小鵝瘟實驗室診斷及其生物制品

劉艷霞

（遼寧益康生物股份有限公司，遼陽 111000）

0 引言

小鵝瘟是由小鵝瘟病毒引起的一種雛鵝病毒性傳染病，表現(xiàn)為急性或者亞急性敗血癥。該病具有高度的傳染性和致死率，是目前困擾養(yǎng)殖戶的一個重要疾病。小鵝瘟與鵝病毒性腸炎具有極為相似的臨床癥狀以及流行特點，在診斷時較難區(qū)分，而且小鵝瘟如果與其他疾病發(fā)生混合感染，就更難以進(jìn)行確切的診斷。因此，不能僅依靠其流行特點、臨床癥狀以及病理解剖進(jìn)行小鵝瘟的診斷，還需要采用實驗室的診斷方法進(jìn)行確診。

1 實驗室診斷

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，小鵝瘟病毒的實驗室檢測方法也取得了很大的進(jìn)步，由原來傳統(tǒng)的檢測方法逐漸向分子生物學(xué)技術(shù)快速發(fā)展，為小鵝瘟的診斷提供了新的技術(shù)保障。小鵝瘟的實驗室檢測方法主要有病毒的分離與鑒定、電鏡檢測、PCR技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)等。

1.1 病毒分離與鑒定

小鵝瘟病毒能在鵝胚以及番鴨胚細(xì)胞中增殖并導(dǎo)致細(xì)胞的病變。將疑似病鵝的肝與腸混合并充分研磨后溶解制成混合懸液，反復(fù)凍融，然后向混合懸液中加入青霉素，采用離心機(jī)進(jìn)行高速離心，將離心后的上清液接種到鵝胚以及番鴨胚的原代細(xì)胞培養(yǎng)物中進(jìn)行培養(yǎng)，一段時間后可以明顯看到細(xì)胞出現(xiàn)病變。通過對細(xì)胞病變進(jìn)行檢測即可判斷疑似病鵝是否患有小鵝瘟[1]。

1.2 電鏡檢測

對病鵝的腸內(nèi)容物或者糞便進(jìn)行負(fù)染色后采用透射電鏡進(jìn)行觀察，發(fā)病初期病鵝的病料中可以觀察到一定數(shù)量的病毒粒子，而發(fā)病后期的病鵝，其病料內(nèi)的抗體與病毒粒子相結(jié)合形成了一種免疫復(fù)合物，這種免疫復(fù)合物會將病毒粒子聚集在一起，更容易通過電鏡檢測出來。

1.3 PCR技術(shù)

PCR技術(shù)是目前最常用的小鵝瘟病毒檢測方法。通過PCR技術(shù)，可以在幾小時內(nèi)得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，即使極其微量的小鵝瘟病毒也能夠檢測出來。但是運用PCR技術(shù)進(jìn)行診斷時需要將鵝胚多次傳代后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)以及病毒的分離，這一過程有可能導(dǎo)致樣品被感染而得到錯誤的檢測結(jié)果。

1.4 膠體金免疫層析技術(shù)

膠體金免疫層析技術(shù)是一種將層析分析以及免疫膠體金技術(shù)結(jié)合形成的，通過肉眼觀察顯色結(jié)果的免疫學(xué)的快速檢測技術(shù)。目前，利用單克隆抗體制備的小鵝瘟病毒的膠體金檢測試紙條以及通過小鵝瘟的VP3蛋白建立的小鵝瘟抗體的膠體金檢測方法已經(jīng)成功上市。

1.5 免疫熒光抗體技術(shù)

免疫熒光抗體技術(shù)是指將抗體或者抗原用熒光素進(jìn)行標(biāo)記后，當(dāng)其遇到相對應(yīng)的抗原或者抗體會相互結(jié)合形成一種帶有熒光素的復(fù)合物，通過顯微鏡對這種復(fù)合物進(jìn)行觀察達(dá)到檢測的效果。如Holmes[2]等將抗番鴨的小鵝瘟病毒單抗腹水標(biāo)記FITC制成了抗小鵝瘟病毒的熒光抗體，研制出了檢測小鵝瘟病毒抗原的免疫熒光方法。

2 生物制品

小鵝瘟的生物制品根據(jù)用途的不同可分為預(yù)防用生物制劑、治療用生物制劑以及診斷用生物制劑，下面對這3類生物制品的研究進(jìn)展進(jìn)行具體的介紹。

2.1 預(yù)防用生物制劑

小鵝瘟的預(yù)防用生物制品主要是指疫苗。

2.1.1 滅活疫苗

滅活疫苗是指選擇人工培養(yǎng)的免疫原性優(yōu)良的病原微生物，采用一定的手段殺死這些病原微生物的同時仍然保留其免疫原性，然后加入蜂膠、鋁膠以及白油等佐劑制成的一種疫苗。用蜂膠制成的小鵝瘟滅活疫苗在注射5 d后就可以檢測到抗體；用白油制成的小鵝瘟病毒油乳劑滅活疫苗在1—6個月內(nèi)其保護(hù)率可以達(dá)到100%[3]。

2.1.2 活疫苗

活疫苗是指利用免疫原性優(yōu)良的弱毒株制成的含有活病原體的疫苗，主要包括鵝胚化雛鵝疫苗、鵝胚化種鵝疫苗以及鴨胚化小鵝瘟疫苗。如陳伯倫等用鴨胚弱化的小鵝瘟病毒制成的弱毒疫苗對種鵝進(jìn)行免疫接種后，其保護(hù)率為100%。

2.1.3 基因工程疫苗

基因工程疫苗是將抗原表位富集區(qū)的編碼基因改造后插入真核表達(dá)載體并導(dǎo)入動物體內(nèi)刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)，使機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答而對機(jī)體進(jìn)行保護(hù)的疫苗。如Lousberg[4]等利用小鵝瘟的VP3基因制成了小鵝瘟VP3基因疫苗，該疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的淋巴細(xì)胞免疫功能在不同時間段都顯著高于普通活疫苗。

2.2 治療用生物制劑

2.2.1 高免血清

高免血清又稱為抗血清，是一種含有高效價的特異性抗體的動物血清，這種血清可以對相應(yīng)的疾病進(jìn)行被動免疫、治療以及預(yù)防。小鵝瘟的高免血清對其發(fā)病具有非常好的治療效果。如李琳等采用小鵝瘟抗原高免馬匹后制得了小鵝瘟馬源高免血清，試驗結(jié)果表明，其對小鵝瘟的治愈率高達(dá)92.87%。

2.2.2 卵黃抗體

卵黃抗體是指從免疫注射的產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)的蛋黃中提取出的可以用于相應(yīng)疾病預(yù)防以及治療的抗體[5]。如劉力威等利用海蘭蛋雞制備了雞抗小鵝卵黃抗體并對其治療效果進(jìn)行了測定，結(jié)果表明卵黃抗體對小鵝瘟具有良好的治療效果。張英等通過對鵝免疫接種小鵝瘟強(qiáng)毒尿囊液后收集其免疫鵝卵并提取出卵黃抗體，通過對患病雛鵝進(jìn)行卵黃抗體的治療，發(fā)現(xiàn)卵黃抗體具有明顯的治療效果。

2.3 診斷用生物制劑

2.3.1 診斷抗原

診斷抗原是用已知病原微生物、寄生蟲的組分、浸出物以及代謝產(chǎn)物制成的用于檢測血液中相應(yīng)抗體的抗原。利用這些抗原與相應(yīng)抗體能夠發(fā)生反應(yīng)這一特性可以達(dá)到對疾病診斷的目的。鄭大恒等制備了小鵝瘟病毒的沉淀抗原，這種沉淀抗原僅與小鵝瘟陽性血清能發(fā)生特異性反應(yīng)。

2.3.2 診斷抗體

診斷抗體主要是指針對疾病標(biāo)志物分子的抗體。診斷抗體被廣泛應(yīng)用于體外診斷試劑盒，如酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫層析技術(shù)等。

3 結(jié)束語

小鵝瘟作為一種具有高傳染性與致死率的疾病，對其診斷以及防治尤為重要。目前，國內(nèi)外科研工作者在小鵝瘟的實驗室診斷方面取得了極大的研究進(jìn)展，獲得了電鏡檢測、PCR技術(shù)以及膠體金免疫層析技術(shù)等可以快速診斷小鵝瘟的檢測方法。此外，小鵝瘟疫苗、高免血清以及卵黃抗體等生物制品的應(yīng)用可以有效的預(yù)防和控制小鵝瘟這一疾病的發(fā)生和流行，為我國小鵝瘟的綜合防控奠定了堅實的基礎(chǔ)。