唐麗華
(黑龍江省哈爾濱市動物衛(wèi)生防疫站,黑龍江 哈爾濱 150040)
引起羊鏈球菌病的病原是鏈球菌屬中C群獸疫鏈球菌。本病主要通過消化道和吸呼道傳染。其重要臨床特征為發(fā)熱、呼吸異常困難,頜下淋巴結(jié)和咽喉腫脹,大葉性肺炎,膽囊腫大,各臟器出血。本病主要發(fā)生于綿羊,山羊也可發(fā)病。
綿羊?qū)Ρ静∽钜赘?,山羊次之。實驗動物中家兔的易感性最?qiáng),少量病菌即可致死。小鼠、鴿等亦可感染。病羊和帶菌羊是主要傳染源。病菌遍布全身,主要由呼吸道排菌。部分慢性經(jīng)過的病羊可成為帶菌者。一旦發(fā)病,常呈現(xiàn)敗血癥。死后可通過肉、骨、皮、毛等散布病菌。傳染途徑主要是呼吸道,其次是皮膚損傷,也有通過羊虱蠅傳播的可能。本病在常發(fā)地區(qū)則多為散發(fā)性;在新疫區(qū)危害嚴(yán)重,多為流行性。若羊鏈球菌與產(chǎn)氣莢膜桿菌、腐敗梭菌或大腸桿菌混合感染羊只,則患病羊的死亡率更高。羊鏈球菌病的流行有者顯著的季節(jié)性,通常冬春季節(jié)(每年11月至次年4月)更易流行。分析其原因,主要是因天氣寒冷、草質(zhì)不良和羊群擁擠,使羊機(jī)體抵抗力減弱而致其發(fā)病。
人工感染的潛伏期為3~10d。發(fā)病初期,精神委頓,食欲不振甚至廢絕,反芻停止,羊體溫升至41℃以上。呼吸急促,50~60次/min,心跳110~160次/min??诹飨?,并混有泡沫。鼻腔流出漿液性鼻漏,以后變?yōu)槟撘骸;佳蜓劢Y(jié)膜充血、流淚,以后流出膿性分泌物。有的病羊眼瞼、唇、頰腫脹。咽喉腫脹,頜下淋巴結(jié)腫大,有時舌腫。糞便變軟,有時帶有黏液或血液。孕羊發(fā)生流產(chǎn)。瀕死前呻吟、磨牙,且有抽搐現(xiàn)象。本病病程較短,最急性病例1d內(nèi)死亡,通常為2~3d,但有極少病例延長到5d以上。
胸型的病程1~2周,主要見于小羊羔,病變特征為漿液性纖維素性肺炎和漿膜炎。
4.1 病料的采集和處理 常根據(jù)不同臨床類型采集不同病料。可采集鼻咽拭、膿液、血液、痰液、分泌物、排泄物、乳汁或內(nèi)臟器官等作為病料。
4.2 分離培養(yǎng) 本菌為兼性需氧菌,在有氧與厭氧的環(huán)境中均能生長,但以有氧時生長較好。本菌在普通培養(yǎng)基中生長不良。在血清肉湯中,長鏈的菌株呈顆粒狀、粉狀或絮狀沉淀,培養(yǎng)基透明。在葡萄糖胱氨酸鮮血瓊脂平板上形成灰白色、半透明或不透明、表面光滑、有乳光的圓形突起的微小菌落。這種光滑型小菌落是由能產(chǎn)生大量透明質(zhì)酸酶、無莢膜物質(zhì)的菌株形成,產(chǎn)生少量透明質(zhì)酸酶并具有明顯莢膜的少數(shù)菌株則形成相當(dāng)大的黏液狀菌落,并隨培養(yǎng)時間延長及干燥變成扁平的皺紋菌落。多數(shù)菌株有溶血能力,本菌在常用的綿羊血瓊脂平板上,生長瘠薄,呈無色、透明、露滴狀的菌落,并可形成β溶血,即在菌落周圍有一個2~4mm寬、界限分明、完全透明的無色溶血環(huán)。
4.3 生化反應(yīng) 由于生化反應(yīng)不規(guī)則,致使生化鑒定在β型溶血性鏈球菌分群上遠(yuǎn)遜于血清學(xué)分群方法,僅具有一定的參考價值。本菌能分解乳糖、蔗糖、蕈糖、楊苷,不分解棉實糖、菊糖和山梨醇等。不液化明膠。不能在0.1%美藍(lán)牛乳中生長;但能在pH 9.6肉湯和6.5%氯化鈉肉湯內(nèi)生長。
4.4 直接鏡檢 本菌為革蘭氏染色陽性、球形或橢圓形球菌。不形成芽胞,多數(shù)無鞭毛,不能運動,但D型某些菌珠有鞭毛,某些菌株有莢膜。常排列成長短不一的鏈狀,其中致病性菌株的鏈較長,非致病性者較短。
對可疑病例可用玻片作凝集試驗及沉淀試驗定群、定性。熒光抗體快速診斷本菌,與常規(guī)培養(yǎng)方法對照,兩者符合率達(dá)65%以上。對鏈球菌進(jìn)行Lancefield血清分群試驗是實驗室鑒定本菌的可靠方法。
現(xiàn)介紹凝集試驗的操作方法。
利用玻片凝集試驗可將溶血性鏈球菌分型。把菌株制成均勻的菌懸液,再與標(biāo)準(zhǔn)血清進(jìn)行凝集反應(yīng),根據(jù)反應(yīng)有無凝集現(xiàn)象進(jìn)行判定。
材料:玻璃板、記號筆、吸管或加樣器。平板抗原由指定單位供應(yīng)。
操作方法:在玻璃板上用記號筆劃方格,每排5格,每格2cm×2cm,第一格記血清號,用吸管或加樣器分別加受檢血清 0.08、0.04、0.02、0.01mL,然后加平板抗原 1 滴(0.03mL),混勻,平板在37℃下作用3~5min,然后判定結(jié)果。
判定結(jié)果:“-”:液體上清液完全混濁,無凝集;“+”:液體上清液混濁,有微量顆粒凝集;“++”:液體稍透明,有可見的凝集顆粒;“+++”:液體幾乎完全透明,有明顯的顆粒凝集;“++++”:液體完全透明,具有大塊及顆粒狀凝集。
注意:在0.08mL格出現(xiàn)“-”時判定為陰性;在0.08mL格出現(xiàn)“++”時為可疑;在0.04mL格出現(xiàn)“++”時判定為陽性。每次試驗必須設(shè)陰性、陽性血清和稀釋液對照,只有對照成立時,方可判定。