家畜血吸蟲病毛蚴孵化法的實踐運用

熊家亮 ，謝愛玲 ，彭又新

（1.湖北省荊州市動物疫病預防控制中心，荊州 434020；2.湖北省洪湖市動物疫病預防控制中心，洪湖 433200）

1 糞便毛蚴孵化法原理

人和動物感染血吸蟲后，會隨糞便排出血吸蟲蟲卵。血吸蟲蟲卵具有與一般寄生蟲蟲卵不一樣的特征。其最主要的特點就是成熟蟲卵卵內(nèi)含有毛蚴。血吸蟲蟲卵隨同人和家畜糞便排出體外并在自然環(huán)境中遇到水后，在適當條件下數(shù)小時就會孵出毛蚴。毛蚴在放大鏡下或肉眼觀察可見。利用這一原理，采集家畜新鮮糞便，采用適當?shù)姆椒ǎ刂普莆諚l件，利用水來孵化出毛蚴以診斷血吸蟲[1]。

2 糞便毛蚴孵化法的種類及使用

2.1 尼龍網(wǎng)兜淘洗孵化法（三角燒瓶）

這是最早應用于家畜血吸蟲病診斷的方法。采用兩層尼龍網(wǎng)兜進行淘洗糞便，上層網(wǎng)兜孔大，主要起過濾糞渣的作用；下層網(wǎng)兜孔小，主要起兜住蟲卵的作用；洗好后將下層網(wǎng)兜中的內(nèi)容物到入三角燒瓶中進行孵化。由于此方法操作繁瑣耗時長，在家畜的診斷上早已棄用，但衛(wèi)生部門目前仍在應用。

2.2 頂管法

用一特制的糞杯盛裝糞液，上面再倒插一裝滿清水的試管進行孵化。此種方法操作簡單，我國大部分血吸蟲病流行區(qū)均采用此方法用于家畜血吸蟲病的診斷。湖北省又將此方法稱為“試管倒插孵化法”。此種方法使用塑料糞缽成本低、易搬運。我們荊州市在對家畜實行普查時多使用這種方法。在實踐中，使用頂管法時糞樣需要經(jīng)過淘洗而易導致蟲卵流失。而為提高檢出率按標準或要求實行“一糞三檢”或“三糞三檢”又耗時長效率低。

2.3 直孵法（平底長頸燒瓶）

糞液直接裝入平底長頸燒瓶中，頸的中部放入適量的脫脂棉，再加入清水進行孵化。全國有少數(shù)地方采用此方法用于家畜血吸蟲查病。筆者在實踐中將此種方法用于家畜血吸蟲感染地市級的風險監(jiān)測[2]。操作步驟、耗時及檢出率與試管倒插法相比略優(yōu)，可作為試管倒插法的補充。其缺點是玻璃燒瓶在搬運過程中易破碎。在風險監(jiān)測中，因樣品數(shù)量少采用此法綜合評價仍值得肯定。

3 糞便毛蚴孵化法的實踐操作

3.1 試管倒插孵化法

3.1.1 器械的準備

特制的塑料杯及杯蓋，與杯蓋孔相適應的玻璃試管以及管口上套用的橡皮筋圈，竹筷、40～60孔/吋銅篩、無碘食鹽，其它還有剪刀、膠布、5～10倍放大鏡、水溫計、PH試紙、毛巾、肥皂、糞桶、臉盆、水桶、水瓢、大盛水桶或水缸、大腳盆、試管刷、鬧鐘、臺燈、一次性手套、一次性飯盒、塑料袋、糞檢登記表等。

3.1.2 編號

對所用的塑料糞杯逐一進行編號，每個糞杯都唯一的號碼。用醫(yī)用膠布粘貼編號。

3.1.3 登記

將糞檢登記卡上的內(nèi)容詳細記入糞檢登記表，同時記錄對應的糞杯號，同時將一定量的糞樣放入對應的糞杯中。每個糞杯中家畜的糞量為：牛、馬屬動物糞便50～100 g，豬、羊、犬糞便各30～40 g。

3.1.4 洗糞

將塑料杯內(nèi)加上2/3容量的洗糞用水,用筷子充分攪拌淘洗，而后取出糞篩糞渣，將杯內(nèi)加滿洗糞用水，靜置25～30 min。由于羊糞為顆粒狀，較硬，糞杯中加洗糞水之前需將其弄碎。

3.1.5 換水

靜置到時后倒去糞杯中1/2的糞水，再加滿洗糞用水，靜置15～20 min，此為第1次換水。到時后再倒去糞杯中2/3的糞水，再加滿洗糞用水，靜置15 min此為第2次換水。在實際操作中，溫度較高時可減少1次換水，以縮短洗糞時間及減少工作量，并不影響毛蚴的孵化及觀查效果。

3.1.6 上孵化水

倒去杯中上2/3的糞水，加滿孵化用水,靜置30 min。

3.1.7 蓋杯蓋及孵化

取與杯蓋孔相適應的玻璃試管，裝滿洗糞用水倒插于杯蓋孔上一并蓋在杯上進行孵化。為防止試管下滑，應在試管上纏上適量的橡筋。已加孵化水的糞杯不能放到陽光下直曬，已上試管的糞杯既不能放到陽光下直曬，也不能用電扇吹。如出現(xiàn)糞杯中的糞水上翻到試管中的現(xiàn)象應將試管中的水換成溫度略高的孵化水。

3.2 直孵法的實際操作

3.2.1 器械的準備

平底長頸燒瓶、燒杯（500 ml）、脫脂棉為本方法專用器械，以取代糞杯，所需其他器械與頂管法相同。

3.2.2 操作

將平底長頸燒瓶進行編號，每個長頸燒瓶配一個對應的燒杯。將糞檢登記卡上的內(nèi)容詳細記入糞檢登記表，同時記錄對應的燒瓶號。

取家畜糞便于燒杯中，加入自來水充分攪拌，然后將燒杯內(nèi)加滿水，靜置25～30 min。

將燒杯中的糞液倒去一半，剩余的糞液倒入對應的燒瓶中，未倒干凈的糞渣用孵化水沖洗灌入燒瓶中，將燒瓶頸內(nèi)壁上的糞渣用孵化水沖洗干凈并繼續(xù)向燒瓶中加入孵化水使液面距離瓶口8 cm左右，然后將適量脫脂棉放入頸口中與液面輕輕接觸（要求脫脂棉厚薄均勻，厚度約2 cm左右），在脫脂棉上方輕輕注入孵化水至瓶口，1 h后進行毛蚴觀察。

4 糞便毛蚴孵化法的注意事項

4.1 畜糞的采集和送檢

4.1.1 采集量

畜糞的采集量與每頭家畜檢查所用糞杯數(shù)密切相關(guān)。如果進行一糞三檢，大家畜（牛、馬屬）的采糞量應為200 g，豬100 g，羊和犬50～60 g。

4.1.2 采集方法

一種是拾糞。即采取家畜自然排出的糞便，用一次性筷子或樹枝將其采集。為了避免污染，采糞時所用采糞器具不能連續(xù)使用，要求一具采一頭畜糞，糞樣要新鮮；另一種是掏糞。即用手伸進直腸采糞，最好是戴上橡皮手套進行，每采一頭更換一副手套，如徒手采集，每采完一頭后，必須將手洗凈后再采另一頭，以防交叉污染。

4.1.3 糞樣包裝送檢

采得糞樣可用潔凈容器（如一次性飯盒）盛裝并再用干凈的塑料袋包裝，或者使用兩層干凈的塑料袋包裝，詳細填寫《動物血吸蟲病糞樣送檢登記卡》放入對應的塑料袋中送檢[3]。糞樣送檢登記卡須填寫的內(nèi)容有:鄉(xiāng)(鎮(zhèn))名,村名,組別,畜主姓名,畜別,性別,年齡,特征,家畜編號,送檢時間等。采到糞樣后應立即上送，冬季防止冰凍，夏季防止日曬。

4.2 用水的準備

（1）將自來水放入潔凈無蓋的容器中靜置12 h以上即可作為洗糞和孵化用水。一般于前1 d下午或晚上將自來水放入無蓋的桶、盆或缸中，第2天上午即可作為洗糞和孵化水使用。（2）河水、井水、池塘水用做洗糞和孵化用水必須進行殺滅水蟲和澄清水質(zhì)的處理。其方法是是將水加溫至60℃以上，冷后澄清再用。（3）孵化時水溫須達到15℃以上，否則應升溫。當水溫高于28℃時，洗糞用水中可按1%的比重加入無碘食鹽以抑制洗糞過程中毛蚴過早逸出。（4）由于現(xiàn)今自來水已經(jīng)普遍使用，所以一般不用河水、井水和池塘水作為孵化和洗糞用水。（5）有些地方的自來水并不是按標準生產(chǎn)的，使用前須檢查水中是否有水蟲。

5 毛蚴的觀查及結(jié)果判定

（1）通常情況下牛、羊糞樣于第1、3、5 h各觀察1次，每個樣品每次觀察應在2 min以上。實際操作中，由于時間所限，每個糞杯最多觀查2次。（2）毛蚴的出現(xiàn)時間與水溫關(guān)系密切。水溫較高時，毛蚴出現(xiàn)的時間早，同時毛蚴存活的時間也較短，所以夏季觀察毛蚴的時間要相應地提前并抓緊時間觀察。（3）發(fā)現(xiàn)血吸蟲毛蚴即判定為陽性。在一個試管中有1～5個毛蚴判為+，6～10個為++，11～20個為+++，21個以上為++++。在同一糞樣的幾個試管中，只要在一個試管中發(fā)現(xiàn)一個毛蚴，則該家畜為陽性。（4）毛蚴往往在距水面4cm的范圍內(nèi)活動，灰白色、折光強、梭形，多呈與水面平直或斜向的直線運動。觀察毛蚴應在光線充足的地方進行，為了便于觀察，可襯以黑色背景。（5）觀察時，毛蚴必須與水蟲嚴加區(qū)別?？梢蓵r應用吸管吸取置于載玻片上鏡檢簽別。（6）在光線較暗的環(huán)境中及夜晚進行毛蚴孵化操作時必須補充燈光并達到所需的亮度。（7）為了便于毛蚴的觀查，可在插好試管的糞杯前放置一臺燈以增加亮度。

[1] 林矯矯，胡述光，劉金明．中國家畜血吸蟲病防治[J]．中國動物傳染病學報，2011，19(3):75-81．

[2] 童來保，朱傳剛，陸珂，等．糞便毛蚴孵化法檢測牛血吸蟲病的評價[J]．熱帶病與寄生蟲學，2012，10(1):8-10．

[3] 李亞敏，邱丹，張詠梅，等．豬、牛日本血吸蟲病糞便孵化法毛蚴孵出時間比較[J]．中國獸醫(yī)寄生蟲病，1995(2):32+49．