EGCG對(duì)腫瘤干細(xì)胞抑制效應(yīng)研究進(jìn)展

陳 磊，李開(kāi)鳴，馬會(huì)景，曾憲思，賈金婧，宋新強(qiáng)*

(信陽(yáng)師范學(xué)院 a.生命科學(xué)學(xué)院；b.河南省茶樹(shù)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；c.圖書(shū)館，河南 信陽(yáng) 464000)

0 引言

腫瘤干細(xì)胞(Cancer stem cells，CSCs)是癌組織中普遍存在的一類(lèi)特殊性細(xì)胞，在乳腺癌、肝癌、肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、白血病等癌組織中均有發(fā)現(xiàn)，具有遷移侵襲性、自我更新、強(qiáng)耐藥性和強(qiáng)致瘤性等特性，與癌癥發(fā)生、轉(zhuǎn)移灶形成、抗放(化)療、癌癥復(fù)發(fā)等直接相關(guān)，是癌癥治療的熱點(diǎn)和難點(diǎn)[1]．研究發(fā)現(xiàn)，CSCs也是導(dǎo)致癌癥遺傳異質(zhì)性的主要原因之一[2]．CSCs在自我更新過(guò)程中持續(xù)發(fā)生基因突變并在子代細(xì)胞中積累，形成異質(zhì)性細(xì)胞群并演化成遺傳異質(zhì)性癌組織，為臨床癌癥分型和治療增添障礙[3]．越來(lái)越多的研究者認(rèn)為，尋找靶向CSCs的特異性藥物是癌癥研究和臨床治療的關(guān)鍵．

表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯((-)-Epigallocatechin-3-gallate，EGCG)是綠茶的主要活性成分之一，占兒茶素類(lèi)化合物的50%～60%，具有清除自由基、降低氧化損傷等作用，對(duì)正常的組織和細(xì)胞沒(méi)有毒性，但是對(duì)癌癥的預(yù)防和治療有積極效應(yīng)[4]．研究表明，EGCG通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin、AKT等信號(hào)通路傳遞途徑抑制CSCs，增強(qiáng)一線化療藥物的抗癌作用，為臨床癌癥治療提供一種新的化療方案[5]．鑒于此，本文對(duì)EGCG作用于CSCs遷移侵襲性、自我更新、抗藥性和致瘤性等特性的相關(guān)研究進(jìn)行了綜述．

1 EGCG對(duì)CSCs遷移侵襲性的抑制效應(yīng)

遷徙腫瘤干細(xì)胞(Migrating cancer stem cells，MCSs)是CSCs的重要亞群之一，能夠從原發(fā)灶中脫落并通過(guò)血液和淋巴系統(tǒng)向器官轉(zhuǎn)移，在合適的微環(huán)境下定植形成轉(zhuǎn)移灶[6]．在遷移初期，MCSs過(guò)表達(dá)遷移侵襲性關(guān)鍵因子獲得能動(dòng)性，上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPs)表達(dá)水平,降解細(xì)胞外基質(zhì)，解脫細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)細(xì)胞的束縛，癌細(xì)胞發(fā)生遷移和侵襲．在針對(duì)不同癌細(xì)胞研究中發(fā)現(xiàn)，EGCG對(duì)遷移侵襲性關(guān)鍵基因和MMPs的過(guò)表達(dá)具備抑制效應(yīng)[7]．

1.1 EGCG對(duì)MMPs過(guò)表達(dá)的抑制效應(yīng)

EGCG對(duì)MMPs的抑制效應(yīng)有兩條途徑，一條是直接抑制MMPs表達(dá)量和活性水平，另一條是增強(qiáng)MMPs抑制分子表達(dá)量，參與的信號(hào)傳導(dǎo)途徑包括AKT、ERK和NF-κB等通路．在乳腺癌細(xì)胞中，EGCG下調(diào)HGF表達(dá)量，降低Met磷酸化水平并引起AKT和ERK信號(hào)通路衰減，阻抑FAK和 ERK結(jié)合到MMP-9啟動(dòng)子區(qū)，下調(diào)MMP-9表達(dá)量和活性水平，抑制癌細(xì)胞遷移和侵襲[8]．Park等人[9]在研究唾液腺癌細(xì)胞的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)劑量依賴(lài)性下調(diào)β1 integrin的表達(dá)水平，抑制異?；钴S的FAK、AKT和ERK信號(hào)傳遞途徑，降低MMP-2和MMP-9表達(dá)水平．Luo等人[10]也發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)抑制膀胱癌細(xì)胞NF-κB表達(dá)水平和磷酸化水平而抑制MMP-9過(guò)表達(dá)，將NF-κB基因沉默后EGCG則無(wú)法發(fā)揮這種抑制效應(yīng)．此外，在口腔癌、結(jié)腸癌和前列腺癌細(xì)胞的研究中，ERK1/2和NF-κB信號(hào)通路主要參與EGCG對(duì)MMP-2和MMP-9過(guò)表達(dá)的抑制效應(yīng)[11]．上調(diào)MMPs抑制因子表達(dá)是EGCG作用于MMPs另一條途徑．在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)下調(diào)EZH2表達(dá)量和活性水平，增強(qiáng)抑制因子TIMP-1和-3的表達(dá)量和活性水平，抑制MMP-2和MMP-3過(guò)表達(dá)[12]．相對(duì)于之前細(xì)胞系的研究，ZHANG等人[13]的臨床研究結(jié)果更具有說(shuō)服力．他們給放療病人每天3次服用劑量為400 mg的 EGCG膠囊，然后對(duì)其血管中癌細(xì)胞MMP-9和MMP-2活性水平進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，MMP-9和MMP-2活性明顯下調(diào)，細(xì)胞遷移特性顯著降低．以上研究結(jié)果表明，EGCG具備抑制MMPs過(guò)表達(dá)而降低癌細(xì)胞遷移侵襲性的效應(yīng)．

EGCG對(duì)MMPs的抑制效應(yīng)有兩條途徑，一條是直接抑制MMPs表達(dá)量和活性水平，另一條是增強(qiáng)MMPs抑制分子表達(dá)量，參與的信號(hào)傳導(dǎo)途徑包括AKT、ERK和NF-κB等通路．在乳腺癌細(xì)胞中，EGCG下調(diào)HGF表達(dá)量，降低Met磷酸化水平并引起AKT和ERK信號(hào)通路衰減，阻抑FAK和 ERK結(jié)合到MMP-9啟動(dòng)子區(qū)，下調(diào)MMP-9表達(dá)量和活性水平，抑制癌細(xì)胞遷移和侵襲[8]．Park等人[9]在研究唾液腺癌細(xì)胞的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)劑量依賴(lài)性下調(diào)β1 integrin的表達(dá)水平，抑制異?；钴S的FAK、AKT和ERK信號(hào)傳遞途徑，降低MMP-2和MMP-9表達(dá)水平．Luo等人[10]也發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)抑制膀胱癌細(xì)胞NF-κB表達(dá)水平和磷酸化水平而抑制MMP-9過(guò)表達(dá)，將NF-κB基因沉默后EGCG則無(wú)法發(fā)揮這種抑制效應(yīng)．此外，在口腔癌、結(jié)腸癌和前列腺癌細(xì)胞的研究中，ERK1/2和NF-κB信號(hào)通路主要參與EGCG對(duì)MMP-2和MMP-9過(guò)表達(dá)的抑制效應(yīng)[11]．上調(diào)MMPs抑制因子表達(dá)是EGCG作用于MMPs另一條途徑．在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)下調(diào)EZH2表達(dá)量和活性水平，增強(qiáng)抑制因子TIMP-1和-3的表達(dá)量和活性水平，抑制MMP-2和MMP-3過(guò)表達(dá)[12]．相對(duì)于之前細(xì)胞系的研究，ZHANG等人[13]的臨床研究結(jié)果更具有說(shuō)服力．他們給放療病人每天3次服用劑量為400 mg的 EGCG膠囊，然后對(duì)其血管中癌細(xì)胞MMP-9和MMP-2活性水平進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，MMP-9和MMP-2活性明顯下調(diào)，細(xì)胞遷移特性顯著降低．以上研究結(jié)果表明，EGCG具備抑制MMPs過(guò)表達(dá)而降低癌細(xì)胞遷移侵襲性的效應(yīng)．

1.2 EGCG對(duì)遷移侵襲性標(biāo)志基因的影響

遷移侵襲性標(biāo)志基因過(guò)表達(dá)是CSCs遷移的主要原因，而EGCG能抑制這些標(biāo)記基因的過(guò)表達(dá)．在對(duì)甲狀腺癌、肺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，EGCG直接作用于ERK1/2信號(hào)通路來(lái)抑制癌細(xì)胞的遷移[14]．EGCG通過(guò)衰減ERK1/2磷酸化水平而抑制Smad2表達(dá)量和磷酸化水平，抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)關(guān)鍵因子ZEB1、Snail、Slug、Twist和vimentin表達(dá)量，增強(qiáng)黏附蛋白E-cadherin表達(dá)水平，抑制細(xì)胞的遷移侵襲性．在膀胱癌、乳腺癌中，AKT信號(hào)通路主要參與EGCG的抑制效應(yīng)[15]．例如在乳腺癌細(xì)胞中，EGCG促進(jìn)癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)AKT信號(hào)通路抑制分子FOXO3α，抑制EMT轉(zhuǎn)錄因子Snail表達(dá)，促進(jìn)黏著蛋白E-cadherin而抑制癌細(xì)胞遷移．NF-κB/p65信號(hào)通路則主要參與了EGCG對(duì)鼻咽癌和黑色素瘤的抑制效應(yīng)[16]．EGCG通過(guò)干擾p65細(xì)胞膜定位而抑制NF-κB活性，下調(diào)COX-2、PGE2R等關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平，下調(diào)EMT標(biāo)志蛋白Twist1、vimentin、N-cadherin表達(dá)量，抑制細(xì)胞發(fā)生EMT．此外，在三維培養(yǎng)體系下研究發(fā)現(xiàn)，EGCG抑制支氣管癌、鼻咽癌和口腔鱗癌過(guò)表達(dá)遷移關(guān)鍵蛋白vimentin、Snail等，抑制癌細(xì)胞的遷移侵襲性[17]．

2 EGCG對(duì)CSCs自我更新的抑制效應(yīng)

自我更新是CSCs主要特性之一，與癌癥發(fā)生和轉(zhuǎn)移灶形成直接相關(guān)[18]．自我更新能維持癌組織中存在一定數(shù)量的CSCs，又能形成具備持續(xù)分裂能力的癌細(xì)胞．在自我更新過(guò)程中，癌細(xì)胞通過(guò)積累突變而發(fā)生基因組演化，形成遺傳異質(zhì)性癌組織，給臨床癌癥分型和治療帶來(lái)極大的困難[19]．Wnt/β-catenin、mTOR、Hedgehog等干細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路的異常激活是CSCs維持自我更新特性的主要原因，研發(fā)針對(duì)這些信號(hào)通路的藥物是治療CSCs的關(guān)鍵[20]

2.1 對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的影響

Wnt/β-catenin信號(hào)通路是CSCs調(diào)節(jié)自我更新的關(guān)鍵途徑，該通路過(guò)度激活引起β-catenin積累并持續(xù)向核內(nèi)運(yùn)輸，與TCF/Lef形成復(fù)合物而激活基因c-myc、Cyclin D1、CD44等表達(dá)，誘導(dǎo)癌細(xì)胞獲得自我更新[20]．研究發(fā)現(xiàn)，EGCG能降低β-catenin與Wnt蛋白的表達(dá)量和活性水平，弱化Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路．直接抑制β-catenin表達(dá)是EGCG作用于Wnt/β-catenin信號(hào)通路的作用之一．EGCG不依賴(lài)GSK-3β和PP2A途徑誘導(dǎo)β-catenin N末端Ser33/37殘基的磷酸化而促進(jìn)β-catenin降解，降低細(xì)胞內(nèi)β-catenin濃度[21]，并抑制β-catenin向細(xì)胞核內(nèi)運(yùn)輸，阻礙β-catenin/TCF/Lef復(fù)合體的形成，從而衰減Wnt/β-catenin信號(hào)通路，下調(diào)干細(xì)胞標(biāo)志物ALDH1A1、Nanog、Oct4、CD133等表達(dá)，抑制CSCs自我更新[22]．ZHU等人[23]在對(duì)肺癌CSCs的研究中也發(fā)現(xiàn)，LiCl具備上調(diào)β-catenin表達(dá)量并促進(jìn)CSCs標(biāo)志物ALDH1A1、Nanog、Oct4、CD133等表達(dá)的作用，能有效逆轉(zhuǎn)EGCG的抑制效應(yīng)，進(jìn)一步證實(shí)EGCG是通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路來(lái)抑制肺癌CSCs自我更新．抑制Wnt蛋白表達(dá)水平是EGCG弱化Wnt/β-catenin信號(hào)通路的另一途徑．KIM等人[24]在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)調(diào)控mRNA穩(wěn)定性而增強(qiáng)Wnt蛋白抑制分子BMP1蛋白表達(dá)量，抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路，下調(diào)Wnt和C-Myc等干細(xì)胞標(biāo)志蛋白表達(dá)量．GODEKE研究小組[25]也報(bào)道了EGCG誘導(dǎo)肝癌CSCs抑制分子SFRP1表達(dá)，直接降低細(xì)胞中Wnt蛋白含量，弱化Wnt/β-catenin信號(hào)通路的傳遞，抑制癌細(xì)胞克隆形成．相對(duì)于之前的研究，CHEN等[26]利用全基因分析技術(shù)對(duì)舌鱗癌細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)引起Wnt基因甲基化而發(fā)揮抑制Wnt表達(dá)的效應(yīng)．

2.2 對(duì)Hedgehog信號(hào)通路的影響

Hedgehog信號(hào)通路是CSCs中另一種異常活化的信號(hào)傳遞途徑，與CSCs自我更新、抗藥性等直接相關(guān)．Hedgehog信號(hào)通路以Hedgehog-Ptch-SMO-Gli為信號(hào)傳導(dǎo)途徑，EGCG能干擾這一傳導(dǎo)途徑．TANG等人[27]的研究發(fā)現(xiàn)，用EGCG處理后的胰腺癌CSCs，Hedgehog信號(hào)通路關(guān)鍵信號(hào)分子Smo、Ptch-1和Ptch-2表達(dá)量明顯下降，通路下游關(guān)鍵效應(yīng)物Gli1和Gli2的表達(dá)水平也下調(diào)，CSCs標(biāo)志分子Nanog、c-Myc和Oct-4的表達(dá)水平也顯著降低，細(xì)胞單克隆形成能力明顯減弱．隨后SUR等人[28]利用小鼠體內(nèi)成瘤模型研究發(fā)現(xiàn)，EGCG抑制肝癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)Smo和Ptch-1蛋白，降低干細(xì)胞樣細(xì)胞(CD44陽(yáng)性)數(shù)量，進(jìn)一步證實(shí)EGCG在體內(nèi)仍然具備抑制Hedgehog信號(hào)通路的作用．在小鼠舌癌模型的研究中同樣也發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)抑制Smo和Ptch-1的表達(dá)而減弱Hedgehog信號(hào)通路，降低效應(yīng)基因c-Myc、Cyclin D1、EGFR等表達(dá)，抑制細(xì)胞單克隆形成能力，減少癌組織中CSCs的數(shù)量[29]．體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)同時(shí)證實(shí)，EGCG通過(guò)對(duì)Hedgehog信號(hào)通路傳遞具備抑制效應(yīng)．

2.3 對(duì)其他信號(hào)通路的影響

mTOR和Notch信號(hào)通路也是CSCs自我更新的關(guān)鍵細(xì)胞通路，是靶向治療CSCs的熱點(diǎn)[30]．EGCG對(duì)這兩種信號(hào)通路也具備抑制效應(yīng)[31]．EGCG能下調(diào)ER-α和EGFR信號(hào)分子的表達(dá)量[32]，弱化Stat3信號(hào)分子的活性水平，弱化mTOR信號(hào)通路，從而下調(diào)CSCs自我更新關(guān)鍵基因Oct-4、Nanog等表達(dá)量，抑制癌細(xì)胞克隆形成能力[33]．WUBETU等人[34]用EGCG處理結(jié)腸癌和肝癌CSCs后也發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)下調(diào)Nek2表達(dá)量而降低AKT磷酸化水平，衰減mTOR信號(hào)通路，降低CSCs標(biāo)志蛋白CD133、Nanog等表達(dá)量，抑制CSCs自我更新特性．LEE等人[35]對(duì)頭頸鱗癌CSCs的研究中發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)抑制Notch信號(hào)分子的表達(dá)水平而下調(diào)CSCs標(biāo)記物Oct4、Sox2和Nanog等表達(dá)量，抑制癌細(xì)胞單克隆形成能力．

3 EGCG對(duì)CSCs致瘤性的影響

致瘤性是CSCs的關(guān)鍵特征，與原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶形成直接相關(guān)，研發(fā)針對(duì)CSCs致瘤性的特異性藥物是靶向治療CSCs的關(guān)鍵．前期研究發(fā)現(xiàn)，EGCG對(duì)乳腺癌和前列腺癌細(xì)胞的致瘤性具備抑制效應(yīng)[36]．EGCG直接誘導(dǎo)乳腺癌CSCs發(fā)生凋亡而抑制腫瘤形成．LEE等人[35]在頭頸鱗癌CSCs的研究中也發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)抑制自我更新而弱化CSCs致瘤性．SUR等人[28]的研究中進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，Wnt 和Hedgehog信號(hào)傳導(dǎo)途徑參與EGCG針對(duì)肝癌CSCs致瘤性的抑制效應(yīng)．EGCG降低Wnt信號(hào)通路中關(guān)鍵分子β-catenin的表達(dá)和磷酸化水平，抑制Hedgehog信號(hào)通路效應(yīng)分子Gli1和SMO的表達(dá)量，同時(shí)弱化Wnt 和Hedgehog信號(hào)傳導(dǎo)途徑，降低CSCs(CD44陽(yáng)性)的含量而抑制腫瘤發(fā)生．相對(duì)于之前的研究，YU等人[37]還發(fā)現(xiàn)，miR-204是EGCG抑制口腔鱗癌CSCs致瘤性的另一途徑．miR-204具備特異結(jié)合到干細(xì)胞標(biāo)記基因Slug和Sox4的3′端UTR區(qū)而抑制基因表達(dá)的功能，在口腔鱗癌CSCs中低水平表達(dá)．EGCG能促進(jìn)癌細(xì)胞表達(dá)miR-204，抑制口腔鱗癌CSCs(ALDH1和CD44陽(yáng)性)的含量、自我更新和致瘤性．

4 EGCG對(duì)CSCs強(qiáng)耐藥性的影響

CSCs對(duì)化療藥物和抗癌分子具有極強(qiáng)的耐藥性，在對(duì)癌癥患者化療時(shí)，普通癌細(xì)胞被殺死而CSCs則存活下來(lái)，甚至部分靜息的CSCs被激活，重新形成癌癥并發(fā)生轉(zhuǎn)移[38]．CSCs耐藥性的主要原因，一方面是CSCs小生境引起的，例如低氧、低pH值、免疫反應(yīng)等，激活CSCs抗藥性信號(hào)通路；另一方面是由于細(xì)胞過(guò)表達(dá)標(biāo)志性蛋白引發(fā)的，例如ABCG1、ABCG2等細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，具備將藥物及時(shí)排到胞外而降低藥物對(duì)細(xì)胞的殺傷性[39]．研究發(fā)現(xiàn)，EGCG能降低或逆轉(zhuǎn)癌細(xì)胞的耐藥性，減少化療藥物的使用濃度并增強(qiáng)殺抗癌效果[40-42]．在針對(duì)CSCs定向治療的研究發(fā)現(xiàn)，EGCG同樣對(duì)CSCs耐藥性也有積極作用．

4.1 對(duì)化療藥物作用于CSCs的影響

EGCG弱化CSCs抗藥性的作用途徑主要有3種：膜蛋白、自我更新途徑和miRNAs．首先，EGCG特異抑制CSCs膜上轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(例如ABCC2 和ABCG2等)活性和表達(dá)量，降低藥物被泵出細(xì)胞的量而提高CSCs內(nèi)藥物濃度，增強(qiáng)抗癌藥物對(duì)CSCs殺傷性，在頭頸癌、膽道癌和鼻咽癌等CSCs中均有發(fā)現(xiàn)[33, 35,43]．例如，鼻咽癌CSCs過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2等，而 EGCG通過(guò)弱化Stat3信號(hào)通路下調(diào)ABCG2表達(dá)量，增強(qiáng)化療藥物順鉑對(duì)CSCs的殺傷性．其次，EGCG直接作用于CSCs自我更新和致瘤性相關(guān)信號(hào)通路的傳遞途徑，降低CSCs耐藥性[41]．例如在神經(jīng)膠質(zhì)瘤CSCs中，EGCG下調(diào)P-糖蛋白的磷酸化水平而抑制癌細(xì)胞自我更新，提高CSCs的藥物敏感性，增強(qiáng)替莫唑胺對(duì)細(xì)胞的殺傷能力[44]．此外，TODEN等人[45]在對(duì)結(jié)腸癌CSCs的研究中發(fā)現(xiàn)，EGCG通過(guò)上調(diào)miR-34a、miR-145和miR-200c等轉(zhuǎn)錄水平來(lái)抑制Notch1、Bmi1、Suz12和Ezh2等基因表達(dá)，提高CSCs對(duì)5-氟尿嘧啶敏感性．

4.2 對(duì)抗癌分子治療CSCs的影響

一些小分子具有很弱的抗癌性，但是聯(lián)合EGCG后卻能夠發(fā)揮出較強(qiáng)的抑制CSCs的效果[46]．CHUNG等人[47]對(duì)乳腺癌CSCs的研究中發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合EGCG和姜黃素能有效降低Stat3磷酸化水平而阻滯Stat3-NFκB信號(hào)通路，降低干細(xì)胞含量，抑制細(xì)胞遷移性和自我更新．PLUCHINO等人[48]將無(wú)抗癌濃度的EGCG(10 μg/mL)和ECG(10 μg/mL)聯(lián)合應(yīng)用處理乳腺癌細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞下調(diào)Ras和Nox-1表達(dá)，下調(diào)ERK1/2磷酸化水平并引起Ras-ERK-Nox信號(hào)傳遞途徑的衰減，下調(diào)EMT和CSCs標(biāo)記物表達(dá)量，降低CSCs(ALDH陽(yáng)性)在細(xì)胞群中的含量．槲皮素是另外一種與EGCG聯(lián)合應(yīng)用具有抑制CSCs特性的活性分子．TANG等人[49]在前列腺癌CSCs的研究中發(fā)現(xiàn)，EGCG聯(lián)合槲皮素能有效抑制CSCs的遷移侵襲性和克隆形成能力，并誘導(dǎo)CSCs發(fā)生凋亡．在隨后的研究中進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，槲皮素聯(lián)合EGCG能引起胰腺癌CSCs中Hedgehog信號(hào)通路衰減，下調(diào)干細(xì)胞標(biāo)記物Nanog、c-Myc和Oct-4的表達(dá)，降低CSCs在細(xì)胞群中的含量[27]．隨后WANG等人[50]的研究還發(fā)現(xiàn)，EGCG聯(lián)合槲皮素能降低Stat3和AKT磷酸化水平而弱化PI3K/AKT信號(hào)通路，下調(diào)抗藥性蛋白MRP1的表達(dá)量，抑制細(xì)胞的侵襲性和單克隆形成能力，降低干細(xì)胞樣細(xì)胞(CD44+/CD24+)含量，并能有效減緩多西紫杉醇的副作用．

5 應(yīng)用新策略

在體液中，EGCG易發(fā)生氧化還原反應(yīng)而失去抗癌活性，不利于臨床應(yīng)用[51]．將EGCG改性或者利用特殊運(yùn)輸方法，能有效解決EGCG活性不穩(wěn)定的問(wèn)題．NARAYANAN的課題小組[52]利用PLGA-Casein納米微球技術(shù)，建立EGCG-紫杉醇藥物緩釋體系，能延長(zhǎng)藥物釋放時(shí)間，有效弱化NF-κB信號(hào)通路傳導(dǎo)途徑而抑制癌細(xì)胞侵襲性．CHIOU等人[53]將EGCG改性成乙酰-EGCG(AcEGCG)增強(qiáng)穩(wěn)定性，更有效抑制皮膚癌CSCs合成蛋白激酶D1(Protein kinase D1，PKD1)，下調(diào)c-Jun、PI3K和AKT的磷酸化水平并弱化PI3K/AKT信號(hào)通路，抑制CSCs標(biāo)記物c-Myc表達(dá)量和癌細(xì)胞致瘤性．CHEN等人[54]通過(guò)化學(xué)合成的方法制備EGCG類(lèi)似物，能有效活化AMPK信號(hào)通路并上調(diào)細(xì)胞抑制因子p21表達(dá)量，減弱mTOR信號(hào)通路的傳遞，減少乳腺癌CSCs含量．將EGCG和放射性納米金-198偶聯(lián)成復(fù)合物，能特異識(shí)別前列腺癌細(xì)胞膜表面受體Laminin 67R，提高癌細(xì)胞表面EGCG-Au198濃度，增強(qiáng)對(duì)CSCs抑制效果．通過(guò)這些應(yīng)用新策略，EGCG抑制CSCs活性得到有效增強(qiáng)，為臨床應(yīng)用提供新途徑．

6 展望

EGCG是綠茶的主要活性成分，具備抑制癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的藥理學(xué)作用，對(duì)癌癥的治療和預(yù)防具備積極作用．腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)的提出，更科學(xué)地解釋了EGCG作用于腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移灶形成的機(jī)理．EGCG通過(guò)弱化Wnt/β-catenin、mTOR、Hedgehog、Notch和AKT信號(hào)通路等CSCs關(guān)鍵信號(hào)傳遞途徑，抑制CSCs侵襲性、自我更新、耐藥性和致瘤性等特性，降低干細(xì)胞樣細(xì)胞含量并特異誘導(dǎo)CSCs發(fā)生凋亡．然而，ECGC應(yīng)用于臨床抗癌還存在著很多問(wèn)題．首先，這些研究大多是基于2D培養(yǎng)技術(shù)，2D培養(yǎng)的CSCs易于分化而失去干細(xì)胞特性，細(xì)胞與EGCG充分接觸而提高CSCs的藥物敏感性，不能如實(shí)反映出EGCG在體內(nèi)真實(shí)的抑制CSCs活性．其次，溶解在磷酸緩沖液中的EGCG易于被氧化，口服EGCG人體吸收率較低，人體吸收后的EGCG易于被體內(nèi)兒茶酚-O-甲酰轉(zhuǎn)移酶甲基化.這些原因?qū)е翬GCG在體內(nèi)活性水平較低，無(wú)法有效發(fā)揮抗癌作用．EGCG改性、納米載體技術(shù)等新應(yīng)用技術(shù)雖然能部分克服這些問(wèn)題，但是這些技術(shù)還只是出于實(shí)驗(yàn)室研究階段，缺少藥理毒理學(xué)研究，臨床數(shù)據(jù)更是不足．因此，未來(lái)的研究方向一方面是利用新的研究模型研究EGCG對(duì)CSCs藥理學(xué)作用，并探索EGCG聯(lián)合一線化療藥物治療CSCs的可行性，結(jié)合臨床數(shù)據(jù)充分驗(yàn)證說(shuō)明；另一方面要注重新型應(yīng)用技術(shù)(例如納米載體)的藥理毒理學(xué)研究，為EGCG應(yīng)用于臨床治療腫瘤提供更為嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù).