提取時間、次數(shù)、溶劑濃度對槲蕨超聲波黃酮含量提取的影響

韓風(fēng)波 宮敬利 畢博

【摘 ?要】 本試驗選取提取時間、提取次數(shù)、提取溶劑3個因素進行槲蕨超聲波黃酮含量提取試驗研究，結(jié)果表明：提取時間20min、提取次數(shù)1次、提取溶劑濃度為65%乙醇時，槲蕨超聲波提取黃酮含量最高，希望能為槲蕨整個黃酮提取工藝奠定基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】 黃酮;槲蕨;超聲波提取

Effect of extraction time， times and solvent concentration on extraction of flavonoids from quercetin by ultrasonic wave

Hang Fengbo ?Gong Jingli ?Bi Bo

[Abstract] The test selection of extraction time， extraction times and three factors of extraction solvent for it fern， experimental study on ultrasound extraction flavonoids content results showed that 20 min extraction time， extraction times 1 time， concentration of extraction solvent was 65% ethanol， it fern ultrasonic extracting flavonoids content is the highest， hope it can fern the flavonoids extraction technology to lay the foundation.

[Keywords] flavonoids; the antioxidant ferns; ultrasonic extraction

槲蕨，為骨碎補科中的一種附生植物，拉丁學(xué)名：Drynaria roosii Nakaike，又稱骨碎補、毛姜、猴姜、申姜、爬巖姜、石巖姜等。該植物主產(chǎn)于遼寧（大連）、山東（嶗山、昆箭山、牟平、招遠、威海）、江蘇（海州）及臺灣等地，其活性成分為以柚皮苷為主的二氫黃酮類化合物。槲蕨是一種重要的藥用植物，功能主治補腎、活血、止血，治腎虛久瀉及腰痛，風(fēng)濕痹痛，齒痛，耳鳴，跌打閃挫、骨傷，闌尾炎，也可治斑禿和雞眼等[1]。本試驗以槲蕨黃酮含量為指標(biāo)，通過研究超聲提取時間、提取次數(shù)、提取溶劑濃度對槲蕨黃酮含量的影響，以優(yōu)化槲蕨中黃酮提取最佳的提取工藝，為生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗材料

槲蕨采集于吉林市左家自然保護區(qū);無水乙醇（分析純）、蒸餾水、5%亞硝酸鈉、10%硝酸鋁、4%氫氧化鈉、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品等藥品由中國藥品生物制品檢定所提供;試驗儀器有：752 紫外-可見分光光度計（上海奧普勒儀器有限公司）、JY2002電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）、F80型高速粉碎機（金壇市金城國勝實驗儀器廠）、電子分析天平（CP114 奧豪斯儀器有限公司上海）、THC-5B型數(shù)控超聲提取機（濟寧天華超聲電子儀器有限公司），均由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥實驗室提供。

1.2 ?試驗方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 ?取蘆丁20.00mg，定容到100mL容量瓶中，配置0.2mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，取10mL容量瓶6支，依次稱取0、1、2、3、4、5mL標(biāo)準(zhǔn)液，5、4、3、2、1、0mL 50%乙醇加入，依照黃酮含量，在490nm測定吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[2-3]。

1.2.2提取時間對黃銅含量的影響 ?精密稱取槲蕨粉末1.00g，提取溶劑濃度為65%，料液比分別為1：30，提取溫度40℃，超聲功率400W，提取1次，分別超聲提取5、10、20、30、40、50min，3次重復(fù)，制備成供試品溶液，測定其吸光度，考察超聲時間對槲蕨黃酮含量的影響，確定最佳的超聲時間[4]。

1.2.3提取次數(shù)對黃酮含量的影響 ?精密稱取槲蕨粉末1.00g，提取溶劑濃度、料液比、提取溫度、超聲功率按照1.2.2設(shè)置，提取時間20min，分別提取1次、2次、3次、4次，3次重復(fù)，制備成供試品溶液，測定其吸光度，考察超聲次數(shù)對槲蕨黃酮含量的影響，確定最佳的提取次數(shù)[5]。

1.2.4提取溶劑對黃酮含量的影響 ?精密稱取槲蕨粉末1.00g，提取溶劑濃度、料液比、提取溫度、超聲功率、提取時間按照1.2.2設(shè)置，提取1次，提取溶劑濃度設(shè)45%、55%、65%、75%、85%、100%的乙醇共6個水平，3次重復(fù)，制備成供試品溶液，測定其吸光度，考察提取溶劑濃度對槲蕨黃酮含量的影響，確定最佳的提取溶劑濃度。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

由標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)計算出一元線性回歸方程為：y =10.89x+0.0459，相關(guān)系數(shù)R2=0.9998，表明對照品槲蕨黃酮含量在21～105ug/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖1。

2.2 ?提取時間對黃酮含量的影響

見圖2。

圖2表明：提取時間比對黃酮含量有一定的影響，提取時間20min以前，隨著提取時間增加黃酮含量呈遞增趨勢，但提取時間達到20min以后，黃酮含量呈遞減趨勢，為了確定差異顯著性，進行方差分析，結(jié)果見表1。

2.3 ?提取次數(shù)對黃酮含量的影響

見圖3。

圖3表明：提取次數(shù)對黃酮含量有一定的影響，隨著提取次數(shù)增加黃酮含量呈遞增趨勢，但遞增趨勢趨于緩和，為了確定差異顯著性，進行方差分析，結(jié)果見表2。

2.4 ?提取溶劑濃度對黃酮含量影響

見圖4。

圖4表明：提取溶劑濃度比對黃酮含量有一定的影響，隨著提取溶劑濃度增加黃酮含量呈遞增趨勢，但提取溶劑濃度達到65%以后，呈遞減趨勢，為了確定差異顯著性，進行方差分析，結(jié)果見表3。

3 ?結(jié)論與討論

本試驗選取提取時間、提取次數(shù)、提取溶劑3個單因素考查槲蕨黃酮成分超聲提取工藝，并進行方差分析，篩選出3個單因素各自的最佳水平。結(jié)果表明：3個因素中，溶劑濃度對黃酮提取影響存在顯著性差異，結(jié)合3個因素不同水平綜合平均值比較，確定最佳生產(chǎn)方案是提取時間20min、提取次數(shù)1次，提取溶劑濃度為65%乙醇。由于時間關(guān)系，該試驗僅針對3種因素進行了比較，結(jié)果可作為正交試驗的一個借鑒，希望能為槲蕨黃酮制備成其它的劑型奠定基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].2015年 ? ? ? ? 版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：78.

[2] 劉塔斯.槲蕨[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2014：82.

[3] 周 曄，高 翔.槲蕨的研究與開發(fā)利用[J].中國現(xiàn)代中藥， ? ? ? ? ? ? 2010，04.33-37.

[4] 晏春耕，曹瑞芳.槲蕨的研究進展與開發(fā)利用[J].中國現(xiàn)代 ? ? ? ?中藥，2013，04：33-37.

[5] 路洪順，劉鑫軍，劉建敏.槲蕨的開發(fā)利用價值與栽培技術(shù) ? ? ? ?[J].中藥林副產(chǎn)，2012，08：? ? 16-17.