大黃酚脂質(zhì)體對腦缺血再灌注損傷小鼠體內(nèi)抗氧化作用的影響

顏 娟 鄭茂東 崔玉環(huán) 魏玉磊

(河北北方學院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口 075000)

大黃酚(Chry)具有抗氧化〔1〕、抗病毒、抗菌、降壓等作用。目前，不同Chry劑型藥物代謝動力學研究報道Chry脂質(zhì)體(Chr-lip)具有靶向性，主要分布在血、腦組織中〔2〕。腦缺血時，機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物如超氧化物歧化酶(SOD)降低、丙二醛(MDA)、乳酸脫氫酶(LDH)升高，引起機體抗氧化系統(tǒng)功能紊亂。再灌注時，新生成的氧自由基和存留的氧自由基進一步發(fā)生脂質(zhì)過氧化，從而加重細胞損傷。本文主要研究Chr-lip對腦缺血再灌注損傷小鼠體內(nèi)抗氧化作用，探討其是否提高機體抗氧化能力。

1 材料與方法

1.1材料 主要藥品與試劑：Chr-lip自制，血清總抗氧化能力(T-AOC)測定試劑盒，過氧化氫酶(CAT)測定試劑盒，SOD測定試劑盒，MDA 測定試劑盒，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測定試劑盒，南京建成生物工程公司。動物：昆明種小鼠(河北北方學院動物中心提供)實驗動物生產(chǎn)許可證號：XCYK(冀)2010-2014，實驗動物使用許可證號：SCXK(Ji)2004-0001。儀器：HITACHI U-3900 紫外分光光度(日本)，電子天平 BS124S(德國)，酶標儀。

1.2方法 3.5%水合氯醛(10 ml/kg)腹腔麻醉，按參考文獻〔3〕方法分離頸外動脈，左側(cè)頸總動脈和頸內(nèi)動脈，解離神經(jīng)。夾閉頸總、頸內(nèi)動脈，將制備好的栓線插入頸外動脈，并在剪口處打一松結(jié)，將線插入頸內(nèi)動脈的顱內(nèi)段，當線遇阻力時，正好堵住大腦中動脈的開口。阻斷1 h后，拔出線栓，縫合，完成腦缺血再灌注損傷模型。假手術(shù)組不實施缺血再灌注，只進行手術(shù)。蘇醒后觀察存活小鼠行為變化，神經(jīng)癥狀采用Clark 評分〔4〕(0～28分)，剔除不符合條件的小鼠后，嚴格按實驗條件統(tǒng)一補充、分組。建模成功后，小鼠隨機分為正常對照組、假手術(shù)組、模型組、Chr-lip 10.0、5.0、0.5 mg/kg 3個劑量組。模型成功后，每日上午分別腹腔給藥，正常對照組、假手術(shù)組和模型組給予同體積的生理鹽水。Chr-lip 10.0，5.0，0.5 mg/kg，每天稱重一次，依據(jù)小鼠末次體重調(diào)整給藥劑量。實驗過程中配置3份Chr-lip溶液，其濃度分別為0.500，0.250，0.025 mg/ml；濃度根據(jù)20 ml/kg計算，使小鼠的給藥體積保持一致。給藥時間1 w。末次給藥后，每組取10只小鼠血清進行檢測T-AOC、CAT、SOD、GSH-Px、MDA水平，方法按試劑盒說明。

1.3統(tǒng)計學方法 采用SPSS10.0軟件進行方差分析及LSD檢驗。

2 結(jié) 果

見表1。與正常對照組相比，模型組T-AOC、SOD、GSH-PX、CAT活性明顯降低(P<0.01)，MDA活性明顯增加(P<0.01)；與模型組比較，Chr-lip組中T-AOC、SOD、GSH-Px(chr-lip 0.5 mg/kg除外)、CAT(Chr-lip 0.5 mg/kg除外)活性均顯著提高(P<0.05)，MDA(Chr-lip 0.5 mg/kg除外)活性顯著降低(P<0.05)。

表1 各組腦組織氧化指標比較

與正常對照組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.01,3)P<0.05

3 討 論

Chry具有多種藥理作用，包括抗感染、抗衰老、抗癌。它具有抑制人類某些癌細胞增長的能力，即通過誘導人類肺癌A549細胞、J5細胞壞死〔5～7〕。前期研究〔8〕發(fā)現(xiàn)Chr-lip在腦缺血再灌注損傷小鼠中具有明顯的生物作用，提高小鼠學習記憶能力。Chr-lip作為一種新的劑型，它在腦缺血性疾病中具有潛在的能力。在腦缺血再灌注過程中，自由基損傷，解毒系統(tǒng)失活，氧化應(yīng)激損傷，氧化劑過?！?,10〕多種環(huán)節(jié)相互影響，相互作用。上述因素變化都會使機體腦組織中抗氧化防御系統(tǒng)紊亂。因此，抗氧化藥物在腦缺血再灌注損傷治療研究引起廣泛興趣〔11〕。過量的氧自由基作用于細胞內(nèi)各種酶及細胞膜上不飽和脂肪酸，進而細胞膜產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，致使質(zhì)膜被破壞，形成功能障礙，誘導蛋白質(zhì)、RNA、DNA的交聯(lián)和氧化反應(yīng)，引起生物膜裂解，酶喪失活性，神經(jīng)元凋亡或死亡〔12〕，導致細胞損傷引起腦功能障礙。腦缺血時，大量的自由基產(chǎn)生，但機體內(nèi)清除自由基的能力未提高，尤其是再灌注時，雖然組織重新獲得供氧可緩解腦組織的缺血缺氧狀態(tài)，但同時也產(chǎn)生大量自由基，使其大量聚集，腦組織損傷進一步加重〔13〕。生成的自由基使生物膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，影響膜的穩(wěn)定性，最終使細胞結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生病理性的改變。因此，在自由基作用下，MDA作為不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，其含量可直接反映脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映細胞損傷的程度，組織內(nèi)SOD活性的高低可部分反映機體清除自由基的能力。谷胱甘肽系統(tǒng)則是腦內(nèi)重要的防御系統(tǒng)之一，與自由基及過氧化物結(jié)合，保護細胞膜中含巰基的酶和蛋白質(zhì)。腦缺血后由于自由基生成增加，體內(nèi)抗氧化物質(zhì)被消耗，使SOD、GSH-Px等顯著下降〔14〕。GSH-Px和SOD是內(nèi)源性自由基清除劑，清除自由基，保護細胞，因此，機體清除氧自由基的能力可用GSH-Px、SOD活力的高低表示。因此，在腦缺血再灌注過程中，自由基清除酶活性降低，使細胞膜磷脂中脂肪酸的不飽和雙鍵和多聚不飽和脂肪酸更易受到攻擊，隨著防御功能減弱，進而清除自由基酶與自由基之間的平衡失調(diào)，加重脂質(zhì)過氧化損傷，更易受到自由基的攻擊，腦血管通透性增加、血腦屏障破壞，神經(jīng)元損害和腦水腫加重〔15〕。本研究結(jié)果表明Chr-lip的神經(jīng)保護作用可能通過減輕脂質(zhì)過氧化損傷。此外，Chr-lip具有增強T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT活性的作用。上述結(jié)果顯示，Chr-lip在腦缺血再灌注損傷中具有潛在的抗氧化應(yīng)激能力。

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