陰性種豬免疫豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗抗體變化

許光勇,王朝軍,楊漢春

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,北京 海淀 100193;2.北京養(yǎng)豬育種中心,北京 海淀 100194)

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS),俗稱“豬藍(lán)耳病”,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種臨床上以妊娠中后期母豬流產(chǎn)、早產(chǎn),窩均產(chǎn)木乃伊胎、死胎和弱仔數(shù)增多,生長(zhǎng)豬伴隨呼吸道疾病等為主要特征的病毒性傳染病[1]。自1987年P(guān)RRS首次在美國(guó)發(fā)生開始,相繼于1990年在以德國(guó)為代表的歐洲國(guó)家暴發(fā)或出現(xiàn),1995年在中國(guó)出現(xiàn),隨后以日本、韓國(guó)等為代表的亞洲國(guó)家也陸續(xù)報(bào)道,直至2006年P(guān)RRS在中國(guó)呈現(xiàn)大面積暴發(fā)與流行,使中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)損失慘重,近10年來PRRS持續(xù)并長(zhǎng)期影響中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展[2-5]。由于國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖環(huán)境相對(duì)復(fù)雜,PRRS防控一般都是采取綜合措施,疫苗干預(yù)就是其中一項(xiàng)重要舉措,故探索PRRS活疫苗接種陰性種豬群后抗體變化規(guī)律具臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)豬 2016年3月北京養(yǎng)豬育種中心新引進(jìn)800頭祖代后備種豬,經(jīng)疾病篩查表明PRRS抗體陰性。按豬舍內(nèi)均勻分布采樣原則,挑選110～230日齡后備公、母豬各75頭進(jìn)行連續(xù)追蹤前腔靜脈采集血液。鑒于肢蹄問題、自然死亡、育種規(guī)劃等原因淘汰,截止2017年12月3日,剩余公豬36頭,母豬57頭。

1.2 方法 2016年4月11日對(duì)全部后備種豬肌肉注射PRRS活疫苗(ATCC VR-2 332株)1頭份,2017年1月20日母豬二免PRRS活疫苗1頭份。

公豬于首免后3、6、10、20、27、33、39、43、59、70 周和85周前腔靜脈采血,母豬于首免后3周、6周、10周、20 周、27 周、33 周、39 周以及二免后 3、16、30、46周前腔靜脈采血,分離血清并于-20℃冰箱保存。

1.3 PRRS抗體檢測(cè) PRRS X3抗體檢測(cè)試劑盒,美國(guó)IDEXX公司,批號(hào)J661。參照試劑盒說明書進(jìn)行操作,試驗(yàn)成立條件：陽性對(duì)照平均值減去陰性對(duì)照平均值必須大于或等于0.15,同時(shí)陰性對(duì)照平均值必須小于或等于0.15。結(jié)果判定：如果S/P值低于0.40,樣品判定為PRRSV抗體陰性;如果S/P值大于或等于0.40,樣品判定為PRRSV抗體陽性。S/P值=(樣本A650- 陰性對(duì)照平均值)/(陽性對(duì)照平均值 - 陰性對(duì)照平均值),CV值又稱離散度=(標(biāo)準(zhǔn)偏差/樣本平均值)×100%。

2 結(jié)果與分析

2016年4月至2017年12月試驗(yàn)期間,試驗(yàn)豬共采血11次,分離血清進(jìn)行PRRS抗體檢測(cè),結(jié)果見表1～4。

表1 公豬PRRS抗體統(tǒng)計(jì)結(jié)果

由表1可知,公豬接種PRRS減毒活疫苗,S/P平均值3周為1.51,20周為0.56,27周為0.27;PRRS抗體陽性率3周為100%,20周為61.11%,27周為22.22%;S/P平均值和抗體陽性率均隨時(shí)間逐漸降低。因此,公豬免疫20周能提供有效地抗體保護(hù)。CV值3周為40%、再逐漸升高并于39周達(dá)到峰值123%,之后維持在90% ～112%。

表2 母豬PRRS抗體統(tǒng)計(jì)結(jié)果

由表2可知,母豬首次接種PRRS減毒活疫苗,S/P平均值3周為1.61,39周為0.39;PRRS抗體陽性率3周為100%,20周為73.68%,27周為47.37;S/P平均值和抗體陽性率也隨時(shí)間逐漸降低。綜合S/P平均值和抗體陽性率,認(rèn)為母豬首免提供有效地保護(hù)時(shí)間為20～27周。CV值3周為34%,再逐漸升高并于27周到峰值96%。間隔40周二免PRRS減毒活疫苗,S/P平均值和抗體陽性率再次升高,即二免3周升高至0.73和64.91%,隨后逐漸下降,16周降為0.31和26.32%;二免3周CV值保持在75%,之后維持在62% ～66%。所以,二免能夠提高母豬S/P平均值和抗體陽性率。

表3 公豬PRRS抗體S/P值區(qū)間分布

由表3可知,公豬接種PRRS減毒活疫苗,S/P值高于2.5僅出現(xiàn)于3周,比例為8.33%。20周以內(nèi)S/P值在0.4～2.0比例超過60%。S/P值小于0.4所占比例隨時(shí)間逐漸升高,85周達(dá)100%。

表4 母豬PRRS抗體S/P值區(qū)間分布

由表4可知,母豬接種PRRS減毒活疫苗,首免3周、6周以及二免3周都出現(xiàn)了S/P值高于2.5。首免20周、27周以及二免3周S/P值在0.4～2.0比例分別為71.93%、45.61%和61.4%。S/P值小于0.4所占比例隨時(shí)間逐漸升高,二免3周有一次降低。

3 討論

S/P值一般用來評(píng)判陰性豬接種PRRS疫苗的免疫效果,陽性豬感染PRRSV程度。本試驗(yàn)后備種豬(包括公豬和母豬)接種PRRS減毒活疫苗前PRRS抗體均是陰性,S/P平均值首免3周公豬和母豬分別升至1.51和1.61,與胡成玉報(bào)道的免疫VR2332株P(guān)RRS活疫苗后21天S/P平均值為1.59基本一致[6]。S/P平均值首免6周公豬和母豬已分別降至1.10和1.16,之后隨時(shí)間逐漸降低。由此可知,S/P平均值公豬和母豬均是首免3周最高,6周已下降,故初步判斷公豬和母豬的S/P平均值應(yīng)該在6周之前就已經(jīng)達(dá)到峰值。公豬20周和27周S/P平均值分別為0.56和0.27,母豬39周S/P平均值為0.39,說明公豬和母豬S/P平均值降至0.4的臨界值時(shí)間分別處于接種PRRS活疫苗第20～27周之間和39周。母豬間隔40周再次接種PRRS減毒活疫苗,二免3周S/P平均值升高至0.73,16周降至0.31,之后隨時(shí)間逐漸降低,故初步判斷母豬S/P平均值在二免16周之前就降到了臨界值0.4。首次接種PRRS活疫苗后,公豬和母豬S/P平均值在6周之后均呈現(xiàn)下降趨勢(shì),但公豬S/P平均值始終較母豬要低,這可能是母豬比公豬對(duì)PRRS活疫苗產(chǎn)生的免疫應(yīng)答更好。母豬二免后比公豬的S/P平均值明顯要高,說明二免PRRS活疫苗能夠有效提高豬群S/P值,本結(jié)果與施開創(chuàng)等報(bào)道的接種PRRS活疫苗能夠提高抗體水平結(jié)果一致[4]。

抗體陽性率是指S/P值大于或等于0.4所占的比例,能反應(yīng)疫苗免疫效果,豬只感染PRRSV情況。首免10周抗體陽性率始終保持在90%以上,與曾顯成等報(bào)道的免疫豬場(chǎng)公豬陽性率最高為94.3%相符[7],與李明波等人報(bào)道的35日齡仔豬免疫后4周抗體陽性率為85%也有所差別[8],這些可能與采樣時(shí)間和選擇的試驗(yàn)豬種類不同所導(dǎo)致。隨著時(shí)間抗體陽性率逐漸降低,公豬和母豬抗體陽性率分別于20周和27周降到61.11%和47.37%。母豬二免抗體陽性率會(huì)有一個(gè)上升階段,之后再次下降。由表1和表2可知,母豬抗體陽性率較公豬始終要高。

CV值又稱離散度,主要是指取值之間的差異程度,用來衡量風(fēng)險(xiǎn)大小。首免3周公豬和母豬CV值分別為40%和34%,均屬最低水平,之后隨著時(shí)間推移離散度越來越高,公豬于39周達(dá)到峰值123%,母豬于27周達(dá)到峰值96%。母豬二免后CV值處于62% ～75%,而同期公豬CV值維持在90%～112%高水平區(qū)間。若CV值以60%為臨界值,公豬和母豬均于首免20周達(dá)到臨界值,母豬二免后除3周外其他時(shí)間均處于60%附近。由此初步判斷,公豬和母豬在首免20周以內(nèi)抗體整齊度較好;母豬二免后CV值較公豬低,說明二免能夠降低抗體離散度,使豬群抗體水平更加整齊。這與曾顯成等報(bào)道的接種過PRRS疫苗的豬場(chǎng)抗體離散度明顯低于非免疫豬場(chǎng)的結(jié)果一致[7],與李明波等人報(bào)道的CV值在48% ～56%有所差異[8],可能與豬場(chǎng)PRRSV感染背景有關(guān),本試驗(yàn)豬場(chǎng)生物安全較高,不存在野毒感染情況。

豬只個(gè)體S/P值區(qū)間分布能更加精確輔助判定豬群感染PRRSV程度和豬群健康管理,其中S/P值小于0.4表明PRRS抗體陰性,0.4～2.0是陽性豬場(chǎng)比較理想的狀態(tài),2.0～2.5為選擇性區(qū)間,高于2.5一般判定為感染PRRSV野毒或免疫了高致病性毒株疫苗。按照豬群健康程度,0.4～2.0還可細(xì)分為0.4～1.0、1.0～1.5和1.5～2.0區(qū)間,根據(jù)企業(yè)需求可以選擇不同標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作與分析。后備種豬接種PRRS減毒活疫苗后,公豬和母豬均于3周出現(xiàn)S/P值高于2.5的個(gè)體,但所占比例不高,并迅速下降。由表3和表4可知,首次接種PRRS活疫苗,公豬和母豬S/P值處于0.4～2.0比例都是先增后減的趨勢(shì),均于10周達(dá)到最大。公豬S/P值小于0.4所占比例在20周和27周分別達(dá)到38.89%和77.78%,說明首免后第20～27周時(shí)間有大量的公豬抗體變?yōu)殛幮?并于85周完全轉(zhuǎn)陰。母豬S/P值小于0.4所占比例在20周和27周也分別達(dá)到26.32%和52.63%,其變化規(guī)律與公豬基本相同;二免3周,母豬S/P值小于0.4所占比例再次降低至35.09%,隨后逐漸升高,說明二免能夠提高抗體陽性率。對(duì)比公豬和母豬免疫效果,母豬抗體陽性率較公豬始終要高,這與前面所提到的母豬比公豬對(duì)PRRS活疫苗的免疫應(yīng)答更好是相吻合的。

本試驗(yàn)結(jié)果表明,陰性種豬(公豬和母豬)接種PRRS活疫苗,20周抗體陽性率維持在60%以上,S/P平均值處于0.4以上,CV值位于60%范圍,S/P值處于0.4～2.0區(qū)間比例在60%以上,故認(rèn)為陰性種豬接種PRRS活疫苗20周內(nèi)免疫效果良好。