苦參堿對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力的影響

郭永梅 曹柳 肖莉萍 楊宇秀 高建華

【摘 要】目的：探討苦參堿對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力的影響。方法：將Morris水迷宮試驗(yàn)達(dá)標(biāo)的18只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組和苦參堿組（15mg·kg-1），每組6只。模型組和苦參堿組大鼠雙側(cè)海馬注射凝聚態(tài)Aβ1-40，正常對(duì)照組分別給予等體積藥物或生理鹽水灌胃，持續(xù) 28d。采用Morris水迷宮測(cè)試行為學(xué)指標(biāo)，觀察大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力均明顯下降；與模型組相比，苦參堿組大鼠Morris水迷宮作業(yè)的錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)減少，記憶能力均明顯增強(qiáng)（P<0.05）。結(jié)論：苦參堿灌胃可以減輕阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力損傷。

【關(guān)鍵詞】苦參堿；阿爾茨海默??；大鼠；記憶力

中圖分類(lèi)號(hào)： R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2018）32-0075-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.32.034

阿爾茨海默?。ˋlzheimers disease，AD）是老年人常見(jiàn)的神經(jīng)變性疾病，是起病隱匿、進(jìn)行性的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病[1]。目前研究表明：β-淀粉樣蛋白（β-amyloid protein，Aβ）的沉積及異常代謝是引發(fā)AD的關(guān)鍵誘因。在許多研究中均發(fā)現(xiàn)：Aβ與神經(jīng)細(xì)胞的凋亡密切關(guān)系，Aβ可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡[2]?？鄥A是（matrine，MAT）由植物苦參的干燥根、莖、植株及果實(shí)等部位，經(jīng)乙醇等有機(jī)溶劑提取得到的活性成分，一般為苦參總堿。該成分具有廣泛的抗腫瘤、抗心率失常及抗炎等作用，臨床上多用于肝炎的治療，且毒副作用小，療效較好[3]。但苦參堿的抗炎作用能否對(duì)AD起到記憶保護(hù)作用，目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用大鼠海馬注射凝聚態(tài)凝聚態(tài)Aβ1-40構(gòu)建AD動(dòng)物模型，通過(guò)給藥觀察苦參堿對(duì)AD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組及實(shí)驗(yàn)處理

健康雄性SD大鼠（清潔級(jí)），體質(zhì)量在250～300 g，購(gòu)自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-2015-0004。經(jīng)Morris水迷宮初篩，淘汰反應(yīng)中過(guò)于靈敏、先天癡呆和游泳姿勢(shì)不良者之后，將18只大鼠隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組、模型組和苦參堿組大鼠，每組6只。大鼠自由飲食，晝夜交替飼養(yǎng)，飼養(yǎng)室溫度保持為15℃～20℃。

1.2 主要試劑和實(shí)驗(yàn)儀器

β-淀粉樣蛋白1-40（Aβ1-40）（購(gòu)于美國(guó)Sigma公司）；苦參堿（購(gòu)于上海克隆生物高技術(shù)有限公司）；ZH-DSG型Morris水迷宮（ 購(gòu)于安徽淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

（1）Aβ1-40孵育 用無(wú)菌生理鹽水，將0.5mgAβ1-40稀釋成濃度為10μg·μl-1的溶液，將恒溫箱溫度調(diào)至37 ℃，孵育1周，使其變?yōu)槟蹜B(tài)Aβ1-40，采用封口膜封口，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）大鼠模型的構(gòu)建[4]用6 %水合氯醛腹腔注射麻醉SD大鼠，將其固定于大鼠腦立體定位儀上。采用Cushman和Pellegrino編著的《大鼠腦立體定位圖譜》所設(shè)計(jì)方法，以前囟為原點(diǎn)，向后4.0mm，中線旁2.0～2.5mm，采用微量進(jìn)樣器在顱骨面下進(jìn)針3.0～3.5mm，每只SD大鼠注射5μl，對(duì)照組按照AD模型組方法，注射生理鹽水5μl?？鄥A組大鼠正常喂養(yǎng)基礎(chǔ)從造模手術(shù)當(dāng)天灌胃苦參堿組15mg·kg-1治療，對(duì)照組及模型組灌胃等劑量生理鹽水，各組共給藥28d。

（3）記憶能力測(cè)試項(xiàng)目[5]SD大鼠造模完成后，進(jìn)行Morris水迷宮作業(yè)實(shí)驗(yàn)：人為將用墨水染成黑色的水池分為四個(gè)象限，選擇其中一個(gè)象限放入一平臺(tái)，將大鼠沿壁依次從不同象限放入池中，記錄大鼠的運(yùn)動(dòng)軌跡，并用軟件處理、分析。①定向航行試驗(yàn)：歷時(shí)5d，前4d為訓(xùn)練，分別從四個(gè)不同象限的池壁中點(diǎn)入水，每次大鼠游泳60s，訓(xùn)練時(shí)任意選擇一入水點(diǎn)，測(cè)其在60s內(nèi)找到平臺(tái)所需的時(shí)間（逃避潛伏期），若大鼠未能尋找到平臺(tái)，則記錄其逃避潛伏期為60s。②空間探索試驗(yàn)：在第6天時(shí)撤除水平臺(tái)，然后任選一個(gè)入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，測(cè)其在120s內(nèi)在原象限的游泳時(shí)間及游泳距離占總距離的百分比。

（4）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，組間比較用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析。

2 結(jié)果

行為學(xué)及記憶能力的改變苦參堿對(duì)AD大鼠定位航行能力及空間探索能力的影響研究顯示，與模型組小鼠潛伏期顯著增加（P<0.01），游泳距離顯著增加（P<0.01），原平臺(tái)象限跨越次數(shù)比顯著減少（P<0.01），原平臺(tái)象限游泳時(shí)間顯著減少（P<0.01）；與模型組比較，苦參堿組及對(duì)照組大鼠潛伏期顯著減少（P<0.01），游泳距離明顯縮短（P<0.05），原平臺(tái)象限跨越次數(shù)比顯著增加（P<0.01），原平臺(tái)象限游泳時(shí)間比顯著增加（P<0.01）。見(jiàn)表。

3 討論

認(rèn)知記憶功能方面的減退是AD病人的重要臨床表現(xiàn)。Morris水迷宮檢測(cè)能較全面地考察動(dòng)物的認(rèn)知過(guò)程，可排除氣味對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，客觀的反映實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的認(rèn)知水平，以其操作簡(jiǎn)便，數(shù)據(jù)記錄準(zhǔn)確，誤差小的特點(diǎn)，被廣泛用于認(rèn)知記憶能力的測(cè)試[5]。大量老年斑、神經(jīng)纖維纏結(jié)和選擇性神經(jīng)元及突觸的丟失是AD病的重要神經(jīng)病理學(xué)特征。本研究表明：苦參堿灌胃可以減輕阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力損傷。

【參考文獻(xiàn)】

[1]雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)AD模型大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[D].南昌：南昌大學(xué)，2010.

[2]雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠海馬突觸后致密物蛋白N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸受體亞基2B和突觸后致密物質(zhì)95的影響[D].南昌：南昌大學(xué)，2010.

[3]黃丹，賴玲.苦參堿劑型的研究進(jìn)展[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，31（6）：1040-1042.

[4]李宜培，彭蕤蕤，柴高尚，等.促紅細(xì)胞生成素對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠記憶能力及其超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2015，35（3）：1620-1623.

[5]于濤，賴世隆.補(bǔ)腎益智方對(duì)實(shí)驗(yàn)性阿爾茨海默病模型大鼠學(xué)習(xí)記憶水平的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2015，35（2）：1030-1033.