畜禽飼料中霉菌毒素的檢測

張文英

（黑龍江省海倫市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，黑龍江 海倫 152300）

霉菌毒素具有很多種類，并在自然界中廣泛分布，常會污染飼料。當霉菌污染飼料后就會導致其含有大量的霉菌毒素，從而能夠導致畜禽發(fā)生中毒死亡，或者導致畜禽的免疫機能降低，長時間處于亞健康狀態(tài)，生產(chǎn)性能下降，引起免疫失敗，并經(jīng)常發(fā)病，還可經(jīng)由肉、蛋、奶等食物鏈危害人類健康，實際工作中應該注意采取相應的檢測手段。

1 主要霉菌毒素

飼料、油籽、谷物以及加工的糧食容易污染霉菌，特別是在溫度超過25℃，相對濕度達到80%以上時，通風較差以及陰雨季節(jié)，更容易污染。在飼料原料或者飼料中常見的霉菌主要是曲霉菌、鐮刀菌和青霉菌。這些霉菌通?？僧a(chǎn)生黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、單端孢霉烯（T-2毒素）、嘔吐霉素、腐馬菌素、串珠鐮刀菌素等。這些霉菌及其產(chǎn)生的毒素常會導致飼料中的常用原料被污染，如曲霉菌分泌的黃曲霉毒素 B1（AFB1）、黃曲霉毒素 B2（AFB1）、黃曲霉毒素 G1（AFG1）以及黃曲霉毒素 G2（AFG2），是導致大部分數(shù)動物發(fā)生霉菌毒素中毒的主要原因；青霉菌屬中的多個菌種分泌的赭曲霉毒素，對家禽具有十分強的毒力，且常與黃曲霉毒素一起污染飼料。

每種霉菌或者霉菌毒素基本不會單獨存在，常是同時存在2種或者多于2種，多種毒素共同產(chǎn)生的毒性作用會明顯大于任何單一毒素產(chǎn)生的毒性，普遍將這種作用稱為霉菌毒素的相乘作用。動物吸收霉菌毒素后會進入血液，并通過血液循環(huán)輸送到全身各處，甚至是侵入胎盤。

2 常用的檢測方法

2.1 肉眼觀測 在畜禽飼養(yǎng)過程中，如果出現(xiàn)減少采食，飼料結塊谷物和飼料發(fā)熱，顏色變暗，以及散發(fā)出較小異味等情況，就可懷疑飼料可能發(fā)生霉變。飼料及其污染霉菌的菌絲體能夠縱橫交織，編織成菌絲蛛網(wǎng)狀物，這種結構導致飼料形成結塊。在肉眼觀察發(fā)現(xiàn)這些菌絲網(wǎng)狀物之前，菌絲體就已經(jīng)在飼料中大量生長繁殖，由此說明其中已經(jīng)含有霉菌毒素。因此，判斷飼料發(fā)生霉變一種最簡易實用的方法就是飼料存在結塊。

2.2 顯微鏡檢測 不同霉菌菌落會形成的特有形態(tài)，并具有不同的生物學特征，通過光學顯微鏡觀察能夠進一步確認。曲霉屬菌落可呈多種顏色，表面通常呈絨毛狀，開始時呈灰白色或者白色，但形成孢子后就會呈現(xiàn)不同顏色，通常不同菌種有所不同；青霉屬菌落通常呈灰綠色，且菌落呈4種不同形態(tài)，即束狀、絨狀、繩狀、絮狀等，部分菌落會存在放射性皺褶，能夠形成同心輪紋，部分在基質(zhì)表面存在滲出液，且在顯微鏡下能夠看到特殊的帚狀體結構；鐮刀菌屬菌落通常呈白色絨毛狀，可分泌可溶性色素，能夠形成2種類型的分生孢子，在顯微鏡下可見小型分生孢子主要呈圓形、柱形、卵形以及梨形等，而大型分生孢子通常都呈鐮刀形。

2.3 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA） 該法是根據(jù)抗原抗體反應原理，先在酶標板上加入已知抗原，再加入酶標記抗體以及樣品提取液，完全混合，經(jīng)過充分反應再加入去離子水將多余的抗體洗去，接著加入酶的底物就會形成有色物質(zhì)，然后加入終止液來終止反應，之后即可使用酶標儀對酶底物的降解量進行測定，并根據(jù)標準曲線計算出樣品中的抗原量。例如，常用ELISA法檢測黃曲霉毒素B1、煙曲霉毒素。該法能夠對樣品進行凈化處理，能夠快速檢測，操作簡單，費用低，在對大批量樣品進行快速篩選時使用。

2.4 熒光檢測法（FLD） 該法一般同免疫親和柱配合應用，也是美國AOAC規(guī)定的標準檢測方法，我國國標（GB/T18979-2003）也使用該法檢測黃曲霉毒素的含量。FLD方法是先對樣品用甲醇/水提取，接著進行過濾稀釋，之后再使用免疫親和柱層析（存在黃曲霉毒素特異抗體）進行凈化，然后使用超純水將雜質(zhì)除去，同時洗去甲醇，最后再添加溴溶液，衍生后使用熒光光度計進行測定。一般來說，通常使用該法來檢測玉米中赤霉烯酮的含量。該法操作快捷、費用較低，不需要使用霉菌毒素的標準品，避免傷害工作人員，一般是快速篩選霉菌毒素使用的方法。

2.5 薄層層析法 (TLC) 該法是測定飼料以及食品中霉菌毒素含量的一種國際規(guī)定的標準方法，其主要原理是對不同的樣品使用想用的提取溶劑對其中所含的霉菌毒素進行提取，接著使用柱層析進行純化，再在薄層板上進行展開分離，最后根據(jù)不同霉菌毒素會產(chǎn)生特有的熒光，再結合熒光斑點大小以及強弱同標準進行比較，由此確定霉菌毒素的具體含量。該法使用設備比較簡單，且容易普及推廣，因此已經(jīng)在國內(nèi)外普遍應用，但該方法需要對樣品進行比較復雜的前處理，且提取和凈化效果相對較差。

3 控制措施

確保飼料、墊料、環(huán)境以及用具等干燥、清潔，避免飼料、飼草發(fā)生霉變。飼料的貯存溫度必須在25℃以下，同時相對濕度要小于85%，避免飼料受潮、發(fā)熱。飼料要定期進行檢查，如果發(fā)生霉變要立即挑除，避免霉菌發(fā)生蔓延的情況。目前，飼料加工行業(yè)中防止飼料發(fā)生霉變的一種比較普遍采用的方式就是在飼料中加入防霉劑，這是一種比較直接并且有效地方法?，F(xiàn)在一般選擇使用的防霉制劑，在飼料加工處理中通常使用丙酸和丙酸鹽類，例如丙酸鈣、丙酸鈉，一般按每1000kg飼料加入1～2kg。實際上，另一種抑制霉菌的比較普遍的方法是使用復合酸。