• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的應(yīng)用

    2018-02-12 19:09:42吳碧濤蔣文強(qiáng)綿陽市中心醫(yī)院檢驗科四川綿陽621000
    吉林醫(yī)學(xué) 2018年4期
    關(guān)鍵詞:狼瘡紅斑狼瘡腎炎

    吳碧濤,蔣文強(qiáng) (綿陽市中心醫(yī)院檢驗科,四川 綿陽 621000)

    系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種常見的自身免疫性疾病,其病因不明,臨床表現(xiàn)復(fù)雜,診斷困難,治療受限。蛋白質(zhì)組學(xué)研究通過差異蛋白篩選,可發(fā)現(xiàn)隱藏于疾病背后的確切病理機(jī)制,找到新的、更加敏感而特異的生物標(biāo)志物,提供藥物治療新靶點。本文僅就基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血液、尿液、唾液等體液檢測中的應(yīng)用作一簡單綜述。

    1 系統(tǒng)性紅斑狼瘡

    系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種常見的慢性自身免疫性炎癥性結(jié)締組織疾病,起病隱匿,臨床表現(xiàn)多樣,常表現(xiàn)為復(fù)發(fā)加重與緩解交替進(jìn)行的病程??汕址复蠖鄶?shù)的組織器官,包括心、腦、皮膚、關(guān)節(jié)和腎臟等[1]。值得注意的是,該病多發(fā)于育齡期女性,男女患病比例約為1∶9,且在白種人中發(fā)病率更高[2]。血清中出現(xiàn)高滴度的以抗核抗體為主的自身抗體為該病的又一特點,這些抗體沉積于組織,形成免疫復(fù)合物,激活免疫系統(tǒng),最終導(dǎo)致組織器官損傷[3]。盡管對SLE的研究已較深入,但其卻確的病因?qū)W及病理機(jī)制還知之甚少。普遍認(rèn)為,基因、表觀遺傳、環(huán)境、性激素、免疫調(diào)節(jié)等因素,以及它們彼此之間的相互作用,均參與了SLE的發(fā)病[1]。目前,對SLE的明確診斷仍比較困難,患者需符合由美國風(fēng)濕病學(xué)會(American College of Rheumatology,ACR)提出的11項臨床及實驗室診斷標(biāo)準(zhǔn)中的至少4項方能被診斷為SLE患者[4-5]。然而,這些標(biāo)準(zhǔn)只適用于對患者的分類,對于僅有早期征兆的患者可能漏診。來自第三方實驗的數(shù)據(jù)顯示僅有60%的SLE患者滿足ACR標(biāo)準(zhǔn)[6]。盡管將激素和免疫抑制劑用于SLE治療后,其預(yù)后得到了很大改善,但目前尚無徹底根治辦法。基于SLE病因不明,臨床表現(xiàn)復(fù)雜,診斷困難,治療受限,因此迫切需要發(fā)現(xiàn)隱藏于疾病背后的確切病理機(jī)制,找到新的、更加敏感而特異的生物標(biāo)志物,發(fā)現(xiàn)藥物治療新靶點[7]。

    2 蛋白質(zhì)組學(xué)

    蛋白質(zhì)組學(xué)是繼基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)之后,生命科學(xué)前沿及熱點研究領(lǐng)域的重要代表之一[8-11]。1994年澳大利亞Macquarie大學(xué)的科學(xué)家Wilkins等首次提出蛋白質(zhì)組(proteome)的概念[12],是指一個基因組、細(xì)胞或組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)[13],也可說是指細(xì)胞或機(jī)體全部蛋白質(zhì)的存在及其活動變化規(guī)律。而研究細(xì)胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)的組成及其活動規(guī)律的科學(xué)被稱為蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)。它以蛋白質(zhì)組為研究對象,在整體水平上研究存在于細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)的所有蛋白質(zhì),包括蛋白質(zhì)的組成、表達(dá)水平、結(jié)構(gòu)、翻譯后加工修飾、生物功能以及蛋白質(zhì)之間的相互作用及其變化規(guī)律等。據(jù)此,蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容可分為:表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)、結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)、比較蛋白質(zhì)組學(xué)以及功能蛋白質(zhì)組學(xué)[14]。研究蛋白質(zhì)組學(xué)的常用技術(shù)包括蛋白質(zhì)分離技術(shù)、蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)、生物信息學(xué)技術(shù)以及相對和絕對定量同位素標(biāo)記技術(shù)等[15]。蛋白質(zhì)分離技術(shù)主要包括雙向凝膠電泳(2-DE)、雙向熒光差異電泳以及液相色譜(LC)等技術(shù)。目前最普遍采用的蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)是質(zhì)譜分析技術(shù)。

    3 生物質(zhì)譜

    質(zhì)譜在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中起著至關(guān)重要的作用,是最關(guān)鍵的蛋白鑒定技術(shù)。質(zhì)譜技術(shù)是指通過質(zhì)譜分析儀鑒定經(jīng)過各種途徑分離的蛋白質(zhì),其基本原理是樣品經(jīng)離子化后,據(jù)不同離子的質(zhì)荷比(m/z)來分離鑒定樣品的相對分子質(zhì)量[16]。質(zhì)譜儀由進(jìn)樣器、離子源、質(zhì)量分析器、離子檢測器和分析系統(tǒng)五部分組成。其核心部分包括:離子源、質(zhì)量分析器和離子檢測器[17]。按質(zhì)量分析器種類不同質(zhì)譜儀可分為不同的類型,如:飛行時間質(zhì)譜(time of flight mass spectrometry,TOF-MS)、表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(surface enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)、傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜(Fourier-transform mass spectrometry,F(xiàn)T-MS)、線性離子阱質(zhì)譜(Linear ion traps in mass spectrometry,LIT)、四級桿離子阱質(zhì)譜儀(quatrupole ion trap mass spectrometry)以及 Obitrap等[18]。目前常用的質(zhì)譜包括基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)和電噴霧離子化質(zhì)譜(ESI-MS)。MALDI(前者)利用激光脈沖從干燥結(jié)晶的基質(zhì)中氣化被分析物并使之帶電,常用于分析高分子量的蛋白,測定的是肽質(zhì)量指紋比對;ESI(后者)常與液相分離工具相連,將被分析物從溶液中離子化,檢測靈敏度更高,可達(dá)飛克級水平,測定的是肽碎片指紋比對[16,19-21]。

    4 基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在SLE中的應(yīng)用

    4.1 SLE患者血液(血清及PBMC)蛋白質(zhì)組學(xué)研究:血清和外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)可以被容易且無侵襲性地獲取。兩種基質(zhì)都能對來自機(jī)體不同的信號,如炎癥狀態(tài),做出快速的反應(yīng)[22]。盡管近年來在有關(guān)SLE的研究中,外周血單個核細(xì)胞被廣泛關(guān)注[22,23-29],血清仍是最廣泛應(yīng)用的血液成分。Pinna S等利用差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析提示幾種蛋白質(zhì)在SLE患者的PBMC中被異常表達(dá)[22]。在這些蛋白之中,PRDX2可能被用于候選生物標(biāo)志物或進(jìn)一步研究的靶蛋白。同時在血清中,他們發(fā)現(xiàn)與健康對照者相比,SLE組血清聚集蛋白水平升高了,但這個升高并無統(tǒng)計學(xué)意義。Φstergaard O等使用胰蛋白酶消化后,將循環(huán)微粒(circulating microparticles,MP蛋白)通過LC-MS鑒定并定量,結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對照組系統(tǒng)性硬化癥患者和健康志愿者相比,在SLE患者血清組找到具有差異的MP蛋白超過1 000種,并發(fā)現(xiàn)SLE-MPs(被建議稱為Luposomes)亞群對于SLE具有高度特異性[30]。在SLE-MPs中,血小板蛋白和線粒體蛋白顯著減少,細(xì)胞骨架蛋白紊亂,而糖酵解酶和凋亡蛋白顯著增加。在Kazemipour N及其團(tuán)隊[31]的研究中,實驗被分為SLE組與健康對照者組,各組血清中的高豐度蛋白通過使用一種特殊的試劑盒去除后,繼之用2-DE和MALDI-TOF/TOF-MS分離鑒定血清蛋白,結(jié)果在試驗組找到15個差異表達(dá)的蛋白點,包括7種上調(diào)和8種下調(diào)的蛋白。這些蛋白點經(jīng)進(jìn)一步鑒定后被歸類為3組,包括角蛋白、載脂蛋白和白蛋白以及單獨的蛋白質(zhì),如轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白、觸珠蛋白和凝血酶原。

    4.2 SLE患者尿液蛋白質(zhì)組學(xué)研究:狼瘡腎炎(Lupus nephritis,LN)是系統(tǒng)性紅斑狼瘡最常見且嚴(yán)重的并發(fā)癥,也是導(dǎo)致SLE患者死亡的主要原因之一[32]。高達(dá)50%的SLE成人患者在疾病早期即有腎臟受累的征兆或者最終導(dǎo)致明顯的腎臟疾病[33]。目前,傳統(tǒng)的用于檢測和評估狼瘡腎炎的實驗室標(biāo)志物包括蛋白尿、尿蛋白/肌酐比值、肌酐清除率、抗雙鏈DNA(ds-DNA)抗體、補(bǔ)體水平等[34],但由于它們或者特異性不高,或者敏感性不夠,其臨床應(yīng)用效果并不令人滿意。盡管腎臟活檢仍然是診斷和分類腎臟炎癥和瘢痕程度的金標(biāo)準(zhǔn)[34],由于該方法為有創(chuàng)性的檢查,其操作具有風(fēng)險性以及給患者帶來不適,因此利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法研究狼瘡腎炎患者尿液被大力推廣。一方面,尿液標(biāo)本容易獲取,可反復(fù)、連續(xù)獲得;另一方面,尿液直接來源于狼瘡腎炎的受累組織。因此,相較于血液標(biāo)本,在狼瘡腎炎患者的體液標(biāo)本中,尿液顯示出更廣闊的應(yīng)用前景。Wei R等[33]采用GC-MS的方法對比研究了狼瘡腎炎、非腎炎性SLE以及健康對照者的尿液蛋白質(zhì)組學(xué),他們的試驗發(fā)現(xiàn)與非腎炎性SLE患者組相比,狼瘡腎炎組有70種膠原蛋白肽顯著改變,與健康對照組比,狼瘡腎炎組有230種膠原蛋白肽顯著改變,這些差異蛋白被定義為“狼瘡腎炎膠原蛋白肽”。Aggarwal A及其研究團(tuán)隊[35]根據(jù)SLE疾病活動度指數(shù)將患者分為活動性腎炎患者(AR)、活動性非腎炎患者(ANR)或非活動性組(ID),將來自各組的患者尿液蛋白通過2-DE分離,繼之用MALDI-TOF-MS/MS方法鑒定。篩選出的生物標(biāo)志物用ELISA的方法驗證。結(jié)果發(fā)現(xiàn):尿液蛋白 alpha-1 anti-chymotrypsin(ACT),haptoglobin(HAP)以及retinol binding protein(RBP)在活動性腎炎患者組被檢測到,而非活動性組未檢測到。Somparn P等用ESI-Q-TOF MS/MS的方法研究狼瘡腎炎潛在的生物標(biāo)志物,在所有升高的蛋白中,Prostaglandin H2D-isomerase(PGDS)成為了感興趣的標(biāo)志物[36]。PGDS催化PGH2的異構(gòu)化產(chǎn)生Prostaglandin D2(PGD2),PGD2參與血小板聚集、過敏、炎性反應(yīng)以及化學(xué)趨化作用。他們的研究結(jié)果顯示:與非LN腎小球疾病和健康對照組相比,成年人及兒童活動性LN患者尿液PGDS表現(xiàn)出顯著的升高。

    4.3 SLE患者唾液蛋白質(zhì)組學(xué)研究:研究發(fā)現(xiàn),大約10%~20%的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者是在他們生命的前10年被首次診斷為該病[37]。該病鮮有在5歲之前發(fā)病,出現(xiàn)臨床癥狀的平均年齡是12.1歲[38-40]。在臨床表現(xiàn)、免疫學(xué)改變及治療方法方面成年人與兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡并無明顯不同,但比起成年人,兒童患者通常經(jīng)歷更高的疾病活動度以及進(jìn)展性更強(qiáng)的疾病過程[41-42]。報道稱,在兒科疾病中,自身免疫性風(fēng)濕性疾病是最常見的發(fā)病和死亡原因。考慮到在兒童患者中該病較高的發(fā)病率以及死亡率,其早期診斷就顯得尤為重要。傳統(tǒng)地,患者血清中系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)自身抗體檢測扮演了非常重要的角色。然而,由于血液采樣可能給患者帶來不適,尤其是兒童,因此,新的侵入性更小的,甚至非侵入性的技術(shù)或方法對于兒科患者就顯得尤為重要。從這個角度出發(fā),唾液樣本具有許多優(yōu)勢,如易獲得性、快速收集、采樣過程無痛苦無風(fēng)險等。最新研究顯示,唾液成分的變化與機(jī)體病理生理狀態(tài)密切相關(guān),被視為“人體健康狀態(tài)的窗口”。唾液被認(rèn)為是一個潛在的生物標(biāo)志物儲存庫[43]。分析唾液成分變化可有效反應(yīng)機(jī)體生理和病理狀態(tài)。在這一背景下,系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者唾液蛋白質(zhì)組學(xué)研究顯示出了誘人的前景。盡管至目前為止,該領(lǐng)域的研究數(shù)量有限,但相信隨著研究的深入,更多的關(guān)于唾液蛋白質(zhì)組學(xué)用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的研究成果將會被陸續(xù)報道。

    5 總結(jié)與展望

    近年來,蛋白質(zhì)組學(xué)知識和技術(shù)的出現(xiàn)為研究自身免疫性疾病提供了新的視角。系統(tǒng)性紅斑狼瘡是自身免疫性疾病的重要代表。以其高通量、高敏感性及高特異性為特點,蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)被廣泛應(yīng)用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病的相關(guān)研究中,包括闡明其病理生理機(jī)制,輔助疾病早期診斷,尋找新的診斷用生物標(biāo)志物以及發(fā)現(xiàn)可能的藥物作用靶標(biāo)。我們相信,這些研究將有助于進(jìn)一步提高系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病的診斷及治療水平。

    [1] Tsokos GC.Systemic lupus erythematosus[J].N Engl J Med,2011,358(9):929.

    [2] Hughes GR.Lupus around the world[J].Lupus,2015,24(9):897.

    [3] Kanta H,Mohan C.Three checkpoints in lupus development:central tolerance in adaptive immunity,peripheral amplification by innate immunity and end-organ inflammation[J].Genes Immun,2009,10(5):390.

    [4] Font J,Cervera R.1982 revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus-ten years later[J].Lupus,1993,2(5):339.

    [5] Piette JC.Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythemato-sus[J].Arthritis Rheum,1998,41(4):751.

    [6] Jeltsch-David H,Muller S.Neuropsychiatric systemic lupus erythematosus:pathogenesis and biomarkers[J].Nature Reviews Neurology,2014,10(10):579.

    [7] Nicolaou O,Kousios A,Hadjisavvas A,et al.Biomarkers of systemic lupus erythematosus identified using mass spectrometrybased proteomics:a systematic review[J].Cell Mol Med,2017,21(5):993.

    [8] Matsumoto M,Matsuzaki F,Oshikawa K,et al.A largescale targeted proteomics assay resource based on an in vitro human proteome[J].Nature Methods,2017,14(3):251.

    [9] Hu J,Gao Z,Wang X,et al.iTRAQ-based quantitative proteomics reveals important host factors involved in the high pathogenicity of the H5N1 avian influenza virus in mice[J].Medical Microbiology&Immunology,2017,206(2):1.

    [10] LeeDong-Gi,Parkkee W,Anjae Y,et al.Proteomics analysis of salt-induced leaf proteins in two rice germplasms with different salt sensitivity[J].Canadian Journal of Plant Science,2017,91(2):337.

    [11] O′Grady JP,Meyer KW,Poe DN.Affinity Proteomics for Fast,Sensitive,Quantitative Analysis of Proteins in Plasma[J].Methods Mol Biol,2017,1619:55.

    [12] Wilkins MR,Sanchez JC,Gooley AA,et al.Progress with proteome projects:why all proteins expressed by a genome should be identified and how to do it[J].Biotechnol GenetEng Rev,1996,13(1):19.

    [13] Wasinger VC,Cordwell SJ,Cerpa-Poljak,et al.Progress with gene-product mapping of the Mollicutes:Mycoplasma genitalium[J].Electrophoresis,1995,16(7):1090.

    [14] 王鳳麗,張允嶺.蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在腦缺血性疾病研究中的應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)綜述,2016,22(6):1055.

    [15] 楊 敏,徐桂華.蛋白質(zhì)組學(xué)在腰椎間盤突出癥中的研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥,2016,56(16):95.

    [16] 黃凌云,趙和平,丁勤學(xué),等.生物質(zhì)譜在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代儀器與醫(yī)療,2004,10(1):7.

    [17] 楊 倩,王 丹,常麗麗,等.生物質(zhì)譜技術(shù)研究進(jìn)展及其在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用[J].中國農(nóng)學(xué)學(xué)報,2015,31(2):239.

    [18] 任向南,梁瓊麟.基于質(zhì)譜分析的代謝組學(xué)研究進(jìn)展[J].分析測試學(xué)報,2017,36(2):161.

    [19] 應(yīng)萬濤,焦麗燕,錢小紅.生物質(zhì)譜與蛋白質(zhì)組學(xué)[J].生物技術(shù)通訊,2004,8(3):259.

    [20] Antohe F.Mass Spectrometry Based Proteomics[J].Acta Endocrinologica,2015,11(2):139.

    [21] 劉錦燕,史 冊,王 影,等.蛋白質(zhì)組學(xué)在白假絲酵母菌研究中的應(yīng)用[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2016,36(12):1804.

    [22] Pinna S,Pasella S,Deiana M,et al.Proteomic analysis of human plasma and peripheral blood mononuclear cells in Systemic Lupus Erythematosus patients[J].Journal of Immunological Methods,2017,446:37.

    [23] 程 娟,馬華林,戴 勇.系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)庵苎獑蝹€核細(xì)胞磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2014,(7):962.

    [24] Dai Y,Hu C,Huang Y,et al.A proteomic study of peripheral blood mononuclear cells in systemic lupus erythematosus[J].Lupus,2008,17(9):799.

    [25] Li Y,Huang C,Zhao M,et al.A possible role of HMGB1 in DNA demethylation in CD4+T cells from patients with systemic lupus erythematosus[J].Clin Dev Immunol,2013,2013(1):206298.

    [26] Pavon EJ,Garcia-Rodriguez S,Zumaquero E,et al.Increased expression and phosphorylation of the two S100A9 isoforms in mononuclear cells from patients with systemic lupus erythematosus:a proteomic signature for circulating low-density granulocytes[J].Proteomics,2012,75(6):1778.

    [27] Wang L,Dai Y,Peng W,et al.Differential expression of serine-threonine kinase receptor-associated protein in patients with systemic lupus erythematosus[J].Lupus,2011,20(9):921.

    [28] Wang L,Dai Y,Qi S,et al.Comparative proteome analysis of peripheral blood mononuclear cells in systemic lupus erythematosus with iTRAQ quantitative proteomics[J].Rheumatol Int,2012,32(3):585.

    [29] Zhou D,Luo N,Wu Q,et al.Transcellular distribution heterogeneity of Annexin A5 represents a protective response to lupus related thrombophilia:a pilot Proteomics based study[J].Biochem Biophys Res Commun,2012,420(2):357.

    [30] Φstergaard O,Nielsen CT,Tanassi JT,et al.Distinct proteome pathology of circulating microparticles in systemic lupus erythematosus[J].Clin Proteomics.2017,14(1):23.

    [31] Kazemipour N,Qazizadeh H,Sepehrimanesh M,et al.Biomarkers identified from serum proteomic analysis for the differential diagnosis of systemic lupus erythematosus[J].Lupus,2015,24(6):582.

    [32] Cameron JS.Lupus nephritis[J].Am Soc Nephrol,1999,10(2):413.

    [33] Wei R,Gao B,Shih F,et al.Alterations in urinary collagen peptides in lupus nephritis subjects correlate with renal dysfunction and renal histopathology[J].Nephrol Dial Transplant,2017,32(9):1.

    [34] Soliman S,Mohan C.Lupus nephritis biomarkers[J].Clin Immunol,2016,(8):1.

    [35] Aggarwal A,Gupta R,Negi VS,et al.Urinary haptoglobin,alpha-1 anti-chymotrypsin and retinol binding protein identified by proteomics as potential biomarkers for lupus nephritis[J].Clin Exp Immunol,2017,188(2):254.

    [36] Somparn P,Hirankarn N,Leelahavanichkul A,et al.Urinary proteomics revealed prostaglandin H2D-isomerase,not Zna2-glycoprotein,as a biomarker for active lupus nephritis[J].Journal of Proteomics,2012,75(11):3240.

    [37] Lee PP,Lee TL,Ho MH,et al.Recurrent major infections in juvenile-onset systemic lupus erythematosus-a close link with long-term disease damage[J].Rheumatology(Oxford),2007,46(8):1290.

    [38] Miettunen PML,Ortiz-Alvarez O,Petty RE.Gender and ethnic origin have no effect on long term outcome of childhoodonset systemic lupus erythematosus[J].Rheumatol,2004,31(8):1650.

    [39] Koutsonikoli A,Trachana M,Heidich AB,et al.Dissecting the damage in Northern Greek patients with childhood-onset systemic lupus erythematosus:a retrospective cohort study[J].Rheumatology International,2015,35(7):1225.

    [40] Aggarwal A,Srivastava P.Childhood onset systemic lupus erythematosus:how is it different from adult SLE?[J].Int J Rheum Dis,2015,18(2):182.

    [41] Brunner HI,Gladman DD,Iba¨nez D,et al.Difference in disease features between childhood-onset and adult-onset systemic lupus Erythematosus[J].Arthritis Rheum,2008,58(2):556.

    [42] Tarr T,Dérfalvi B,Gy¨ori N,et al.Similarities and differences between pediatric and adult patients with systemic lupus erythematosus[J].Lupus,2015,24(8):796.

    [43] 程興群,周學(xué)東,徐 欣.唾液的診斷應(yīng)用研究[J].華西口腔醫(yī)學(xué)雜志,2016,34(6):259.

    猜你喜歡
    狼瘡紅斑狼瘡腎炎
    狼瘡?fù)鑼抵餐檎T導(dǎo)小鼠系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療作用
    系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床特點
    中西醫(yī)治療慢性腎小球腎炎80例療效探討
    奶牛腎炎的診斷與治療
    解毒利濕湯治療紫癜性腎炎42例臨床研究
    外周血OX40/OX40L及抗C1q抗體水平對狼瘡腎炎的診斷價值
    乙肝相關(guān)性腎炎的臨床特點及治療
    伴脫發(fā)的頭皮深在性紅斑狼瘡并發(fā)干燥綜合征一例
    初診狼瘡腎炎患者左心室肥厚的相關(guān)因素
    系統(tǒng)性紅斑狼瘡并發(fā)帶狀皰疹的護(hù)理
    av国产久精品久网站免费入址| 欧美日韩精品网址| 国产主播在线观看一区二区 | 蜜桃在线观看..| 国产精品久久久人人做人人爽| 青春草视频在线免费观看| 国产精品久久久久久精品古装| 国产精品久久久久成人av| 天堂8中文在线网| 久久午夜综合久久蜜桃| 成人国语在线视频| 免费高清在线观看日韩| 深夜精品福利| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产视频首页在线观看| 国产视频首页在线观看| 日日夜夜操网爽| 精品国产国语对白av| 国产老妇伦熟女老妇高清| 性色av一级| 悠悠久久av| 亚洲 欧美一区二区三区| 男女下面插进去视频免费观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 成人手机av| 午夜激情av网站| 一区二区三区精品91| 一本综合久久免费| 国产三级黄色录像| 超碰成人久久| 国产精品欧美亚洲77777| 久久久久视频综合| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产精品久久久人人做人人爽| 新久久久久国产一级毛片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 丝袜在线中文字幕| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲精品国产av成人精品| 精品第一国产精品| 久久久久精品人妻al黑| 久久精品久久久久久久性| 多毛熟女@视频| 亚洲av美国av| 国产老妇伦熟女老妇高清| www.精华液| 高潮久久久久久久久久久不卡| 一本大道久久a久久精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美成人精品欧美一级黄| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 日韩av不卡免费在线播放| 飞空精品影院首页| 日本色播在线视频| 久久久欧美国产精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲国产欧美在线一区| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲欧美一区二区三区久久| 真人做人爱边吃奶动态| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲成人手机| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久精品国产综合久久久| 欧美另类一区| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲欧美色中文字幕在线| 欧美人与性动交α欧美软件| 电影成人av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 人人妻人人澡人人看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 一级毛片女人18水好多 | 大片免费播放器 马上看| 美女大奶头黄色视频| 亚洲伊人色综图| 大码成人一级视频| 美女高潮到喷水免费观看| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲av男天堂| 成年人黄色毛片网站| 视频在线观看一区二区三区| 少妇人妻 视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 人人澡人人妻人| 黄色a级毛片大全视频| 国精品久久久久久国模美| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 婷婷色综合大香蕉| 女性生殖器流出的白浆| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 99九九在线精品视频| 国产成人av教育| 日韩av不卡免费在线播放| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久亚洲精品不卡| 国产av精品麻豆| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 精品亚洲成国产av| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久av网站| 国产视频一区二区在线看| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产精品 国内视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| av网站在线播放免费| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 我要看黄色一级片免费的| 色播在线永久视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 久久久久国产一级毛片高清牌| 午夜福利,免费看| 老汉色∧v一级毛片| 成人手机av| 丝袜脚勾引网站| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 视频区欧美日本亚洲| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品乱久久久久久| 女人久久www免费人成看片| 国产不卡av网站在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 久久人妻熟女aⅴ| 中文字幕人妻熟女乱码| av天堂久久9| 午夜福利影视在线免费观看| 国产av国产精品国产| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品一区二区精品视频观看| 免费看av在线观看网站| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 视频区图区小说| 精品免费久久久久久久清纯 | 久久久欧美国产精品| 国产成人精品在线电影| 永久免费av网站大全| 日本色播在线视频| 桃花免费在线播放| av天堂久久9| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久精品久久久久久久性| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲中文av在线| 国产伦人伦偷精品视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲伊人久久精品综合| 久久久精品94久久精品| svipshipincom国产片| 亚洲av国产av综合av卡| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 一本大道久久a久久精品| 午夜免费鲁丝| 亚洲欧洲日产国产| 91九色精品人成在线观看| 另类精品久久| 水蜜桃什么品种好| 99久久综合免费| 国产97色在线日韩免费| av片东京热男人的天堂| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产97色在线日韩免费| 国产成人欧美在线观看 | 欧美中文综合在线视频| 欧美另类一区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产成人精品久久久久久| 日本wwww免费看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 妹子高潮喷水视频| 亚洲av美国av| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久影院123| 一级黄色大片毛片| 国产精品国产av在线观看| av有码第一页| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 成年女人毛片免费观看观看9 | 日韩伦理黄色片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 高潮久久久久久久久久久不卡| www日本在线高清视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| h视频一区二区三区| 丁香六月欧美| 亚洲精品成人av观看孕妇| 五月开心婷婷网| av又黄又爽大尺度在线免费看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 欧美日本中文国产一区发布| 国产男女内射视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 国产老妇伦熟女老妇高清| www.999成人在线观看| 免费不卡黄色视频| 国产亚洲一区二区精品| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产欧美日韩一区二区三 | 桃花免费在线播放| 美女视频免费永久观看网站| 大型av网站在线播放| 人人澡人人妻人| 欧美av亚洲av综合av国产av| 日韩伦理黄色片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产男女超爽视频在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| tube8黄色片| 男女下面插进去视频免费观看| 看免费av毛片| 国产主播在线观看一区二区 | 欧美97在线视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 老司机影院成人| 久久久久精品人妻al黑| 久久ye,这里只有精品| 国产在线一区二区三区精| 国产精品 国内视频| 中文字幕高清在线视频| 亚洲精品一二三| 操美女的视频在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久精品国产亚洲av高清一级| 青青草视频在线视频观看| 在线观看一区二区三区激情| 午夜av观看不卡| 亚洲精品日本国产第一区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲国产欧美在线一区| 十八禁高潮呻吟视频| 久久免费观看电影| 婷婷色综合www| 亚洲国产精品999| 最新在线观看一区二区三区 | 日韩人妻精品一区2区三区| 久久 成人 亚洲| av欧美777| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 免费观看人在逋| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 精品人妻1区二区| 国产黄色免费在线视频| 手机成人av网站| 美女高潮到喷水免费观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲少妇的诱惑av| 视频区图区小说| 国产日韩欧美视频二区| cao死你这个sao货| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产精品二区激情视频| 国产高清国产精品国产三级| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲精品乱久久久久久| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 婷婷色综合大香蕉| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久免费观看电影| 好男人视频免费观看在线| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 日韩av免费高清视频| 亚洲伊人色综图| 欧美精品一区二区免费开放| 日韩一区二区三区影片| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久青草综合色| 久久久精品免费免费高清| 成人国语在线视频| 国产野战对白在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩大码丰满熟妇| 久久国产精品影院| 人成视频在线观看免费观看| www日本在线高清视频| 五月开心婷婷网| 老司机午夜十八禁免费视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 好男人电影高清在线观看| 免费观看人在逋| 黄片播放在线免费| 尾随美女入室| 国产人伦9x9x在线观看| 午夜福利乱码中文字幕| 国产男女内射视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| e午夜精品久久久久久久| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美日韩成人在线一区二区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日韩大码丰满熟妇| 欧美成人午夜精品| 视频在线观看一区二区三区| 97精品久久久久久久久久精品| 久久精品国产亚洲av高清一级| 精品国产国语对白av| 国产欧美亚洲国产| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美黑人精品巨大| 多毛熟女@视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 99热网站在线观看| 精品亚洲成国产av| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲精品一区蜜桃| 国产成人91sexporn| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲天堂av无毛| 丰满饥渴人妻一区二区三| 中国美女看黄片| 欧美日韩精品网址| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 在线 av 中文字幕| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲精品国产av成人精品| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲,一卡二卡三卡| 人妻一区二区av| svipshipincom国产片| 男女无遮挡免费网站观看| 成人国产av品久久久| 人妻人人澡人人爽人人| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产av精品麻豆| 亚洲国产欧美网| 国产亚洲欧美在线一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 国产三级黄色录像| 99久久综合免费| 成人免费观看视频高清| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 99久久综合免费| 久久久国产精品麻豆| 国产1区2区3区精品| 成年人免费黄色播放视频| 久久久久久久精品精品| 捣出白浆h1v1| 中文字幕av电影在线播放| 欧美日本中文国产一区发布| 久久国产亚洲av麻豆专区| 在线精品无人区一区二区三| 国产av国产精品国产| 亚洲精品美女久久av网站| 91老司机精品| 九草在线视频观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 美国免费a级毛片| 99国产综合亚洲精品| 一级毛片我不卡| 国产精品av久久久久免费| 一级毛片我不卡| 国产精品av久久久久免费| 欧美乱码精品一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 免费观看av网站的网址| 亚洲国产精品成人久久小说| 视频在线观看一区二区三区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲国产精品一区二区三区在线| a级毛片黄视频| av网站免费在线观看视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 永久免费av网站大全| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久免费观看电影| 亚洲三区欧美一区| 69精品国产乱码久久久| 18禁观看日本| 女人精品久久久久毛片| 男人添女人高潮全过程视频| 午夜久久久在线观看| 考比视频在线观看| 国产精品一区二区免费欧美 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久性视频一级片| 国产成人欧美| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲图色成人| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产精品久久久av美女十八| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 免费看不卡的av| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲男人天堂网一区| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产三级黄色录像| 亚洲欧美清纯卡通| 国产成人精品无人区| 97人妻天天添夜夜摸| 日韩人妻精品一区2区三区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美成狂野欧美在线观看| 悠悠久久av| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 日本黄色日本黄色录像| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产有黄有色有爽视频| 美女国产高潮福利片在线看| 久久99精品国语久久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 美女高潮到喷水免费观看| 丝袜美足系列| 黄频高清免费视频| 97精品久久久久久久久久精品| 国产黄频视频在线观看| 成人国产一区最新在线观看 | 国产精品国产av在线观看| 国产精品一区二区免费欧美 | 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 夫妻性生交免费视频一级片| 在现免费观看毛片| 超色免费av| 国产高清视频在线播放一区 | 亚洲欧美一区二区三区久久| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久9热在线精品视频| 国产在线一区二区三区精| 我要看黄色一级片免费的| 精品国产乱码久久久久久男人| 成年人午夜在线观看视频| 免费看十八禁软件| 美女视频免费永久观看网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美97在线视频| 国产高清国产精品国产三级| 国产亚洲欧美在线一区二区| 99国产精品一区二区三区| 1024视频免费在线观看| 久热爱精品视频在线9| 久久99一区二区三区| 成年人午夜在线观看视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 中文字幕亚洲精品专区| 操美女的视频在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产精品一区二区在线不卡| 国产精品久久久人人做人人爽| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产午夜精品一二区理论片| 黄色怎么调成土黄色| 熟女av电影| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 熟女av电影| 真人做人爱边吃奶动态| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品99久久99久久久不卡| 嫁个100分男人电影在线观看 | 一级片'在线观看视频| 熟女av电影| 91精品伊人久久大香线蕉| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 水蜜桃什么品种好| 欧美日韩一级在线毛片| 国产日韩欧美在线精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产免费现黄频在线看| 五月天丁香电影| 国产精品偷伦视频观看了| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 精品欧美一区二区三区在线| 久久av网站| 色播在线永久视频| 电影成人av| 欧美 日韩 精品 国产| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 考比视频在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美激情高清一区二区三区| 麻豆乱淫一区二区| 少妇人妻 视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 国产精品av久久久久免费| 欧美精品亚洲一区二区| 久9热在线精品视频| 一个人免费看片子| 久久热在线av| 人体艺术视频欧美日本| 99热全是精品| 国产成人91sexporn| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 午夜福利视频精品| 伊人亚洲综合成人网| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲成国产人片在线观看| 宅男免费午夜| 一级毛片我不卡| 国产黄色免费在线视频| 国产在线一区二区三区精| svipshipincom国产片| 五月开心婷婷网| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 十八禁高潮呻吟视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产精品免费视频内射| 操出白浆在线播放| 精品一品国产午夜福利视频| 国产99久久九九免费精品| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 啦啦啦啦在线视频资源| 七月丁香在线播放| 免费在线观看完整版高清| 一区二区三区乱码不卡18| 国产精品国产三级专区第一集| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 激情五月婷婷亚洲| 成人亚洲精品一区在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 丁香六月欧美| 国产精品 国内视频| 91字幕亚洲| 欧美另类一区| 成人亚洲欧美一区二区av| 一边摸一边做爽爽视频免费| 七月丁香在线播放| 欧美黑人欧美精品刺激| 99国产精品一区二区三区| 后天国语完整版免费观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 脱女人内裤的视频| 精品福利永久在线观看| 亚洲 国产 在线| 欧美另类一区| 大陆偷拍与自拍| 国产精品一二三区在线看| 成人国语在线视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 在线 av 中文字幕| 操出白浆在线播放| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 日韩中文字幕欧美一区二区 | 午夜福利乱码中文字幕| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲一区二区三区欧美精品| 男女午夜视频在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看 | 美女午夜性视频免费| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 天天操日日干夜夜撸| 欧美+亚洲+日韩+国产| 激情五月婷婷亚洲| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 日韩大片免费观看网站| 99国产精品免费福利视频| 美女国产高潮福利片在线看| 少妇人妻 视频| a级片在线免费高清观看视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美成狂野欧美在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 免费看十八禁软件| 久久久国产欧美日韩av| 久久99热这里只频精品6学生| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久人人97超碰香蕉20202| 搡老乐熟女国产| 香蕉丝袜av| 蜜桃国产av成人99| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 午夜福利乱码中文字幕| 丝袜美足系列| 国产色视频综合| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲精品日韩在线中文字幕| av在线老鸭窝| 亚洲 欧美一区二区三区| 一级,二级,三级黄色视频| 精品亚洲成国产av| 黄色怎么调成土黄色| 国产成人精品无人区| 老熟女久久久| 黄色a级毛片大全视频| 人成视频在线观看免费观看| av天堂在线播放| 精品少妇久久久久久888优播| 久久免费观看电影| tube8黄色片| 在线观看免费高清a一片|