGTAAAACCAT-3′(引物中V=A/C/G、Y=C/T、K=G/T),由北京六合華大基因科技有限公司合成。利用該簡(jiǎn)并引物,以23份甘藍(lán)自交不親和系DNA為模板,擴(kuò)增SRK基因片段。PCR擴(kuò)增體系(25 μL):10×Buffer(含Mg2+)2.5 μL,dNTPs(10 mmol·L-1)0.5 μL,上下游引物(50 μmol·L-1)各 0.1 μL,TaqDNA polymerase(5 U·μL-1)0.2 μL, 模 板 DNA 1.0 μL,ddH2O補(bǔ)齊25 μL。PCR反應(yīng)程序:95 ℃5 min;95 ℃ 30 s,45 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,30 個(gè)循環(huán);72 ℃7 min。獲得預(yù)期大小的PCR產(chǎn)物,用1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),紫外凝膠成像儀系統(tǒng)進(jìn)行拍照。

    1.4 目的片段的回收、克隆及測(cè)序分析

    利用OMEGA瓊脂糖凝膠回收試劑盒,回收目的片段,連接到TRKARA公司的pMD?19-T載體上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞DH5α,將獲得的克隆進(jìn)行PCR鑒定。鑒定后的陽(yáng)性克隆送北京六合華大基因科技有限公司測(cè)序。每份自交不親和系的SRK基因片段測(cè)定2~3個(gè)克隆。

    1.5 甘藍(lán)自交不親和系S單倍型的確定

    將獲得的各自交不親和系的SRK基因序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast比對(duì),確定相應(yīng)的單倍型。在此基礎(chǔ)上利用在線軟件Multialin進(jìn)行相同單倍型以及不同單倍型之間的SRK序列比較分析。根據(jù)Tian等(2013)的報(bào)道,設(shè)計(jì)PK1/PK4和KD4/KD7兩對(duì)引物,進(jìn)一步對(duì)23份自交不親和系的單倍型(ClassⅠ型、ClassⅡ型)進(jìn)行鑒定。

    1.6 單倍型的驗(yàn)證分析

    2017年4月,在西南大學(xué)園藝園林學(xué)院甘藍(lán)育種基地,根據(jù)不同甘藍(lán)自交不親和系SRK基因序列比較確定的S單倍型,設(shè)計(jì)20個(gè)雜交組合,含相同單倍型、不同單倍型甘藍(lán)自交不親和系之間的花期、蕾期雜交授粉,并以各自交不親和系花期和蕾期自交授粉為對(duì)照,3次重復(fù),每重復(fù)至少50朵花/蕾。

    1.6.1 花粉原位萌發(fā)的熒光顯微鏡觀察 不同甘藍(lán)自交不親和系之間花期和蕾期授粉3~5 h后,取其柱頭于固定液(冰乙酸∶無(wú)水乙醇=9V∶1V的混合液)中固定,24 h后轉(zhuǎn)移至70%的乙醇中保存。固定后的柱頭在2 mol·L-1NaOH溶液中55 ℃軟化至透明(約2 h),再用50 mmol·L-1偏磷酸鉀溶液清洗3~5次,置于0.1%苯胺藍(lán)染液中染色2 h,取出柱頭并用50%甘油壓片于Leica DM6000B熒光顯微鏡380 nm激發(fā)光下進(jìn)行花粉管萌發(fā)情況觀察。每個(gè)組合調(diào)查至少3個(gè)柱頭。

    1.6.2 親和指數(shù)的測(cè)定 完成全部授粉后統(tǒng)計(jì)授粉的花朵數(shù),待種莢成熟后逐一考種,計(jì)算花期和蕾期雜交親和指數(shù)。3次生物學(xué)重復(fù),采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    親和指數(shù)=種子數(shù)/授粉的花朵數(shù)

    2 結(jié)果與分析

    2.1 SRK基因的PCR擴(kuò)增

    利用SRK基因簡(jiǎn)并引物SRK-F和SRK-R,分別從23份甘藍(lán)自交不親和系中擴(kuò)增出預(yù)期約

    1.0 kb大小的目的片段(圖1)。目的片段進(jìn)行回收,克隆于pMD?19-T載體上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,對(duì)PCR鑒定呈陽(yáng)性的克隆進(jìn)行測(cè)序分析。

    圖1 23份甘藍(lán)自交不親和系SRK基因片段的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

    2.2 甘藍(lán)自交不親和系單倍型的確定

    從表2可以看出,23份甘藍(lán)自交不親和系的SRK序列均在NCBI庫(kù)中找到對(duì)應(yīng)的單倍型,其序列一致性在95%~99%之間。如自交不親和系E3的SRK基因?qū)?yīng)NCBI中已知的SRK36單倍型,其序列覆蓋率達(dá)到99%,序列相似度達(dá)到98%,因此將甘藍(lán)自交不親和系E3確定為SRK36單倍型。其他的自交不親和系單倍型的確定按類似的方法進(jìn)行,23份甘藍(lán)自交不親和系分屬10個(gè)不同的單倍型,其中屬于SRK36單倍型的有5份,占參試甘藍(lán)自交不親和系的22%;SRK7、SRK16和SRK583種單倍型均只在1份材料中發(fā)現(xiàn)。

    將屬于相同S單倍型的自交不親和系SRK基因序列以及分屬于不同S單倍型的自交不親和系SRK基因序列進(jìn)行比較。結(jié)果表明:屬于同一S單倍型(SRK36)的5個(gè)自交不親和系(282、K1、G1、P1、E3)SRK基因序列同源性極高,僅個(gè)別堿基存在差異或個(gè)別自交不親和系發(fā)生片段缺失現(xiàn)象,如G1材料的SRK36缺失45 b p序列(圖2-a);而分屬不同S單倍型自交不親和系F416(SRK3)、B1(SRK28)、P1(SRK36)、H2(SRK45) 的SRK基因序列差異較大(圖2-b)。

    進(jìn)一步針對(duì)23份甘藍(lán)自交不親和系所屬的ClassⅠ型以及ClassⅡ型自交不親性進(jìn)行鑒定,其中PK1/PK4引物在23份甘藍(lán)自交不親和系中均擴(kuò)增獲得大小為950 bp的條帶,KD4/KD7引物在7 份材料(B3、G1、H2、K1、282、301、339)中擴(kuò)增獲得大小為1 100 bp的條帶(圖3)。說(shuō)明除B3、G1、H2、K1、282、301、339外的其他材料屬于ClassⅠ型自交不親和,而7份含1 100 bp條帶的材料屬于ClassⅠ型和ClassⅡ型雜合材料。

    表2 不同甘藍(lán)自交不親和系所屬單倍型

    圖2 相同單倍型SRK基因序列以及不同單倍型SRK基因序列的多重 比較

    2.3 單倍型的驗(yàn)證分析

    2.3.1 花粉原位萌發(fā)的熒光顯微觀察 蕓薹屬作物自交不親和性表現(xiàn)為開(kāi)花后自花花粉或相同S單倍型花粉在其柱頭上萌發(fā)受阻或雖然萌發(fā)但花粉管不能正常伸長(zhǎng)穿過(guò)柱頭完成受精。如甘藍(lán)自交不親和系F416(SRK3單倍型)花期自交授粉后可明顯看到花粉粒被吸附在柱頭表面但是未形成花粉管束穿過(guò)柱頭乳突細(xì)胞(圖4-a),但其蕾期自交授粉后可觀察到大量花粉在柱頭表面萌發(fā)且有部分形成花粉管穿過(guò)柱頭乳突細(xì)胞(圖4-b)。相同S單倍型自交不親和系花期雜交授粉,如F416(SRK3)×H1(SRK3)、G1(SRK36)×P1(SRK36)可見(jiàn)大量花粉被吸附在柱頭表面,但是幾乎看不到萌發(fā)的花粉形成花粉管穿過(guò)柱頭乳突細(xì)胞(圖4-c、d)。然而,屬于不同S單倍型的自交不親和系花期雜交授粉后,如F416(SRK3)×E3(SRK36)、H1(SRK3)×H2(SRK45)則可以觀察到大量的花粉被吸附在柱頭表面萌發(fā)并形成花粉管穿過(guò)柱頭乳突細(xì)胞進(jìn)入花柱組織(圖4-e、f)。上述花粉管萌發(fā)的熒光檢測(cè)結(jié)果支持了根據(jù)SRK序列所確定的不同甘藍(lán)自交不親和性的單倍型劃分結(jié)果。

    圖3 23份甘藍(lán)自交不親和系ClassⅠ型以及ClassⅡ型自交不親性鑒定

    圖4 相同S單倍型以及不同S單倍型甘藍(lán)自交不親和系花期雜交花粉原位萌發(fā)熒光顯微觀察結(jié)果

    2.3.2 相同S單倍型以及不同S單倍型甘藍(lán)自交不親和系花期雜交結(jié)莢結(jié)籽情況 田間花期授粉35 d后,F(xiàn)416花期自交授粉結(jié)莢結(jié)籽情況(圖5-a~c)與 相 同 S單 倍 型 G1(SRK36)×P1(SRK36)、F416(SRK3)×H1(SRK3)自交不親和系花期雜交授粉后結(jié)莢結(jié)籽情況一致,表現(xiàn)為所結(jié)種莢短小、干癟,幾乎看不見(jiàn)籽粒突起,空莢占大多數(shù)且掉莢現(xiàn)象較為普遍(圖5-g~l)。而不同S單倍型F416(SRK3)×E3(SRK36)、H1(SRK3)×H2(SRK45)自交不親 和系花期雜交授粉后所結(jié)種莢長(zhǎng)、飽滿,籽粒突起明顯且種子發(fā)育飽滿,空莢、死莢極少(圖5-m~r),最多種莢結(jié)籽數(shù)達(dá)到34粒,且結(jié)籽數(shù)量明顯優(yōu)于各S單倍型蕾期自交授粉結(jié)莢結(jié)籽情況(圖5-d~f)。上述結(jié)果表明,根據(jù)SRK基因序列確定的相同S單倍型自交不親和系之間花期授粉后不能結(jié)籽,表現(xiàn)不親和;而不同S單倍型自交不親和系之間花期授粉后結(jié)籽量多且飽滿,親和性高。

    2.3.3 相同S單倍型以及不同S單倍型甘藍(lán)自交不親和系雜交組合的花期親和指數(shù) 一般認(rèn)為,花期親和指數(shù)小于0.5或1的材料屬于強(qiáng)自交不親和系;介于1~3之間為弱自交不親和系;而大于10的被認(rèn)定為自交親和系(方智遠(yuǎn) 等,1983)。從表3可以看出,自交不親和系F416花期自交雜交親和指數(shù)為0.09,而蕾期自交平均親和指數(shù)為1.73,屬于嚴(yán)格的自交不親和系。20個(gè)雜交組合中,相同S單倍型自交不親 和系共配制8個(gè)雜交組合, 花期雜交親和指數(shù)均小于0.5,其中E3(SRK36)×G1(SRK36)親和指數(shù)最高,但也僅為0.26;且相同S單倍型自交不親和系之間花期正反交不影響其親和指數(shù),如E3(SRK36)和G1(SRK36)正反交親和指數(shù)無(wú)顯著差異。而分屬12個(gè)不同S單倍型自交不親和系之間花期雜交結(jié)籽多,親和指數(shù)高,最低親和指數(shù)為8.10〔E3(SRK36)×H1(SRK3)〕,最高親和指數(shù)達(dá)到21.76〔F1(SRK7)×E3(SRK36)〕。 另 外, 不同S單倍型自交不親和系之間花期雜交親和指數(shù)差異較大,如H1(SRK3)作為母本分別與H2(SRK45)、E3(SRK36)雜交時(shí),花期親和指數(shù)差異不顯著;但E3(SRK36)作為母本分別與H1(SRK3)、F1(SRK7)、N1(SRK8) 雜 交 時(shí),E3(SRK36)×H1(SRK3)的親和指數(shù)顯著低于另外兩個(gè)組合;F1(SRK7)作為母本分別與H2(SRK45)、E3(SRK36)雜交時(shí),親和指數(shù)差異達(dá)顯著水平。同一自交不親和系作為母 本與不同單倍型材料雜交后出現(xiàn)結(jié)籽數(shù)量差異大的現(xiàn)象,可能與來(lái)自父本中花粉決定因子SCR/SP11的親和性有關(guān)。上述結(jié)果顯示,根據(jù)SRK基因序列確定的相同S單倍型自 交不親和系之間花期雜交確實(shí)不親和,而不同S單倍型自交不親和系之間的花期雜交是親和的,表明基于SRK基因序列分析確定單倍型可以用于指導(dǎo)不同甘藍(lán)自交不親和系的雜交組合設(shè)計(jì)。

    圖5 相同S單倍型以及不同S單倍型甘藍(lán)自交不親和系花期雜交結(jié)莢結(jié)籽情況

    表3 不同甘藍(lán)自交不親和系雜交組合的花期親和指數(shù)

    3 結(jié)論與討論

    蕓薹屬自交不親和性可分為ClassⅠ型和ClassⅡ型兩大類,其中ClassⅠ型為花粉顯性,表現(xiàn)強(qiáng)自交不親和;ClassⅡ型為花粉隱性,表現(xiàn)弱自交不親和(Nasrallah & Nasrallah,1993)。利用SRK基因特異引物,Tian等(2013)對(duì)111份結(jié)球甘藍(lán)自交系的單倍型進(jìn)行鑒定,發(fā)現(xiàn)56份屬于ClassⅠ型(PK1/PK4引物對(duì)),55份屬于ClassⅡ型(KD4/KD7引物對(duì));然而,基于花粉管熒光染色鑒定,僅4份屬于SRK15單倍型的ClassⅡ型材料表現(xiàn)為花期親和。在甘藍(lán)育種中,兩種類型自交不親和系均被廣泛用于雜種配制(苗雯雯 等,2013)。本試驗(yàn)中,PK1/PK4引物在23份甘藍(lán)自交不親和系中均擴(kuò)增獲得大小為950 bp的條帶,KD4/KD7引物在7份材料(B3、G1、H2、K1、282、301、339)中擴(kuò)增獲得大小為1 100 bp的條帶,顯示這7份材料在S位點(diǎn)上是雜合的,屬于雜合體。甘藍(lán)自交不親和系存在S位點(diǎn)雜合現(xiàn)象在早期的研究中也曾報(bào)道(田磊 等,2011)。然而,通過(guò)SRK基因序列分析,未能在這7份雜合材料中鑒定出屬于ClassⅡ型的SRK2、SRK5以及SRK15單倍型序列(Tian et al.,2013)。另外,本試驗(yàn)將S位點(diǎn)雜合的G1(鑒定為SRK36單倍型)分別作為父本和母本與同一S單倍型的E3以及P1花期雜交后均表現(xiàn)為典型的自交不親和特性。說(shuō)明,即使在S位點(diǎn)上出現(xiàn)ClassⅠ型和ClassⅡ型雜合,仍不影響其花期雜交的不親和性。

    通過(guò)特異引物擴(kuò)增僅能將甘藍(lán)自交不親和系分為ClassⅠ型和ClassⅡ型兩大類,但不能確定其所屬單倍型(田磊 等,2011)。李霞等(2015)對(duì)4份不結(jié)球白菜的SRK及SLG基因序列進(jìn)行克隆分析,初步確定了其所屬單倍型,但未進(jìn)行相應(yīng)的親和性試驗(yàn)?;赟RK基因序列分析,Tian等 (2013)對(duì)111份結(jié)球甘藍(lán)單倍型進(jìn)行了鑒定,并利用柱頭花粉管熒光鑒定法重點(diǎn)驗(yàn)證了歸屬于相同S單倍型材料之間親和性。本試驗(yàn)中,23份甘藍(lán)自交不親和系分屬于10個(gè)不同的單倍型,未檢測(cè)到屬于ClassⅡ型的SRK2、SRK5以及SRK15單倍型,但不同單倍型的分布頻率與Tian 等(2013)在111個(gè)結(jié)球甘藍(lán)自交系上的鑒定結(jié)果接近;F1材料被鑒定為SRK7單倍型,與高啟國(guó)等(2011)針對(duì)該材料SRK基因和SCR基因同時(shí)鑒定結(jié)果一致。說(shuō)明利用本試驗(yàn)中的簡(jiǎn)并引物擴(kuò)增SRK基因序列進(jìn)行單倍型的確定是可靠的。本試驗(yàn)還對(duì)歸屬于相同S單倍型材料以及不同S單倍型材料之間的親和性,同時(shí)采用柱頭花粉管熒光鑒定法以及親和指數(shù)測(cè)定法進(jìn)行了驗(yàn)證,獲得了基于SRK基因序列鑒定相應(yīng)自交不親和系所屬單倍型與田間鑒定相吻合的直接證據(jù)。這些結(jié)果支持基于SRK基因序列分析確定對(duì)應(yīng)甘藍(lán)自交不親和系所屬單倍型是一種簡(jiǎn)單可靠的鑒定方法,可用于指導(dǎo)甘藍(lán)自交不親和系之間的雜交組合設(shè)計(jì)。

    陳世儒,雷建軍,李成瓊,郭余龍.1990.甘藍(lán)自交不親和性的熒光染色快速測(cè)定.中國(guó)園藝學(xué)會(huì)成立六十周年紀(jì)念暨第六屆年會(huì)論文集.北京:萬(wàn)國(guó)出版社.

    方智遠(yuǎn),孫培田,劉玉梅.1983.甘藍(lán)雜種優(yōu)勢(shì)利用和自交不親和系選育的幾個(gè)問(wèn)題.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),(3):51-61.

    高啟國(guó),韋靜宜,朱利泉,王小佳.2011.基于SRK和SCR序列的甘藍(lán)自交不親和系單倍型分析.西南大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,33(2):86-90.

    李霞,胡偵華,周國(guó)林,汪愛(ài)華.2015.四個(gè)不結(jié)球白菜自交不親和S單元型分子鑒定.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),(16):3948-3951.

    盧軍,李樂(lè)玉,陳曉丹,朱利泉,王小佳.2007.蕓薹屬自交不親和功能因子及分子機(jī)制研究進(jìn)展.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),(6):601-605.

    苗雯雯,田磊,莊木,劉玉梅,楊麗梅,張揚(yáng)勇,方智遠(yuǎn).2013.甘藍(lán)一代雜種S單元型的分布.中國(guó)蔬菜,(5):23-28.

    田磊,莊木,劉玉梅,楊麗梅,張揚(yáng)勇,方智遠(yuǎn).2011.甘藍(lán)自交系S單元型的快速分類鑒定.園藝學(xué)報(bào),38(S):2545.

    王關(guān)林,方宏筠.2014.植物基因工程.北京:科學(xué)出版社.

    張愛(ài)芬,李英,高素燕,史公軍,侯喜林.2008.不結(jié)球白菜自交不親和S單元型的鑒定研究.西北植物學(xué)報(bào),28(9):1720-1727.

    張恩慧.1989.用熒光顯微法測(cè)定甘藍(lán)自交不親和性.陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),(1):6-7.

    朱利泉,王小佳.2000.利用S位點(diǎn)多態(tài)性快速測(cè)定甘藍(lán)自交不親和性及其S等位基因系.植物學(xué)報(bào),42(6):595-599.

    Boyes D C,Nasrallah J B.1993.Physical linkage of theSLGandSRKgenes at the self-incompatibility locus ofBrassica oleracea.Mol Gen Genet,236:369-373.

    Chen C H,Nasrallah J B.1990.A new class of S-sequences defined by a pollen recessive self-incompatibility allele ofBrassica oleracea.Mol Gen Genet,222:241-248.

    Kandasamy M K,Paolillo D J,F(xiàn)araday C D,Nasrallah J B,Nasrallah M E.1989.The S-locus specific glycoproteins ofBrassicaaccumulate in the cell wall of developing stigma papillae.Dev Biol,134:462-472.

    Kusaba M,Matsushita M,Okazaki K,Satta Y,Nishio T.2000.Sequence and structural diversity of the S-locus genes from different lines with the same self-recognition specificities minBrassica oleracea.Genetics,154:413-420.

    Nasrallah J B,Kao T H,Goldberg M L,Nasrallah M E.1985.Erratum:a cDNA clone encoding an S-locus-specific glycoprotein fromBrassica oleracea.Nature,326(6112):523.

    Nasrallah J B,Nasrallah M E.1989.The molecular genetics of selfincompatibility inBrassica.Ann Rev Genet,23:121-139.

    Nasrallah J B,Nasrallah M E.1993.Pollen-stigma signaling in the sporophytic self-incompatibility response.The Plant Cell,5(10):1325-1335.

    Nishio T,Hinata K.1978.Analysis of S-specific proteins in stigma ofBrassica oleraceaL.by isoelectric focusing.Heredity,38(3):391-396.

    Ockendon D J.2000.The S-allele collection ofBrassica oleracea.Acta Hort,539:25-30.

    Okamoto S,Sato Y,Sakamoto K,Nishio T.2004.Distribution of similar self-incompatibility(S)haplotypes in different genera,RaphanusandBrassica.Sexual Plant Reproduction,17(1),33-39.

    Schopfer C R,Nasrallah M E,Nasrallah J B.1999.The male determinant of self-incompatibilty inBrassica.Science,286:1697-1700.

    Stein J C,Howlett B,Boyes D C,Nasrallah M E,Nasrallah J B.1991.Molecular cloning of a putative receptor protein kinase gene encoded at the self-incompatibility locus ofBrassica oleracea.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,88(19):8816-8820.

    Takasaki T,Hatakeyama K,Suzuki G,Watanabe M,Isogaik A,Hinata K.2000.The S-receptor kinase determines selfincompatibility inBrassicastigma.Nature,403:913-916.

    Tantikanjana T,Nasrallah M E,Nasrallah J B.2010.Complex networks of self-incompatibility signaling in theBrassicaoleracea.Plant Biol,13:520-526.

    Tian L,Miao W,Liu J,F(xiàn)ang Z,Liu Y,Yang L,Zhang Y,Zhuang M.2013.Identification of s haplotypes in cabbage inbred lines(Brassica oleraceavar.capitataL.).Scientia Horticulturae,164:400-408.

    猜你喜歡
    不親結(jié)籽親和性
    福建農(nóng)林大學(xué)綜述植物自交不親和系統(tǒng)
    蔬菜(2023年10期)2023-12-03 18:20:42
    無(wú)籽西瓜的“籽”去哪了
    甘藍(lán)自交不親和相關(guān)基因BoPUB9的克隆及表達(dá)分析
    部分薔薇與現(xiàn)代月季雜交親和性研究
    園林科技(2021年1期)2022-01-19 03:13:54
    與人交往要記住六個(gè)“不”
    新傳奇(2021年12期)2021-04-25 17:55:42
    ‘富有’甜柿砧木種質(zhì)早期親和性研究
    我的發(fā)現(xiàn)
    荔枝高接品種的選擇
    試論傳粉昆蟲對(duì)我國(guó)中南地區(qū)油茶結(jié)實(shí)和結(jié)籽的作用
    不結(jié)球白菜與西洋菜遠(yuǎn)緣雜交親和性研究
    久久国产精品影院| 长腿黑丝高跟| 涩涩av久久男人的天堂| 精品免费久久久久久久清纯| 国产精品免费一区二区三区在线| 中文字幕精品免费在线观看视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 热re99久久国产66热| 久久亚洲真实| 啦啦啦免费观看视频1| 一级毛片精品| 国内精品久久久久久久电影| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 岛国在线观看网站| e午夜精品久久久久久久| 精品乱码久久久久久99久播| 9191精品国产免费久久| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 变态另类丝袜制服| 妹子高潮喷水视频| 亚洲情色 制服丝袜| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲成人久久性| 极品人妻少妇av视频| 91字幕亚洲| 欧美乱妇无乱码| 午夜视频精品福利| 国产人伦9x9x在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲精品一区av在线观看| 成人欧美大片| 精品欧美国产一区二区三| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲欧美激情在线| 亚洲精品国产一区二区精华液| av视频在线观看入口| 大型黄色视频在线免费观看| 成人欧美大片| 日韩有码中文字幕| 他把我摸到了高潮在线观看| av有码第一页| 在线观看免费视频日本深夜| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 91成人精品电影| 国产激情久久老熟女| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲一区高清亚洲精品| 免费看美女性在线毛片视频| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 人人妻人人澡人人看| 成人亚洲精品一区在线观看| 乱人伦中国视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 午夜老司机福利片| 亚洲无线在线观看| 丝袜在线中文字幕| 脱女人内裤的视频| 日韩大码丰满熟妇| 在线免费观看的www视频| 女同久久另类99精品国产91| 国产熟女午夜一区二区三区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 黄频高清免费视频| 亚洲一区中文字幕在线| 久久伊人香网站| 久久精品91无色码中文字幕| 99re在线观看精品视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产麻豆69| avwww免费| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久九九热精品免费| 日韩三级视频一区二区三区| 久久久久亚洲av毛片大全| 日日夜夜操网爽| 女警被强在线播放| 国产av精品麻豆| 国产不卡一卡二| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 在线播放国产精品三级| 亚洲人成电影观看| 在线免费观看的www视频| 日韩免费av在线播放| 国产1区2区3区精品| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美日韩乱码在线| 亚洲少妇的诱惑av| 色尼玛亚洲综合影院| 大香蕉久久成人网| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲国产精品999在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲欧美精品综合久久99| 日韩av在线大香蕉| 亚洲,欧美精品.| 欧美一区二区精品小视频在线| 可以在线观看毛片的网站| 女人精品久久久久毛片| cao死你这个sao货| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美日本视频| 桃色一区二区三区在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 最好的美女福利视频网| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 51午夜福利影视在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 搞女人的毛片| 午夜福利成人在线免费观看| 成人手机av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 美女国产高潮福利片在线看| 麻豆成人av在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 麻豆国产av国片精品| 亚洲av第一区精品v没综合| 波多野结衣高清无吗| 久久精品国产综合久久久| 99香蕉大伊视频| 精品电影一区二区在线| 欧美日韩一级在线毛片| 国产不卡一卡二| 老司机深夜福利视频在线观看| 午夜福利视频1000在线观看 | 亚洲自拍偷在线| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 又紧又爽又黄一区二区| 老司机午夜福利在线观看视频| 免费av毛片视频| 97人妻天天添夜夜摸| 大码成人一级视频| 亚洲黑人精品在线| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 午夜精品在线福利| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 久久中文字幕一级| 亚洲成国产人片在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 免费看a级黄色片| 美女国产高潮福利片在线看| 高清在线国产一区| 十八禁人妻一区二区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 多毛熟女@视频| 久99久视频精品免费| 91av网站免费观看| 99国产精品免费福利视频| 免费少妇av软件| 国产精品综合久久久久久久免费 | 在线国产一区二区在线| av超薄肉色丝袜交足视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 午夜两性在线视频| 久久青草综合色| 亚洲 欧美一区二区三区| 成人手机av| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 99热只有精品国产| 亚洲精品一区av在线观看| 日韩精品青青久久久久久| 欧美最黄视频在线播放免费| 热99re8久久精品国产| 久久精品影院6| 一进一出好大好爽视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产激情欧美一区二区| 99精品久久久久人妻精品| 久久亚洲真实| 国产三级黄色录像| 少妇被粗大的猛进出69影院| 一级毛片女人18水好多| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲片人在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品 国内视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产精品一区二区精品视频观看| 可以在线观看毛片的网站| 又大又爽又粗| 国产一卡二卡三卡精品| 18禁观看日本| 国产在线精品亚洲第一网站| 成熟少妇高潮喷水视频| 日韩国内少妇激情av| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩欧美国产一区二区入口| 中文字幕色久视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 欧美在线一区亚洲| 精品人妻在线不人妻| 丝袜在线中文字幕| 国产亚洲av高清不卡| 日本在线视频免费播放| 无人区码免费观看不卡| 欧美成人性av电影在线观看| 91成年电影在线观看| www.999成人在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产人伦9x9x在线观看| 久久这里只有精品19| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产一区二区三区综合在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 最近最新中文字幕大全电影3 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产xxxxx性猛交| 亚洲av五月六月丁香网| 99国产精品99久久久久| 国产麻豆69| 久久久久久大精品| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美激情高清一区二区三区| 天天添夜夜摸| 午夜福利免费观看在线| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲片人在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99国产精品一区二区三区| 男男h啪啪无遮挡| 看免费av毛片| 日韩欧美国产在线观看| 麻豆国产av国片精品| 亚洲五月婷婷丁香| 1024香蕉在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 久久久久久人人人人人| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 色哟哟哟哟哟哟| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产成人av激情在线播放| 两个人看的免费小视频| 九色国产91popny在线| 后天国语完整版免费观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产一区在线观看成人免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| 97人妻天天添夜夜摸| 看黄色毛片网站| 成熟少妇高潮喷水视频| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美成人性av电影在线观看| 色综合站精品国产| 国产精品久久久人人做人人爽| 美女午夜性视频免费| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 欧美在线黄色| 男人舔女人下体高潮全视频| av天堂在线播放| 欧美午夜高清在线| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲伊人色综图| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 日韩大尺度精品在线看网址 | 久久热在线av| 男男h啪啪无遮挡| 香蕉久久夜色| 亚洲色图av天堂| 午夜两性在线视频| 亚洲全国av大片| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 午夜影院日韩av| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 精品午夜福利视频在线观看一区| 岛国在线观看网站| 91字幕亚洲| 亚洲,欧美精品.| 亚洲最大成人中文| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av熟女| 国产精品一区二区在线不卡| 老汉色∧v一级毛片| 久久精品影院6| 91国产中文字幕| 精品国内亚洲2022精品成人| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产91精品成人一区二区三区| 成在线人永久免费视频| 亚洲黑人精品在线| 欧美色视频一区免费| 欧美中文综合在线视频| 在线国产一区二区在线| 岛国在线观看网站| 日韩精品青青久久久久久| 久热这里只有精品99| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 制服诱惑二区| e午夜精品久久久久久久| 成人18禁在线播放| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久婷婷成人综合色麻豆| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲av熟女| 18美女黄网站色大片免费观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 精品久久久久久久久久免费视频| 国语自产精品视频在线第100页| 悠悠久久av| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美午夜高清在线| 国产精品1区2区在线观看.| 一本大道久久a久久精品| 色老头精品视频在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 日本三级黄在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲成人久久性| 9热在线视频观看99| 一本综合久久免费| 午夜福利影视在线免费观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| cao死你这个sao货| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 99热只有精品国产| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美在线黄色| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美日韩乱码在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲熟女毛片儿| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 成人18禁在线播放| 黄色毛片三级朝国网站| 国内精品久久久久精免费| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲一区中文字幕在线| 国产精品一区二区免费欧美| 免费观看精品视频网站| 久久精品91蜜桃| 精品电影一区二区在线| 深夜精品福利| 亚洲黑人精品在线| 亚洲免费av在线视频| 久久 成人 亚洲| 超碰成人久久| 一本综合久久免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产主播在线观看一区二区| 午夜亚洲福利在线播放| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久热在线av| 少妇 在线观看| 亚洲国产精品999在线| 国产三级黄色录像| 欧美黑人精品巨大| 日本a在线网址| 国产又色又爽无遮挡免费看| 波多野结衣av一区二区av| 国产一区在线观看成人免费| 国产精品一区二区三区四区久久 | 美女免费视频网站| 久久精品国产清高在天天线| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国内精品久久久久久久电影| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| av天堂在线播放| 啦啦啦 在线观看视频| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲精华国产精华精| 男女下面插进去视频免费观看| 免费搜索国产男女视频| 在线观看免费午夜福利视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 看片在线看免费视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 午夜激情av网站| 99国产极品粉嫩在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 啪啪无遮挡十八禁网站| av福利片在线| 日韩欧美国产在线观看| 我的亚洲天堂| 亚洲第一电影网av| 日本在线视频免费播放| 亚洲av片天天在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 18禁观看日本| avwww免费| 亚洲熟妇熟女久久| 免费观看人在逋| 后天国语完整版免费观看| 国产亚洲欧美98| 亚洲av片天天在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 成人国产一区最新在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 满18在线观看网站| 在线观看日韩欧美| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲美女黄片视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美午夜高清在线| 国产av在哪里看| 嫩草影视91久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美av亚洲av综合av国产av| 91精品三级在线观看| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 后天国语完整版免费观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 在线播放国产精品三级| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 少妇被粗大的猛进出69影院| 在线观看午夜福利视频| 亚洲avbb在线观看| 精品第一国产精品| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 涩涩av久久男人的天堂| 天天添夜夜摸| 久久中文字幕一级| 午夜福利在线观看吧| aaaaa片日本免费| 91在线观看av| 久久久久久人人人人人| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美在线一区亚洲| 久久香蕉激情| 啦啦啦韩国在线观看视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲av电影在线进入| 一区在线观看完整版| 中文字幕久久专区| 嫩草影视91久久| 91成年电影在线观看| 性欧美人与动物交配| 久久热在线av| 亚洲精品在线美女| 在线观看免费视频网站a站| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国内精品久久久久久久电影| 国产区一区二久久| 亚洲专区国产一区二区| 黄色女人牲交| 亚洲一码二码三码区别大吗| 正在播放国产对白刺激| 少妇 在线观看| 国产精品二区激情视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 淫妇啪啪啪对白视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 在线视频色国产色| 大陆偷拍与自拍| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 美女高潮到喷水免费观看| 日韩大码丰满熟妇| 精品久久久久久成人av| 国语自产精品视频在线第100页| 9热在线视频观看99| 亚洲国产精品sss在线观看| 岛国视频午夜一区免费看| 日韩av在线大香蕉| 大码成人一级视频| 成人永久免费在线观看视频| 一区二区三区高清视频在线| 俄罗斯特黄特色一大片| 操出白浆在线播放| 久久人妻av系列| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 91成人精品电影| 国产成人精品无人区| 后天国语完整版免费观看| www.熟女人妻精品国产| svipshipincom国产片| 999久久久国产精品视频| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 色综合欧美亚洲国产小说| 韩国av一区二区三区四区| 国产主播在线观看一区二区| 禁无遮挡网站| 久9热在线精品视频| 午夜免费鲁丝| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲国产看品久久| 99香蕉大伊视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品久久久人人做人人爽| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产私拍福利视频在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 人妻久久中文字幕网| 亚洲精品中文字幕在线视频| 又大又爽又粗| 欧美日本视频| 午夜免费观看网址| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产一区二区三区视频了| 老鸭窝网址在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 午夜免费观看网址| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品国产一区二区久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 午夜福利,免费看| 国产激情久久老熟女| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 桃红色精品国产亚洲av| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲国产中文字幕在线视频| 美女免费视频网站| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美精品亚洲一区二区| 满18在线观看网站| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 午夜a级毛片| 午夜福利成人在线免费观看| 大型黄色视频在线免费观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 香蕉久久夜色| 老汉色av国产亚洲站长工具| 精品一区二区三区av网在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 中文字幕色久视频| 好男人电影高清在线观看| 黄片大片在线免费观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产精品av久久久久免费| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲av美国av| 国产激情久久老熟女| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲欧美激情综合另类| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产精品久久视频播放| 不卡av一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久5区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲男人的天堂狠狠| 婷婷精品国产亚洲av在线| aaaaa片日本免费| 一区二区三区高清视频在线| a在线观看视频网站| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲七黄色美女视频| 激情在线观看视频在线高清| 制服丝袜大香蕉在线| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久中文字幕一级| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 午夜福利在线观看吧| 欧美激情久久久久久爽电影 | 看黄色毛片网站| 女性生殖器流出的白浆| 成人精品一区二区免费| 国产黄a三级三级三级人| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 欧美成人性av电影在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 成人欧美大片| 午夜福利免费观看在线| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产视频一区二区在线看| 亚洲成av人片免费观看| 精品国产亚洲在线| 在线观看日韩欧美|