鱉甲抗肝纖維化研究進(jìn)展

張 曄，呂金朋，孫佳明，張 輝

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117）

肝纖維化主要是因細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的合成與降解失衡，從而在肝內(nèi)大量沉積所致[1]?，F(xiàn)治療肝纖維化的藥物秋水仙堿、干擾素-γ（IFN-γ）等[2]，雖有療效但同時(shí)存在一定的不良反應(yīng)。鱉甲來源于鱉科動(dòng)物鱉（Trionyx sinensis Wiegmann）的背甲，具有滋陰潛陽、退熱除蒸、軟堅(jiān)散結(jié)的功效[3]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鱉甲能夠改善肝纖維化，且治療效果穩(wěn)定、安全，適合患者長(zhǎng)期服用。本文對(duì)鱉甲治療肝纖維化的物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)制的研究現(xiàn)狀綜述如下。

1 鱉甲抗肝纖維化物質(zhì)基礎(chǔ)

鱉甲作為傳統(tǒng)動(dòng)物藥，主要含有寡肽、氨基酸、多糖、微量元素等物質(zhì)[4]。近代通過國(guó)內(nèi)大量科研人員不斷的探索研究，逐漸明晰了其治療肝纖維化的物質(zhì)基礎(chǔ)。高建榮等[5]對(duì)鱉甲治療肝纖維化的活性成分進(jìn)行篩選，結(jié)果表明，鱉甲中分子量＜6 000的蛋白和肽類物質(zhì)能夠抑制肝星狀細(xì)胞-T6（HSC-T6）的增殖。胡春玲等[6]以鱉甲中改善肝纖維化的小分子肽（NPNPT，m/z542.16）作先導(dǎo)化合物，進(jìn)行Fmac固相合成，同時(shí)檢測(cè)合成肽對(duì)HSC凋亡的影響情況。結(jié)果表明，合成肽能夠顯著地促進(jìn)HSC的凋亡。唐尹萍等[7]利用MTT比色法分別測(cè)定葡萄糖凝膠G-25、G-15分離的8個(gè)活性肽段對(duì)大鼠HSC-T6的增殖作用。結(jié)果表明，Bj66、Bj67肽段具有明顯的抑制作用。因此，鱉甲小分子肽類化合物可能是其發(fā)揮抗肝纖維化作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)一步開發(fā)研究可作為新型的中藥單體在臨床上使用。

2 鱉甲抗肝纖維化作用機(jī)制的研究

2.1 抑制炎癥反應(yīng) 多年的臨床研究證實(shí)，肝損傷患者多數(shù)存在炎癥反應(yīng)，而肝纖維化的產(chǎn)生，一定會(huì)經(jīng)過慢性肝損傷的過程。因此，鱉甲治療肝纖維化的機(jī)制很可能與其對(duì)炎癥因子的調(diào)節(jié)有關(guān)。楊瑩[8]研究發(fā)現(xiàn)，鱉甲寡肽I-C-f-6能夠上調(diào)炎性抑制因子IL-4、IL-10的表達(dá)，抑制腫瘤壞死因子-α（TNF-a）的合成，下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子Kappa B（NF-κB）的表達(dá)，從而提高機(jī)體的抗炎能力。文彬等[9]研究鱉甲煎丸可能通過降低模型大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平，下調(diào)肝臟瘦素（LP）及其受體的表達(dá)，從而減輕炎癥及纖維化程度。孫海濤等[10]研究鱉甲煎丸能夠抑制HSC中NF-κB信號(hào)通路的激活，降低TNF-a基因表達(dá)，從而提高機(jī)體的抗炎能力，使機(jī)體纖維化程度得以改善。

2.2 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的阻斷 目前認(rèn)為，機(jī)體肝臟纖維化的形成與發(fā)展一般是利用TGF-β/Smad信號(hào)通路完成的[11]。因此，若想改善肝纖維化的進(jìn)程，可以通過阻斷TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的方法來完成。高建蓉等[12]研究發(fā)現(xiàn)，鱉甲水煎液可以抑制HSC的增殖，通過調(diào)節(jié)TGF-β1下游信號(hào)通路，使Smad3、P-smad3等因子的表達(dá)受到抑制，從而減少ECM的合成，達(dá)到治療肝纖維化的效果。孫玉鳳等[13]研究發(fā)現(xiàn)，鱉甲煎丸能夠改善40%CCl4橄欖油溶液制備的大鼠肝纖維化模型，分析其治療機(jī)制可能是通過抑制TGF-β1/Smad信號(hào)通路，下調(diào)肌動(dòng)蛋白α（α-SMA）、TGF-β1與Smad3基因的表達(dá)來完成的。

2.3 促進(jìn)HSC凋亡 大量研究表明肝纖維化早期就可出現(xiàn)HSC的大量增殖，繼而加重疾病進(jìn)展，而鱉甲可以通過誘導(dǎo)HSC凋亡進(jìn)而減輕或治療肝纖維化。樊爾艷等[14]研究結(jié)果表明，鱉甲能夠誘導(dǎo)HSC的凋亡，首先使HSC-T6發(fā)生G1期停滯，然后通過上調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，達(dá)到治療作用。胡春玲等[6]研究鱉甲合成肽可抑制HSC增殖，促進(jìn)HSC凋亡。因此，鱉甲合成肽有可能作為HSC凋亡的促進(jìn)劑，有助于臨床上治療、延緩肝功能損傷，但是有關(guān)鱉甲能夠使HSC凋亡的分子機(jī)制，有待于進(jìn)一步的研究。

2.4 抗氧化損傷 氧自由基可以引起生物膜系統(tǒng)損傷，同時(shí)能夠氧化細(xì)胞蛋白質(zhì)DNA，從而損害肝臟組織。王咪娜等[15]研究結(jié)果表明，鱉甲小分子肽I-C-F-6能夠降低大鼠肝組織中丙二醛（MDA）的含量，增強(qiáng)超氧化物歧化酶（SOD）的活性，從而降低大鼠體內(nèi)氧自由基的含量，修復(fù)肝損傷。楊瑩[8]發(fā)現(xiàn)鱉甲寡肽能通過增加 SOD的含量，以及降低大鼠血清和肝組織中 MDA的含量， 進(jìn)而改善肝臟脂肪變性，減少肝纖維組織增生，從而對(duì) CCl4制備的大鼠肝損傷模型起到修復(fù)作用，分析其治病機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)MDA和SOD之間的平衡來達(dá)到。

2.5 抑制HSC的活化、增殖 正常情況下HSC處于靜止?fàn)顟B(tài)，但當(dāng)肝臟受到損傷時(shí)，HSC轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚停瑥亩置贓CM參與肝纖維化的形成[16]。因此，可通過抑制HSC的活化、增殖來減輕或者逆轉(zhuǎn)肝纖維化。屠鈺等[17]研究結(jié)果表明，鱉甲煎丸能夠改善纖維化的進(jìn)程，通過抑制血小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF）誘導(dǎo)的HSC的遷移、增殖。付珍珠等[18]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，鱉甲煎丸水提物可以下調(diào)PDGF基因及蛋白的表達(dá)，減少TGF-β1的合成，從而抑制HSC的活化，達(dá)到治療作用。趙海軍[19]測(cè)定復(fù)方鱉甲軟肝片對(duì)SEC培養(yǎng)基培養(yǎng)的大鼠HSC活化、增殖的影響，結(jié)果表明，低、中和高劑量組均有抑制作用。

2.6 調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生和降解 肝纖維化形成的主要原因是ECM過度沉積，大量研究表明，中藥鱉甲能夠通過調(diào)節(jié)ECM的生成與降解，使肝纖維化的進(jìn)程得到抑制。熊莎等[20]研究鱉甲中分子量＜6 kD 肽段可通過抑制肝纖維化細(xì)胞α-SMA、I型膠原蛋白（Col I）的表達(dá)，減少ECM產(chǎn)生，從而改善肝纖維化。李風(fēng)華[21]研究表明，復(fù)方鱉甲軟肝片能夠下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）的表達(dá)，增強(qiáng)基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的活性，從而促進(jìn)多種MMPs的生成，達(dá)到降解ECM的作用。另一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究表明[22]，鱉甲可以下調(diào)HSC 中TIMP-1的表達(dá)，上調(diào)MMP-1的表達(dá)，改善膠原酶活性，從而促進(jìn)ECM的降解。

3 展望

綜上所述，鱉甲主要通過抑制炎癥反應(yīng)、阻斷轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、促進(jìn)HSC凋亡、抗氧化損傷、抑制HSC的活化增殖、調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生和降解發(fā)揮抗肝纖維化的作用。目前，在鱉甲治療肝纖維化方面的研究取得很大進(jìn)展，而且臨床上復(fù)方鱉甲的治療效果也比較安全穩(wěn)定，但是研究開發(fā)中藥鱉甲仍處于初級(jí)階段，真正能夠用于臨床的成藥也很少。因此，對(duì)于鱉甲抗肝纖維化的研究還存在很大的發(fā)展空間，其中的一些時(shí)效和量效關(guān)系不是很明確，有必要對(duì)其進(jìn)行深入的研究，為臨床運(yùn)用鱉甲提供更加有利的理論依據(jù)。

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