絞股藍(lán)皂苷的提取方法研究進(jìn)展

王金丹

摘要：在收集國內(nèi)絞股藍(lán)皂苷提取方法相關(guān)文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，綜述絞股藍(lán)皂苷提取方法的研究進(jìn)展，比較溶劑提取法、超聲輔助法、微波輔助法、微波輔助加酶法、微波超聲雙輔助提取法的優(yōu)點(diǎn)和研究成果，為進(jìn)一步開展絞股藍(lán)相關(guān)研究提供參考。

關(guān)鍵詞：絞股藍(lán)皂苷;提取;溶劑;超聲波;酶;微波

中圖分類號(hào)：R284.2? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? 文章編號(hào)：1674-1161（2018）05-0076-02

絞股藍(lán)（Gynostemma pentaphyllum，GP）為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生草質(zhì)藤木，又名五葉參、七葉膽，為傳統(tǒng)的藥食兼用天然藥植物。研究表明，絞股藍(lán)皂苷是絞股藍(lán)的主要活性成分，具有降血脂、抗誘變、抗衰老、增強(qiáng)免疫力和保護(hù)肝臟等作用。國內(nèi)在絞股藍(lán)皂苷提取方法方面進(jìn)行了大量研究。在查閱收集大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，綜述絞股藍(lán)皂苷提取方法的研究進(jìn)展，為絞股藍(lán)皂苷的開發(fā)利用提供參考。

1 溶劑提取絞股藍(lán)皂苷

采用溶劑法提取絞股藍(lán)皂苷，通常以水、甲醇和乙醇等為提取介質(zhì)，采用浸漬、滲漉、煎煮、回流等提取方式。

陳登豐等人以提取溫度、乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間為考察因素，以絞股藍(lán)醇溶性浸出物、總黃酮含量和總皂苷含量作為綜合評(píng)價(jià)考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選的最佳提取工藝為：提取溫度90 ℃，乙醇濃度60%，料液比1∶50，提取時(shí)間60 min。

宋明珍等人以人參皂苷Rb1為標(biāo)準(zhǔn)品，比較甲醇、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇、水對(duì)絞股藍(lán)有效成分的提取效果，采用分光光度法測(cè)定提取物中絞股藍(lán)總皂苷的含量。結(jié)果表明：95%乙醇提取的總皂苷含量最高，其次為75%乙醇、50%乙醇、甲醇，水提取的總皂苷含量最低。

2 超聲輔助提取絞股藍(lán)皂苷

超聲波輔助提取是指在水浸提的同時(shí)加入超聲波。此法不僅能夠縮短提取時(shí)間、提高提取率，還可避免高溫對(duì)有效成分的影響。

陳通通等人研究乙醇濃度、提取時(shí)間、超聲波功率對(duì)絞股藍(lán)皂苷得率的影響，通過控制變量法篩選單因素，再對(duì)各因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，得出最佳提取工藝為：以85%的乙醇為提取液，超聲功率300 W，提取時(shí)間60 min;其提取率（4.685 7%）遠(yuǎn)高于水提法（1.341 8%），稍低于酶結(jié)合法（5.3942%）。乙醇濃度、超聲功率、提取時(shí)間對(duì)絞股藍(lán)皂苷的提取有較大影響。

3 微波輔助提取絞股藍(lán)皂苷

微波輔助提取是指在水浸提的同時(shí)加入微波。與常規(guī)提取法相比，微波輔助提取具有提取時(shí)間短、溶劑消耗小、提取率高、產(chǎn)品純度高等特點(diǎn)。

王永長等人以五葉絞股藍(lán)的梗和葉、七葉絞股藍(lán)的葉為材料，用水提法和微波輔助醇提法提取絞股藍(lán)總皂苷，并比較提取物中總皂苷含量的差異。結(jié)果表明：七葉絞股藍(lán)葉提取物中的總皂苷含量最高，五葉絞股藍(lán)葉次之，五葉絞股藍(lán)梗最低;微波輔助醇提法的效率高于水提法;微波醇提—石油醚萃取純化得到的樣品中總皂苷的含量最高（89.76%）。

4 微波輔助加酶提取絞股藍(lán)皂苷

微波輔助加酶提取采用果膠酶、半纖維素酶、纖維素酶等復(fù)合酶破壁，同時(shí)引入操作簡(jiǎn)單、能耗小、效率高的微波提取技術(shù)，使絞股藍(lán)粉末在快速振動(dòng)的微波電磁場(chǎng)中吸收電磁能，利用瞬間的內(nèi)外壓力差使細(xì)胞破裂，增加絞股藍(lán)皂苷的溶出率。

張笛等人研究微波輔助酶法提取絞股藍(lán)皂苷的工藝，以改善傳統(tǒng)水提法的得率。采用響應(yīng)面法確定復(fù)合酶最佳配比為：果膠酶∶半纖維素酶∶纖維素酶（質(zhì)量比）為4∶5∶5;通過單因素試驗(yàn)結(jié)合Box-Behnken設(shè)計(jì)法，確定提取的主要影響因素為復(fù)合酶添加量、酶解溫度、酶解時(shí)間、微波時(shí)間，在復(fù)合酶添加量1.8%、酶解溫度52 ℃、酶解時(shí)間2 h、微波時(shí)間4 min的條件下，絞股藍(lán)皂苷得率最高（7.88%）;與傳統(tǒng)水提法相比，產(chǎn)品得率增加68.00%，且提取溫度較低，工藝可操作性強(qiáng)。

5 酶法輔助提取絞股藍(lán)皂苷

酶法提取具有快速、高效、反應(yīng)時(shí)間溫和、易于控制等諸多優(yōu)點(diǎn)。在提取過程中，為使酶的活性達(dá)到最大值，必須嚴(yán)格控制酶反應(yīng)的酶添加量和時(shí)間，因此對(duì)添加量和時(shí)間有較高的要求。常用的提取酶有蛋白酶、纖維素酶、果膠酶，均具有較好的酶解效果。

伊長文以安徽野生絞股藍(lán)為原料，采用纖維素酶預(yù)先處理原料后，用酒精浸提獲得總皂苷提取液，并以齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照，利用分光光度法對(duì)提取液進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗(yàn)，對(duì)絞股藍(lán)總皂苷的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳工藝條件為：用0.5%纖維素酶在55 ℃下酶解1 h，用體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇（料液比1∶30）于70 ℃下提取25 min，絞股藍(lán)總皂苷的最大提取率為3.051%。

6 微波超聲雙輔助提取絞股藍(lán)皂苷

將微波—超聲波提取方法結(jié)合起來，通過合理優(yōu)化使多種作用產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，既可避免單一提取方法的固有缺點(diǎn)，還能進(jìn)一步提高提取效率，具有高效、節(jié)能的優(yōu)點(diǎn)。

尤秀麗等人以絞股藍(lán)為原料，采用微波超聲雙輔助提取皂苷。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化提取工藝。結(jié)果表明：微波超聲雙輔助提取最優(yōu)工藝參數(shù)為微波功率400 W、超聲時(shí)間60 min、乙醇體積濃度80%、超聲溫度51 ℃、微波時(shí)間117 s、液料比28∶1（mL/g）;此條件下，絞股藍(lán)皂苷提取率為7.05%，與預(yù)測(cè)值的相對(duì)誤差為0.57%，與預(yù)測(cè)值相吻合。

程軼群等人采用響應(yīng)面法優(yōu)化絞股藍(lán)總皂苷的超聲—微波聯(lián)合提取工藝，并分析超聲、微波間協(xié)同作用效果。結(jié)果表明：最佳提取工藝為超聲功率50 W、微波功率613 W、微波時(shí)間145 s、提取溫度62 ℃、浸提時(shí)間12.8 min;此條件下，絞股藍(lán)皂苷得率為24.08±0.37 mg/g;超聲、微波協(xié)同作用顯著，且協(xié)同作用階段在提取過程中起主要作用。

7 其他提取方法

除上述提取方法外，還有一些研究采用其他提取技術(shù)，如動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流提取、減壓內(nèi)部沸騰法提取、微生物發(fā)酵提取等，均取得了較好的提取效果。

易克傳等人在中試條件下，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)考察不同因素對(duì)絞股藍(lán)皂苷提取得率的影響，探討動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流提取絞股藍(lán)皂苷的最佳工藝。結(jié)果表明：動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流提取絞股藍(lán)皂苷最佳條件為提取溶劑溫度80 ℃、料液比1∶35（g/mL）、提取時(shí)間50 min;此條件下，絞股藍(lán)提取物平均得率為33.95%，皂苷得率為8.90%。

翁艷英等人通過單因素試驗(yàn)分析減壓內(nèi)部沸騰法提取絞股藍(lán)總皂苷的最佳工藝條件為：取5.0 g絞股藍(lán)粉末，加體積分?jǐn)?shù)為70%的解吸劑（乙醇）8 mL，料液比1∶14（g/mL），于45 ℃下提取6 min，此條件下總皂苷提取率為5.35%;與傳統(tǒng)水提取法相比，該方法提取速度提高10倍，提取溫度及能耗較低。

楊婧娟等人以常規(guī)乙醇回流法、酶法及微生物發(fā)酵法提取絞股藍(lán)總皂苷，并比較3種方法的總皂苷含量、單體皂苷組分和抗氧化活性。結(jié)果表明：復(fù)合酶法提取法的絞股藍(lán)總皂苷含量達(dá)7.69%，比回流法提高31.00%，但皂苷組分轉(zhuǎn)化未見顯著效果;微生物發(fā)酵提取破壁效果最佳，提取物中絞股藍(lán)總皂苷含量達(dá)8.34%，比回流提取法相對(duì)提高了42.10%;經(jīng)發(fā)酵處理后，絞股藍(lán)總皂苷中活性更強(qiáng)的次級(jí)苷組分（如絞股藍(lán)皂苷V-AH等）含量增加，對(duì)清除DPPH·的IC50值由1.544 mg/mL降至0.562 mg/mL，AEAC值提高至236.299±12.785 mg VC/g固形物。

8 結(jié)語

絞股藍(lán)具有營養(yǎng)豐富、藥食同源的特性，備受國內(nèi)外關(guān)注。絞股藍(lán)皂苷是絞股藍(lán)的有效成分之一。通過試驗(yàn)研究對(duì)比可知，不同提取方法和條件對(duì)絞股藍(lán)皂苷提取率影響較大，因此，開展絞股藍(lán)皂苷提取工藝研究對(duì)于絞股藍(lán)資源的進(jìn)一步開發(fā)利用具有重要意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳登豐，何孝金，魏道智.多指標(biāo)綜合評(píng)分法優(yōu)化絞股藍(lán)乙醇提取工藝[J].海峽藥學(xué)，2017，29（10）：10-12.

[2] 張笛，曾慶梅，王琳，等.微波輔助酶法提取絞股藍(lán)皂苷工藝優(yōu)化[J].食品科學(xué)，2016（12）：1-6.

[3] 伊長文.酶法協(xié)同提取絞股藍(lán)總皂苷工藝優(yōu)化[J].食品科技，2015（10）：201-204.

[4] 尤秀麗，鄭建忠，陳熔，等.響應(yīng)面法優(yōu)化絞股藍(lán)皂苷微波輔助-超聲提取工藝[J].食品研究與開發(fā)，2016，37（12）：52-56.

[5] 程軼群，張帆，周守標(biāo)，等.超聲—微波聯(lián)合提取絞股藍(lán)皂苷工藝優(yōu)化及協(xié)同作用[J].分析食品與機(jī)械，2016，32（9）：135-140.

[6] 楊婧娟，何少貴，趙夢(mèng)琦.不同方法提取絞股藍(lán)總皂苷的比較研究[J].食品工業(yè)科技，2016，37（16）：269-272.

Research Progress on Extraction Methods of Gypenosides

WANG Jindan

（Benxi Chemical Industry School， Benxi Liaoning 117004， China）

Abstract： On the basis of collecting related literatures about the extraction methods of Gypenosides in China， this paper summarized the research progress of Gypenosides extraction method. The advantages and research results of solvent extraction， ultrasonic assisted extraction， microwave assisted extraction， microwave assisted enzymatic extraction and microwave assisted ultrasonic double assisted extraction were compared， in order to provide the reference for further research on Gypenosides.

Key words： Gypenosides; extraction; solvent; ultrasonic wave;enzyme; microwave