補(bǔ)腎益心片對(duì)高血壓大鼠性功能及陰莖海綿體的干預(yù)研究

， ，煜德，， ， ， ， ， ，，

高血壓(essential hypertension，EH)是目前臨床上最常見(jiàn)的心血管疾病之一。隨著人類(lèi)社會(huì)的不斷發(fā)展和人們生活方式的轉(zhuǎn)變，該病的發(fā)病率、患病率呈逐漸上升的趨勢(shì)；若血壓控制不佳，將會(huì)導(dǎo)致心、腦、腎等重要靶器官的損害，甚至最終導(dǎo)致冠心病、心肌梗死、腦卒中、終末期腎病等嚴(yán)重疾病，給人類(lèi)的健康帶來(lái)巨大威脅。

近年來(lái)，高血壓病人的勃起功能障礙 (erectile dysfunction，ED)問(wèn)題日益引起臨床重視。有統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，高血壓病人同時(shí)患有勃起功能障礙的比例遠(yuǎn)高于普通人群[1]，高血壓病人中男性病人同時(shí)伴隨有ED 比例高達(dá)55.5%[2]。更值得注意的是，高血壓病人中已經(jīng)接受治療的病人，其ED發(fā)生的比例甚至高于高血壓未開(kāi)始治療的病人[1]，這一結(jié)果可能與目前降血壓西藥所引起和(或)加重的勃起功能障礙密切相關(guān)[3]。

目前的降血壓西藥主要包括：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)、血管緊張素Ⅱ受體(AngⅡ)拮抗劑(ARB)、β- 受體阻滯劑(β- B)、鈣通道阻滯劑(CCB)、噻嗪類(lèi)利尿劑(Thiazine Diuretic)等幾大類(lèi)藥物。高血壓伴有ED嚴(yán)重影響生理心理健康、日常工作、生活質(zhì)量及家庭和諧，影響病人的治療依從性及降壓藥物療效，影響高血壓治療的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸。研究發(fā)現(xiàn)，目前降血壓藥物可能引起勃起功能障礙的種類(lèi)中，以β- 受體阻滯劑和噻嗪類(lèi)利尿劑等為最多。有報(bào)道認(rèn)為血管緊張素Ⅱ拮抗劑和ACEI有助于改善高血壓引起的ED[4]，因此，若能尋找到既可以協(xié)助降低血壓又能幫助改善勃起功能的藥物，提高高血壓病人的生活質(zhì)量，逐漸成為近些年來(lái)高血壓藥物研究的新關(guān)注點(diǎn)。

廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管科是國(guó)家臨床重點(diǎn)專(zhuān)科。近年來(lái)一直采用中醫(yī)中藥辨證治療高血壓，臨床實(shí)踐顯示中醫(yī)藥的療效確切，而且安全性高。補(bǔ)清結(jié)合法中成藥補(bǔ)腎益心片是陳宏珪教授經(jīng)驗(yàn)方。該藥物主要由淫羊藿和車(chē)前子組成，淫羊藿的藥性偏溫，具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)之功；車(chē)前子的藥性偏涼，具有清肝利水之力。兩者配伍，一溫一涼、一補(bǔ)一清，具有補(bǔ)腎清肝、補(bǔ)清結(jié)合法的功效。補(bǔ)腎益心方針對(duì)臨床上常見(jiàn)的男性高血壓勃起功能障礙療效良好，對(duì)降血壓藥物所引起勃起功能障礙有較理想的治療效果，并且對(duì)輕中度高血壓也具有明確的降壓作用。補(bǔ)腎益心片的降壓機(jī)制可能與其促進(jìn)NO合成和分泌、車(chē)前子所具有的明確利尿作用等密切有關(guān)[5- 9]。為探索補(bǔ)清結(jié)合法中成藥補(bǔ)腎益心片對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的降血壓作用和其改善雄性SHR大鼠勃起功能的作用，課題組設(shè)計(jì)了下列實(shí)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 選擇8周齡的SPF級(jí)雄性SHR大鼠16只，體重160 g～190 g，均購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)為 SCXK(京)2012—0001。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)選在廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)單位使用許可證號(hào)：SYXK(粵)2013—0092。正式實(shí)驗(yàn)前，先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 藥品、試劑和儀器 補(bǔ)腎益心片購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中成藥房，成藥每1片相當(dāng)于原生藥約5 g，該藥是我院我科的特色院內(nèi)制劑，藥品批準(zhǔn)文號(hào)：粵藥制字 Z20070847。陽(yáng)性對(duì)照藥采用纈沙坦膠囊(商品名：代文，北京諾華制藥有限公司，每粒80 mg，國(guó)藥準(zhǔn)字H20040216)。阿撲嗎啡(APO)25 mg購(gòu)自廣州外顯子生物技術(shù)有限公司。Rat Ang(1- 7) ELISA Kit試劑盒(批號(hào)BPE36118)由上海浩本生物科技有限公司分裝。主要設(shè)備和儀器包括：上海佑科儀器儀表有限公司的VIS- 721型可見(jiàn)光分光光度計(jì)；上海奧爾科特公司的ALC- NIBP大鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀系統(tǒng)；長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司的TG- 16W型臺(tái)式離心機(jī)；美國(guó)伯樂(lè)BIO- RAD公司的iMARK酶標(biāo)儀等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 各組大鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，稱(chēng)凈重，并在藥物干預(yù)前先進(jìn)行尾動(dòng)脈測(cè)壓，經(jīng)測(cè)量證實(shí)均為原發(fā)性高血壓大鼠再進(jìn)入正式實(shí)驗(yàn)。

1.3.1 分組及給藥 將SHR大鼠按隨機(jī)數(shù)字表分為3組。A組為補(bǔ)腎益心片組，B組為纈沙坦組，C組為模型對(duì)照組。 各組分別予以相應(yīng)處理，A組即補(bǔ)腎益心片(中藥復(fù)方)組，共5只，先將5片補(bǔ)腎益心片溶于生理鹽水25 mL中，按照25 g/ kg (約成人用量的20倍)予以灌胃，每天1次，持續(xù)4周。B組即纈沙坦組：共5只，先將纈沙坦膠囊80 mg每粒，溶于生理鹽水28 mL中，按照4 mg/kg (約成人用量的20倍)予以灌胃，每天1次，持續(xù)4周。C組即模型對(duì)照組(SHR大鼠)，共6只，常規(guī)飼養(yǎng)，予生理鹽水灌胃，每只予以灌胃2 mL，每天1次，持續(xù)4周。藥物干預(yù)前及干預(yù)4周后，分別測(cè)量無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈壓，并記錄大鼠血壓變化。用大鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀測(cè)定大鼠清醒狀態(tài)下的尾動(dòng)脈血壓。夾尾法測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)方法：將大鼠置于儀器配套的固定約束籠中，置于30℃恒溫箱中預(yù)熱15 min，待大鼠完全安靜后，將鼠尾套袖帶放置于鼠尾的根部進(jìn)行測(cè)量，數(shù)值穩(wěn)定后，出現(xiàn)的第一個(gè)血壓波值即為收縮壓。

1.3.2 大鼠性活動(dòng)(勃起功能)觀察 勃起功能測(cè)定方法采用Heaton方法進(jìn)行。小劑量頸部皮下注射100 μg/kg阿樸嗎啡(APO)即可引起正常大鼠100%的陰莖勃起。在本實(shí)驗(yàn)中，將每只SHR大鼠在注射適量的APO后觀察30 min，陰莖頭充血及末端陰莖體露出為勃起1次，記錄每只大鼠陰莖勃起次數(shù)和每組大鼠的勃起率數(shù)據(jù)，并用陰莖勃起次數(shù)作為評(píng)價(jià)大鼠性活動(dòng)功能的主要指標(biāo)。

1.3.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)取材 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，采用10%的水合氯醛腹腔注射麻醉SHR大鼠，局部消毒后再剪下大鼠陰莖，置于干凈離心管中，放置在-20℃條件下保存。采用BCA蛋白定量法分別測(cè)定大鼠陰莖海綿體組織一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)的含量；采用ELISA法檢測(cè)Ang(1- 7)的含量。

2 結(jié) 果

2.1 藥物干預(yù)后對(duì)SHR大鼠性活動(dòng)(勃起功能)的影響 治療前各組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，補(bǔ)腎益心片組和纈沙坦組勃起次數(shù)均明顯增多，與模型對(duì)照組比較，兩組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。治療后，補(bǔ)腎益心片組、纈沙坦組兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示補(bǔ)腎益心片和纈沙坦均具有確切的改善SHR勃起功能的作用。詳見(jiàn)表1。

表1 各組勃起次數(shù)比較(±s) 次

2.2 藥物干預(yù)后對(duì)一氧化氮合酶的影響 補(bǔ)腎益心片組、纈沙坦組陰莖海綿體的NOS數(shù)值均有明顯升高，與模型對(duì)照組進(jìn)行比較，兩組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；補(bǔ)腎益心片組與纈沙坦組兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 各組一氧化氮合酶比較(±s)

2.3 藥物干預(yù)后對(duì)一氧化氮的影響 補(bǔ)腎益心片組、纈沙坦組陰莖海綿體的NO數(shù)值均有明顯升高，與SHR模型對(duì)照組比較，兩組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示補(bǔ)腎益心片、纈沙坦均具有降壓作用。治療后補(bǔ)腎益心片組與纈沙坦組，兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 各組藥物干預(yù)后對(duì)一氧化氮的影響(±s)

2.4 干預(yù)后對(duì)Ang(1- 7)的影響 補(bǔ)腎益心片組、纈沙坦組與SHR模型對(duì)照組各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；補(bǔ)腎益心片組與纈沙坦組之間兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表4。

表4 各組干預(yù)后對(duì)Ang(1- 7)的影響(±s)

3 討 論

高血壓病根據(jù)其臨床特點(diǎn)屬于祖國(guó)醫(yī)學(xué)眩暈、頭痛等范疇，多數(shù)醫(yī)家從肝腎論證?，F(xiàn)代社會(huì)的人群，經(jīng)常進(jìn)食過(guò)多肥膩之品，內(nèi)傷脾胃，繼而熱盛傷陰，再加上睡眠時(shí)間不足，更易傷陰，易于發(fā)展成肝腎虧虛證型。勃起功能障礙屬于祖國(guó)醫(yī)學(xué)陽(yáng)痿、早泄等范疇，歷代醫(yī)家亦多從肝腎論證。肝主疏泄而藏血，肝主筋；腎主水液而藏精，腎主骨，且為先天之本?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)也逐漸認(rèn)識(shí)到，心血管疾病與ED有時(shí)常常并存，二者存在著一些共同的致病因素和發(fā)病機(jī)制，在治療上常常關(guān)系密切。目前在臨床上治療ED的西地那非最早研發(fā)時(shí)就是用來(lái)治療心血管疾病的。

SHR大鼠是高血壓實(shí)驗(yàn)研究中最常用的模型，SHR在疾病發(fā)展階段也形成典型的高血壓心血管病變[10]。原發(fā)性高血壓大鼠情緒比較緊張，小便量少偏黃，大便偏干且顆粒小，突眼較明顯，心率較快，痛覺(jué)較敏感等，綜合SHR的這些行為特征和體征，通過(guò)臨床觀察發(fā)現(xiàn)，高血壓病人多表現(xiàn)出頭痛眩暈、面紅目赤、煩躁易怒、大便偏干、小便短赤等特征；可以初步判定SHR大鼠模型的早期高血壓癥狀與傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)中肝腎虧虛、肝火亢盛型高血壓病人的病例特征十分類(lèi)似[11]。而大鼠交配實(shí)驗(yàn)和勃起功能觀察在科學(xué)研究中，也是被廣泛地運(yùn)用于雄性大鼠的性行為評(píng)價(jià)和機(jī)制研究，是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性功能的重要觀察指標(biāo)[12]。高血壓可以引起勃起功能障礙，高血壓損害了SHR大鼠的性欲和性喚醒能力，這在臨床實(shí)踐和動(dòng)物模型中都得到了證實(shí)。既往有實(shí)驗(yàn)研究表明，一氧化氮可導(dǎo)致陰莖海綿體血管平滑肌舒張，血管管徑增加，動(dòng)脈血流加速，靜脈血液回流也有一定增加[13- 14]，高血壓大鼠陰莖海綿體中NO、NOS的含量較正常大鼠是偏低的[13- 15]，其陰莖海綿體組織之內(nèi)的NOS降低可能是SHR勃起功能下降，從而發(fā)生ED的機(jī)制之一，NO，NOS是治療高血壓性ED的靶點(diǎn)之一。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)治療后，SHR大鼠陰莖海綿體組織中的NO、NOS含量得到一定程度的升高，纈沙坦組及補(bǔ)腎益心片組與模型對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示經(jīng)過(guò)補(bǔ)腎益心片或纈沙坦等藥物治療后通過(guò)升高陰莖海綿體組織中的NO，NOS含量來(lái)發(fā)揮藥物的治療作用。補(bǔ)腎益心片組與纈沙坦組之間兩兩比較NO含量也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。補(bǔ)腎益心片與纈沙坦均可提高陰莖海綿體中Ang(1- 7)含量，均優(yōu)于模型對(duì)照組；但補(bǔ)腎益心片組與纈沙坦組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究探討了從ACE2- Ang(1- 7)- MAS軸的角度研究補(bǔ)腎益心片對(duì)高血壓大鼠的影響。研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎益心片與血管緊張素受體Ⅱ拮抗劑類(lèi)藥物有類(lèi)似功效，對(duì)大鼠陰莖海綿體中的NO，NOS，Ang(1- 7)等指標(biāo)具有明顯的升高效應(yīng)，并可以改善SHR大鼠的勃起功能，對(duì)于改善抗高血壓藥物使用的依從性和改善生活質(zhì)量具有積極意義。

本研究結(jié)果有助于闡明補(bǔ)清結(jié)合法中成藥補(bǔ)腎益氣片降血壓的微觀機(jī)制，補(bǔ)腎益心片改善高血壓性ED的作用機(jī)制，改善降血壓西藥本身所引起ED的可能機(jī)制，為進(jìn)一步研制具有明確降壓作用和保護(hù)心、腦、腎等靶器官作用的中成藥奠定了基礎(chǔ)。

[1] 王東偉，史桂霞.高血壓及抗高血壓藥物對(duì)勃起功能的影響與研究進(jìn)展[J].心血管病學(xué)進(jìn)展，2006，27(5)：592- 595.

[2] 吳萬(wàn)里，朱繼金.高血壓病人勃起功能障礙危險(xiǎn)因素的相關(guān)分析[J].中華男科學(xué)雜志，2008，14(1)：83.

[3] Ferrario CM，Levy P.Sexual dysfunction in patients with hypertension implications for therapy[J] .J Clin Hypertension Greenwich，2002，4(3)：424- 432.

[4] 程建利，胡禮泉.抗高血壓藥物對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠勃起功能和nNOS神經(jīng)纖維的影響[J].中華男科學(xué)雜志，2003，9(2)：115- 117.

[5] 吳偉，陳宏珪，黃衍壽.補(bǔ)腎益心片治療高血壓病及改善左室舒張功能的臨床研究[J].新中醫(yī)，1998，30(7)：11- 14.

[6] 劉煜德，吳偉，陳宏珪.補(bǔ)腎益心片對(duì)腎性高血壓大鼠血漿過(guò)氧化脂質(zhì)及性激素的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2001，12(6)：426- 428.

[7] 吳偉，劉煜德，陳宏珪.補(bǔ)腎益心片對(duì)腎血管性高血壓大鼠的降壓作用及保護(hù)靶器官的研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，18(1)：63- 66.

[8] 王士超，劉煜德，王嵩，等.中藥復(fù)方補(bǔ)腎益心片對(duì)高血壓大鼠血壓、勃起功能及ACE2- Ang(1- 7)- MAS軸的干預(yù)作用[J].中國(guó)中醫(yī)急癥，2015，24(2)：204- 206.

[9] 王士超，劉煜德，劉芳，等.從ACE2- Ang(1- 7)- MAS軸及中醫(yī)學(xué)探討高血壓性ED的機(jī)制[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013(3)：597- 599.

[10] 姚一康，楊偉敏，嚴(yán)國(guó)鋒，等.SHR大鼠病理特性測(cè)定研究[J].上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2003，23(2)：75- 78.

[11] 屈會(huì)化，趙琰，曲榮波，等.自發(fā)性高血壓大鼠早期中醫(yī)證候的研究[J].中醫(yī)雜志，2008，49(5)：446- 448.

[12] Steger RW，Amador A，Lam E，et al.Stre ptozotoein- induced deficits in sex behavior and neuroendoerine function in male rats[J].Endoerinology，1989，124(6)：1737- 1743.

[13] 傅強(qiáng)，姚德鴻，蔣躍慶，等.一氧化氮對(duì)陰莖海綿體血流動(dòng)力學(xué)的影響[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，1998(4)：328- 330.

[14] 張銀高，胡禮泉.陰莖勃起機(jī)制的新觀點(diǎn)——一氧化氮在陰莖勃起中的作用[J].湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，1997(1)：45- 48.

[15] 劉云飛，陳實(shí)新，邢金春，等.自發(fā)性高血壓大鼠陰莖海綿體組織內(nèi)皮型一氧化氮合酶的表達(dá)及意義[J].中國(guó)男科學(xué)雜志，2007，21(9)：4- 7.