水田改果園后土壤微生物學(xué)特性演變*

楊東偉 章明奎 張鵬啟 楊永德

（1 浙江大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院，杭州 310058）

（2 河南師范大學(xué)旅游學(xué)院，河南新鄉(xiāng) 453007）

（3 廣西大學(xué)商學(xué)院，南寧 530004）

土壤是一種包含多種生境和環(huán)境條件的生態(tài)系統(tǒng)［1］，在全球環(huán)境變化過程中具有重要作用［2］。近20年，隨著我國產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整以及農(nóng)戶追求經(jīng)濟利益最大化等因素的影響，我國南方地區(qū)大面積的水田改為果園等經(jīng)濟林。水田改旱作后土壤的理化性質(zhì)、土壤肥力、土壤微生物發(fā)生改變［3］，并導(dǎo)致土壤板結(jié)［4-6］、土地退化［7-8］。土壤微生物是土壤功能的重要組成部分［9-10］，其在分解土壤動植物殘體、促進養(yǎng)分生物地球化學(xué)循環(huán)、改善生態(tài)環(huán)境等方面發(fā)揮著重要作用［9，11-15］。土壤微生物多樣性是反映土壤健康和質(zhì)量的一個重要指標(biāo)［5-6，16］，能夠影響生態(tài)系統(tǒng)的生產(chǎn)力、穩(wěn)定性，反映生態(tài)系統(tǒng)的環(huán)境壓力［1］。有研究表明，土地利用方式變化后，隨著土壤微生物生境的變化，土壤微生物多樣性隨之發(fā)生改變［17-19］。

一些學(xué)者對土地利用方式變化后土壤理化性質(zhì)和基本微生物性質(zhì)進行了研究［9，20-22］。然而，很少有學(xué)者關(guān)注由厭氧環(huán)境占優(yōu)勢的水田轉(zhuǎn)變?yōu)楹醚醐h(huán)境為主的果園后，土壤微生物學(xué)性質(zhì)特別是微生物遺傳多樣性和群落結(jié)構(gòu)的變化。本研究著重分析了水田改果園后，不同利用年限土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性等微生物學(xué)性質(zhì)的變化，并探討了土壤微生物學(xué)性質(zhì)對土地利用方式轉(zhuǎn)變的響應(yīng)規(guī)律，希望利用土壤微生物的預(yù)警作用來監(jiān)測土壤生態(tài)環(huán)境的變化，為土壤生態(tài)功能維護和實現(xiàn)土壤可持續(xù)利用提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)域概況

研究區(qū)位于浙江省嘉興市南湖區(qū)大橋鎮(zhèn)江南村，地理坐標(biāo)位于30°44′47″N ～30°45′4″N 和120°51′44″E～120°52′10″E之間，地處杭嘉湖平原，隸屬于浙北平原區(qū)，屬于中北亞熱帶季風(fēng)氣候過渡帶，多年平均降水量在1 200～2 000 mm之間，年均氣溫在15.0～17.7℃。土壤成土母質(zhì)為湖沼相沉積物，土體深度1 m以上，海拔平均為3.0～3.5 m［23］。

1.2 土壤樣品采集

水田改果園系列土壤樣品采集于2012年10月中旬，共采集18個耕層土壤樣品（對應(yīng)18個田塊），采集的果園土壤在利用方式轉(zhuǎn)變前均為水田。根據(jù)不同土地利用方式和利用年限農(nóng)地的分布及數(shù)量，確定該類型農(nóng)地中土壤樣品的采集數(shù)量（由于水田、種植葡萄樹13 a和15 a的田塊分布較廣，因而在該類型農(nóng)地中采集的土壤樣品較多），共采集水田樣本4個，果園土壤樣本14個（表1）。依據(jù)第二次土壤普查資料，供試土壤在發(fā)生分類中屬于水稻土土類，脫潛型水稻土亞類，青紫泥田土屬，腐心青紫泥田土種［23］。

水田耕層土壤樣品采集時，水稻接近收獲期，田面落干。每個耕層土壤樣品（0～15 cm）由5個以上采樣點混合而成，混勻分成四份，取一份原狀土壤沿自然結(jié)構(gòu)面掰開，自然風(fēng)干，測定土壤水穩(wěn)定性團聚體；第二份自然風(fēng)干后，分別過2 mm、1 mm和0.15 mm孔徑篩，測定土壤理化性質(zhì)。另外兩份置于放有冰塊塑料袋中帶回實驗室，一份放入4℃冰箱，一周內(nèi)完成土壤微生物生物量碳和氮的測定；另一份土樣冷凍干燥后，放-80℃冰箱保存，用于提取土壤微生物DNA和測定土壤微生物磷脂脂肪酸。

供試水田與果園位置相鄰，而兩種土地利用方式在管理上存在一定差異，果園土壤較水田施肥量大，灌溉量?。煌焕梅绞降霓r(nóng)地灌溉、施肥等管理方式相似。土壤樣品相關(guān)信息詳見表1，具體施肥量信息詳見表2。

1.3 研究方法

自然含水量、土壤顏色、＞0.25 mm水穩(wěn)性團聚體、pH、土壤顆粒組成、有機質(zhì)、全氮、堿解氮、全磷、有效磷、全鉀、速效鉀等指標(biāo)的測定步驟和方法詳見文獻［24-25］。土壤微生物生物量碳氮采用氯仿熏蒸—K2SO4浸提法。微生物遺傳多樣性測定過程如下：提取凍干土壤中細菌的總DNA，擴增后，取PCR 產(chǎn)物上樣做變性梯度凝膠電泳（Denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE），從DGGE膠上切下電泳條帶，染色后用凝膠成像系統(tǒng)（GelDoc XR+，Bio-Rad，美國）拍照。土壤微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性測定參照微生物鑒定系統(tǒng)（Version 4.5，MIDI Sherlock，美國），對土壤微生物磷脂脂肪酸（Phospholipid fatty acid，PLFA）各成分脂肪酸進行鑒定，生成磷脂脂肪酸圖譜［26］。

表1 土壤樣品信息Table 1 General information of the soil samples

表2 水田和果園土壤施肥量Table 2 Fertilization rates in the paddy field and orchard

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Excel 2003軟件處理數(shù)據(jù)，Origin 8.0制圖。使用SPSS 17.0 軟件進行差異顯著性分析，采用最小顯著差異（Least significant deviation，LSD）法；相關(guān)性分析采用皮爾森（Pearson）法。采用香農(nóng)-威那（Shannon-Wiener，SW）多樣性指數(shù)表征不同土壤樣品中微生物的多樣性指數(shù)，公式如下：

式中，Pi為某群落中第i個類型的物種占總物種的百分比。

2 結(jié)果與討論

2.1 水田和果園土壤理化性質(zhì)

本研究中水田改果園系列耕層土壤為壤黏土（國際制土壤質(zhì)地分類），耕層土壤中黏粒含量在299～325 g kg-1之間，表明供試土壤質(zhì)地非常相似。供試水田中自然含水量、pH、＞0.25 mm水穩(wěn)性團聚體、有機質(zhì)、全氮、堿解氮含量整體上高于果園土壤，而全磷、有效磷、全鉀、速效鉀含量整體上低于果園土壤（表3）。這與水田改果園后人為滯水水分狀況消失、土壤透氣性改善、土壤有機質(zhì)礦化速度加快、氯化鉀和過磷酸鈣等酸性化肥施用量增加等因素有關(guān)。

2.2 水田改果園后土壤微生物生物量碳氮和微生物商的變化

水田耕層土壤微生物生物量碳（Microbial biomass carbon，MBC）平均含量為815.2 mg kg-1，改果園后土壤MBC平均含量降低至455.3 mg kg-1，降幅達44.1%，且其含量與果園年齡呈極顯著負相關(guān)（圖 1）。水田耕層土壤微生物生物量氮（Microbial biomass nitrogen，MBN）平均含量為35.65 mg kg-1，改果園后土壤MBN平含均量降低至14.30 mg kg-1，降幅達59.9%，且其含量與果園年齡呈極顯著負相關(guān)（圖1）。有研究［27］表明水田改為菜地后土壤MBC、MBN下降40%以上，這與本研究的結(jié)論相似。另有研究［28］表明洞庭湖區(qū)水田MBC、MBN明顯高于油菜地等旱地土壤。

相關(guān)分析表明，耕層土壤MBC與土壤pH、自然含水量呈顯著（p＜0.05）或極顯著（p＜0.01）正相關(guān)（表4），但與土壤有機質(zhì)、全氮等的相關(guān)性未達到顯著水平（p＞0.05）（表4），這與研究區(qū)水田改果園后，施入大量蓖麻餅等有機物料而較難為土壤生物所利用有關(guān)，這也表明施用有機肥時應(yīng)考慮生物有效性問題。耕層土壤MBN與土壤pH、有機質(zhì)、堿解氮、自然含水量和全氮含量呈顯著（p＜0.05）或極顯著（p＜0.01）正相關(guān)（表4）。耕層土壤MBC和MBN與土壤全磷、有效磷、全鉀、速效鉀均呈極顯著負相關(guān)（p＜0.01）（表4）。由于養(yǎng)分失衡等原因，雖然改果園后土壤磷素和鉀素含量增加，而MBC和MBN依然下降。此外，水田改果園后土壤微生物生物量下降還有以下原因：一方面，稻田土壤為微生物提供了相對充足的有機碳源、氮源和水分等主要營養(yǎng)物質(zhì)，使得稻田土壤微生物生長旺盛，土壤微生物生物量相對較高；另一方面，水田改果園后土壤酸化，抑制了土壤微生物活性，特別是占土壤微生物多數(shù)的細菌活性。

Sparling［29］研究表明，如果土壤被過度使用，土壤微生物生物量碳庫將會以較快的速率下降，最終造成微生物商（微生物生物量碳與總有機碳的比值，Microbial biomass carbon/ total organic carbon，MBC/TOC）降低。水田耕層土壤微生物商隨著改果園年限的延長而下降，并與改果園年限呈極顯著負相關(guān)（p＜ 0.01）（圖2），表明本研究中水田改果園后土壤存在過度使用、土壤退化等問題，影響了土壤的可持續(xù)發(fā)展，同時說明，水田在積累有機碳的同時，也有利于土壤微生物生物量的提高，這與沈冰潔等［30］的結(jié)論一致。

表3 水田和果園耕層土壤理化性質(zhì)Table 3 Physiochemical properties of the soils in the cultivated layers of the paddy fields and orchards

圖1 土壤微生物生物量碳氮與果園年齡之間的相關(guān)性Fig. 1 Correlation coefficient of soil microbial biomass carbon and nitrogen with age of orchard

表4 土壤理化性質(zhì)與土壤微生物生物量相關(guān)性（n=18）Table 4 Correlation coefficient of soil microbial biomass with soil physicochemical properties（n=18）

圖2 土壤微生物商與果園年齡之間的相關(guān)性Fig. 2 Correlation coefficient of ratios of microbial biomass carbon to total organic carbon with age of orchard

2.3 水田改果園后土壤微生物基因多樣性的變化

對土壤總細菌16S rDNA基因片段的DGGE圖譜（圖3）分析表明，不同含量的細菌在圖譜上形成明暗不同的條帶，條帶類型和相對亮度表明土壤細菌的種類和相對豐度，各泳道差異表征各樣品細菌多樣性差異及樣品之間親緣關(guān)系。如圖3所示，代表水田樣本的泳道（S1～S4）中條帶相對于果園土壤的泳道（S5～S18）復(fù)雜，且條帶較深，這表明水田土壤中微生物種類更加豐富，且含量較高；這與水田土壤中含有較高的水分、有機碳源和氮源等營養(yǎng)物質(zhì)且氧化還原環(huán)境較復(fù)雜有關(guān)。圖3中，代表水田土壤樣本的泳道（S1～S4）中條帶比較相似，而代表果園土壤的泳道（S5～S18）中條帶較相似，表明同一土地利用方式土壤微生物基因多樣性相似度較高。

對耕層土壤細菌DGGE指紋圖譜（圖3）進行聚類分析，結(jié)果顯示，耕層土壤樣品被分為兩簇，一簇屬于水田土壤，另一簇為果園土壤；而果園土壤又可以分為兩簇，分別為短期果園土壤和長期果園土壤（圖4）。水田改果園后，水田和果園土壤之間細菌的基因多樣性存在較大差異，水田和果園土壤的相似度為0.46，而短期果園和長期果園土壤中細菌基因條帶之間的相似度為0.56（圖4）。以上結(jié)果表明，土壤細菌的基因多樣性發(fā)生了階段性變化，水田和果園之間的差異性，要大于短期果園土壤與長期果園土壤之間的差異性（圖4），土地利用方式變化（水田改果園）要大于利用年限對土壤細菌基因多樣性的影響，這與Xue等［19］關(guān)于利用方式和利用年限對微生物群落結(jié)構(gòu)影響的結(jié)論一致。

通過對圖3進行多樣性分析，發(fā)現(xiàn)不同樣品的香農(nóng)-威那多樣性指數(shù)存在一定的差異性。整體表現(xiàn)為，水田土壤（S1～S4）中細菌的香農(nóng)-威那多樣性指數(shù)高于果園土壤（S5～S18）（表5）。表明水田改果園后，由于土壤水分、有機質(zhì)和氮素等營養(yǎng)物質(zhì)減少，氧化還原狀況趨于穩(wěn)定，導(dǎo)致耕層土壤中細菌多樣性降低。

2.4 水田改果園后土壤微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性的變化

圖3 水田和果園土壤總細菌變性梯度凝膠電泳指紋圖譜Fig. 3 Denaturing gradient gel electrophoresis（DGGE）banding patterns of 16S rDNA gene fragments of soil bacteria in the paddy and orchard soils

圖4 水田和果園土壤總細菌變性梯度凝膠電泳指紋圖譜的聚類分析Fig. 4 Cluster analysis of the figureprints in the DGGE profiles of the soil bacteria in the paddy and orchard soils

表5 水田和果園耕層土壤總細菌的香農(nóng)-威那多樣性指數(shù)Table 5 Shannon-Wiener indexes of soil total bacteria in the cultivated soil layer of the paddy fields and orchards

磷脂脂肪酸（PLFA）存在于所有活體細胞膜中，常被作為土壤微生物群落的生物標(biāo)記［31-32］。本研究中，隨著水田改果園年限的延長，耕層土壤微生物主要營養(yǎng)物質(zhì)（水分、碳源和氮源）下降，在水田中土壤微生物總PLFAs平均含量為145.0 nmol，在果園土壤中其平均含量降低至60.79 nmol，降幅達58.1%；土壤微生物總PLFAs含量與微生物生物量碳呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r= 0.74**（n= 18）。在水田土壤樣品中平均檢測到54種PLFAs，果園土壤樣品中平均檢測到46種PLFAs，表明水田改果園后土壤微生物PLFAs種類減少。水田改果園后，受土壤通氣性增強等因素的影響，耕層土壤中真菌和放線菌在土壤微生物中所占比例增加，細菌和原生動物在土壤微生物中所占比例變化不明顯（圖 5）。改果園后，革蘭氏陰性細菌/革蘭氏陽性細菌（Gram negative bacteria/Gram positive bacteria，Gm-/Gm+）顯著降低（圖6a）；由于土壤通氣性增強等因素的影響，耕層土壤中好氧細菌/厭氧細菌（Aerobic bacteria/Anaerobic bacteria，Aerobic/Anaerobic）顯著增加（圖 6b），并與改果園年限呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r= 0.53*（n= 18）。

圖5 水田和果園土壤中主要微生物類群相對含量Fig. 5 Relative abundance of microbial speci fic groups in paddy and orchard soils

有研究表明，用異式脂肪酸（Iso fatty acids，Iso）與反異支鏈脂肪酸（Anteiso fatty acids，Anteiso）的比值可以表征養(yǎng)分脅迫［32］。本研究表明，水田改果園后，耕層土壤表征養(yǎng)分脅迫的Iso /Anteiso顯著增加（圖6c），并與改果園年限呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r= 0.63**（n= 18）。在饑餓壓力下，革蘭氏陰性菌會將某些單烯PLFA轉(zhuǎn)化為環(huán)丙基脂肪酸，因此，環(huán)丙基脂肪酸和前體物的比值（cyclo fatty acids/ precurso fatty acids，Cy/Pre）也可用來指示微生物所處的壓力狀態(tài)［33-34］。改果園后，表征養(yǎng)分脅迫的Cyc/Pre顯著增強（圖6d），并與改果園年限呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r= 0.61**（n= 18）。以上結(jié)果表明，水田改果園后，耕層土壤微生物的養(yǎng)分脅迫增強，引起土壤微生物數(shù)量減少，這主要與改果園后自然含水量及碳氮元素含量的降低及氮、磷、鉀等營養(yǎng)元素的不均衡有關(guān)。

如圖7所示，由于土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的差異，水田樣本及其最適物種分別集中在α（陰影區(qū)）和A區(qū)域內(nèi)，短期果園土壤樣本及其最適物種分別集中在β（陰影區(qū)）和B區(qū)域內(nèi)，長期果園土壤樣本及其最適物種分別集中在γ（陰影區(qū)）和C區(qū)域內(nèi)。依據(jù)土壤樣本在冗余分析排序圖中聚集的結(jié)果可將果園土壤分為短期果園土壤（S5～S11，≤13 a）和長期果園土壤（S12～S18，＞ 13 a）兩個階段，該分組結(jié)果與DGGE指紋條帶的聚類分析結(jié)果一致（圖4）。圖7所示，＞ 0.25 mm水穩(wěn)性團聚體和水分含量兩種環(huán)境因子沿水田樣本聚集方向（α區(qū)域）增加最明顯，說明它們與水田微生物群落關(guān)系最密切，即在A區(qū)域出現(xiàn)的土壤微生物對水分依賴性較強。有機質(zhì)和氮素延伸方向位于α和γ區(qū)域之間，表明A和C區(qū)域土壤微生物對有機質(zhì)和氮素依賴性較強，這與水田中有機質(zhì)和氮素含量較高及長期果園土壤施用大量蓖麻餅有一定關(guān)系。pH和鹽基飽和度在短期果園土壤（β區(qū)域）方向延伸，說明這兩種環(huán)境因子對短期果園土壤微生物影響較大，這與水田改果園后土壤酸化有一定關(guān)系。鉀素和磷素在長期果園土壤（γ區(qū)域）方向延伸，說明磷素和鉀素對C區(qū)域內(nèi)土壤微生物影響更明顯，這與長期果園土壤中大量施用化肥關(guān)系密切。

耕層土壤冗余分析結(jié)果顯示，第一排序軸解釋了樣本中83.5%的變異，第二排序軸解釋了樣本中2.9%的變異，前4個排序軸共同解釋了土壤微生物群落結(jié)構(gòu)演替中89.4%的變異。前2個排序軸的物種—環(huán)境相關(guān)系數(shù)均達到0.92，說明土壤微生物區(qū)系與土壤環(huán)境因子之間關(guān)系密切，這11種土壤環(huán)境因子的改變是影響土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的主要原因。土壤環(huán)境因子中土壤含水量、有機質(zhì)、全氮、堿解氮和有效磷與前2個排序軸相關(guān)性最強，呈極顯著正相關(guān)（p＜0.01），因而這5種因子是決定水田和果園微生物群落結(jié)構(gòu)差異的最重要因子，與沈冰潔等［30］關(guān)于水田和旱地中土壤有機碳和全氮對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)影響最為顯著的結(jié)論相比，本結(jié)論中影響因子更全面。前四個排序軸的物種—環(huán)境累積百分比變化率達到97.9%。第一排序軸與自然含水量、全磷、有效磷、全鉀和速效鉀均呈顯著（p＜0.05）或極顯著（p＜0.01）相關(guān)，第二排序軸與pH、有機質(zhì)、全氮和堿解氮呈顯著相關(guān)（p＜0.05），第三排序軸與鹽基飽和度呈極顯著負相關(guān)。

3 結(jié) 論

圖7 耕層土壤微生物磷脂脂肪酸冗余分析排序圖Fig. 7 Sequencing graph of soil microorganism phospholipid fatty acids in the plow layer soils in redundancy analysis

土地利用方式及其轉(zhuǎn)變時間能夠?qū)ν寥览砘再|(zhì)和微生物多樣性帶來較大影響。水田改果園后，土壤微生物生物量和微生物商顯著下降，土壤微生物群落結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著變化，并且隨果園年齡的增加而日趨明顯。聚類分析和冗余分析表明，在水田和果園生態(tài)系統(tǒng)中，土壤水分、有機質(zhì)、氮素和有效磷是影響土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的最主要環(huán)境因素（p＜0.01）。土地利用方式轉(zhuǎn)變對土壤微生物的影響要大于利用年限的影響。研究表明，水田是地球生態(tài)系統(tǒng)中重要的碳匯，其微生物多樣性較豐富，水田種植是一種可以促進土壤可持續(xù)利用的有效方式。水田改為果園不利于土壤可持續(xù)利用，此外，長期種植果樹可能會引起土壤養(yǎng)分失衡等一系列問題。因而，應(yīng)盡量避免將大面積水田改為果園，并應(yīng)對已改制的果園實行輪作等種植方式以維護土壤生態(tài)功能，促進土壤可持續(xù)發(fā)展。

［1］ Torsvik V，?vre?s L. Microbial diversity and function in soil：From genes to ecosystems. Current Opinion in Microbiology，2002，5（3）：240—245

［2］ Schimel D S. Terrestrial ecosystems and the carbon cycle. Global Change Biology，1995，1（1）：77—91

［3］ 王敬，張金波，蔡祖聰. 太湖地區(qū)稻麥輪作農(nóng)田改葡萄園對土壤氮轉(zhuǎn)化過程的影響. 土壤學(xué)報，2016，53（1）：166—176 Wang J，Zhang J B，Cai Z C. Effects of conversion of paddy field into vineyard on soil nitrogen transformation in the Taihu Lake region of China（In Chinese）. Acta Pedologica Sinica，2016，53（1）：166—176

［4］ Neill C，Piccolo M C，Cerri C C，et al. Net nitrogen mineralization and net nitrification rates in soils following deforestation for pasture across the southwestern Brazilian Amazon Basin landscape.Oecologia，1997，110（2）：243—252

［5］ Geissen V，Pe?a-Pe?a K，Huerta E. Effects of different land use on soil chemical properties，decomposition rate and earthworm communities in tropical Mexico.Pedobiologia，2009，53（1）：75—86

［6］ 陽顯斌，李廷軒，張錫洲，等. 煙蒜輪作與套作對土壤微生物類群數(shù)量的影響. 土壤，2016，48（4）：698—704 Yang X B，Li T X，Zhang X Z，et al. Effects of tobacco garlic crop rotation and tobacco garlic crop intercropping on soil microbial groups in tobacco fields（In Chinese）. Soils，2016，48（4）：698—704

［7］ Celik I. Land-use effects on organic matter and physical properties of soil in a southern Mediterranean highland of Turkey. Soil and Tillage Research，2005，83（2）：270—277

［8］ Li X G，Li F M，Zed R，et al. Soil physical properties and their relations to organic carbon pools as affected by land use in an alpine pastureland. Geoderma，2007，139（1/2）：98—105

［9］ Jangid K，Williams M A，F(xiàn)ranzluebbers A J，et al.Land-use history has a stronger impact on soil microbial community composition than aboveground vegetation and soil properties. Soil Biology and Biochemistry，2011，43（10）：2184—2193

［10］ Zhang Q，Sun J，Liu S，et al. Manure refinement affects apple rhizosphere bacterial community structure：A study in sandy soil. PLoS One，2013，8（10）：1—8

［11］ 何振立. 土壤微生物量及其在養(yǎng)分循環(huán)和環(huán)境質(zhì)量評價中的意義. 土壤，1997，29（2）：61—69 He Z L. The significance of soil microorganisms and their nutrient cycling in environmental quality evaluation（In Chinese）. Soils，1997，29（2）：61—69

［12］ Lauber C L，Strickland M S，Bradford M A，et al. The influence of soil properties on the structure of bacterial and fungal communities across land-use types. Soil Biology and Biochemistry，2008，40（9）：2407—2415

［13］ Wakelin S A，Macdonald L M，Rogers S L，et al.Habitat selective factors influencing the structural composition and functional capacity of microbial communities in agricultural soils. Soil Biology and Biochemistry，2008，40（3）：803—813

［14］ 周賽，梁玉婷，張厚喜，等. 我國中亞熱帶毛竹林土壤微生物群落的空間分布特征及其影響因素. 土壤，2015，47（2）：369—377 Zhou S，Liang Y T，Zhang H X，et al. Characteristics of spatial pattern and influence factors for soil microbial community structure in moso bamboo forests in middle subtropical China（In Chinese）. Soils，2015，47（2）：369—377

［15］ 雷海迪，尹云鋒，劉巖，等. 杉木凋落物及其生物炭對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響. 土壤學(xué)報，2016，53（3）：790—799 Lei H D，Yin Y F，Liu Y，et al. Effects of fir（Cunninghamia lanceolata）litter and its biochar on soil microbial community structuren（In Chinese）.Acta Pedologica Sinica，2016，53（3）：790—799

［16］ Balota E L，Yada I F，Amaral H，et al. Longterm land use influences soil microbial biomass p and s，phosphatase and arylsulfatase activities，and s mineralization in a brazilian oxiso. Land Degradation and Development，2014，25（4）：397—406

［17］ Yao H，He Z，Wilson M J，et al. Microbial biomass and community structure in a sequence of soils with increasing fertility and changing land use. Microbial Ecology，2000，40（3）：223—237

［18］ Bossio D A，Girvan M S，Verchot L，et al. Soil microbial community response to land use change in an agricultural landscape of western Kenya. Microbial Ecology，2005，49（1）：50—62

［19］ Xue D，Yao H Y，Ge D Y，et al. Soil microbial community structure in diverse land use systems：A comparative study using Biolog，DGGE，and PLFA analyses. Pedosphere，2008，18（5）：653—663

［20］ L a u b e r C L，H a m a d y M，K n i g h t R，e t a l.Pyrosequencing-based assessment of soil pH as a predictor of soil bacterial community structure at the continental scale. Applied and Environmental Microbiology，2009，75（15）：5111—5120

［21］ Rajaniemi T K，Allison V J. Abiotic conditions and plant cover differentially affect microbial biomass and community composition on dune gradients. Soil Biology and Biochemistry，2009，41（1）：102—109

［22］ Wang B Z，Zhang C X，Liu J L，et al. Microbial community changes along a land-use gradient of desert soil origin. Pedosphere，2012，22（5）：593—603

［23］ 嘉興市土壤志編輯委員會. 嘉興土壤. 杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1991：218—223 Jiaxing Soil Log Editorial Committee. Jiaxing soil（In Chinese）. Hangzhou：Zhejiang Science and Technology Press，1991：218—223

［24］ 魯如坤. 土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法. 北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2000 Lu R K. Analytical methods for soil and agro-chemistry（In Chinese）. Beijing：China Agricultural Science and Technology Press，2000

［25］ 張甘霖，龔子同. 土壤調(diào)查實驗室分析方法. 北京：科學(xué)出版社，2012：1—243 Zhang G L，Gong Z T. Analytical methods of soil survey laboratory（In Chinese）. Beijing：Science Press，2012：1—243

［26］ Wu Y P，Ding N，Wang G，et al. Effects of different soil weights，storage times and extraction methods on soil phospholipid fatty acid analyses. Geoderma，2009，150（1）：171—178

［ 27］ 李忠佩，吳曉晨，陳碧云. 不同利用方式下土壤有機碳轉(zhuǎn)化及微生物群落功能多樣性變化. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，40（8）：1712—1721 Li Z P，Wu X C，Chen B Y. Changes in transformation of soil organic carbon and functional diversity of soil microbial community under different land use patterns（In Chinese）. Scientia Agricultura Sinica，2007，40（8）：1712—1721

［28］ 彭佩欽，吳金水，黃道友，等. 洞庭湖區(qū)不同利用方式對土壤微生物生物量碳氮磷的影響. 生態(tài)學(xué)報，2006，26（7）：2261—2267 Peng P Q，Wu J S，Huang D Y，et al. Microbial biomass C，N，P of farmland soils in different land uses and cropping systems in Dongting Lake region（In Chinese）. Acta Ecologica Sinica，2006，26（7）：2261—2267

［29］ Sparling G P. Ratio of microbial biomass carbon to soil organic carbon as a sensitive indicator of changes in soil organic matter. Australia Journal of Soil Research，1992，30（2）：195—207

［30］ 沈冰潔，祝貞科，袁紅朝，等. 不同種植方式對亞熱帶紅壤微生物多樣性的影響. 環(huán)境科學(xué)，2015，36（10）：3839—3844 Shen B J，Zhu Z K，Yuan H Z，et al. Effects of different plantation type on the abundance and diversity of soil microbes in subtropical red soils（In Chinese）.Environmental Science，2015，36（10）：3839—3844

［31］ White D C，Davis W M，Nickels J S，et al.Determination of the sedimentary microbial biomass by extractible lipid phosphate. Oecologia，1979，40（1）：51—62

［32］ 鐘文輝，蔡祖聰. 土壤微生物多樣性研究方法. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報，2004，15（5）：899—904 Zhong W H，Cai Z C. Methods for studying soil microbial diversity（In Chinese）. Chinese Journal of Applied Ecology，2004，15（5）：899—904

［33］ 陳振翔，于鑫，夏明芳，等. 磷脂脂肪酸分析方法在微生物生態(tài)學(xué)中的應(yīng)用. 生態(tài)學(xué)雜志，2005，24（7）：828—832 Chen Z X，Yu X，Xia M F，et al. Application of phospholipid fatty acid（PLFA）analysis in microbial ecology（In Chinese）. Chinese Journal of Ecology，2005，24（7）：828—832

［34］ McKinley V L，Peacockb A D，White D C. Microbial community PLFA and PHB responses to ecosystem restoration in tallgrass prairie soils. Soil Biology and Biochemistry，2005，37（10）：1946—1958