血清、尿液TWEAK對狼瘡性腎炎活動性的預測及其機制分析

李海英

（湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院 醫(yī)學檢驗與病理中心，湖南 長沙 410007）

0 引言

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)為一種以青年女性為發(fā)病在主體的累及多臟器的自身免疫性炎癥性結締組織病，其誘發(fā)因素目前尚未明確，臨床醫(yī)學認為，其為遺傳因素、環(huán)境因素及雌激素水平等多種因素共同作用下誘發(fā)的自身免疫性疾病。腎臟為 SLE的主要侵襲器官，患者的腎臟受累后而引發(fā)腎小球腎炎被稱為狼瘡性腎炎(LN)，對于LN的發(fā)病機制目前尚未見確切的報道，該病的病理學改變也呈現(xiàn)出多樣化。對于患者而言準確的預測狼瘡性腎炎活動性，是提高患者生存質(zhì)量及預后效果的重要指標[1]。因此為患者尋找可有效評價狼瘡性腎炎活動性的臨床指標對患者的診斷及治療均具有重要的現(xiàn)實意義。作者為探討血清、尿液TWEAK對狼瘡性腎炎活動性的預測及其機制，將63例LN患者及15例正常參照者納入至本次研究中，觀察TWEAK于腎組織內(nèi)的表達，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2015年8月至2018年1月至我院接受干預治療的63例LN患者納入本次研究中，同時將15例正常參照者作為本次研究的對照數(shù)據(jù)。63例LN患者中包含男20例，女43例；患者年齡16-49歲，平均（36.2±10.6）歲，入選的狼瘡性腎炎患者均符合美國風濕病學會（2009年）修訂的SLE分類標準，狼瘡性腎炎臨床診斷標準：經(jīng)臨床檢驗（腎活檢病理證實、持續(xù)性蛋白尿及管型）診斷確診為SLE患者，入選的狼瘡性腎炎患者均接受了腎臟組織活檢，患者的病理可分成為Ⅲ型5例、Ⅳ型37例及21例Ⅴ型。同時選取15例體檢正常者納入研究的參照組中，參照組健康體檢者均無合并患者高血壓、糖尿病及其他慢性疾病，自身抗體檢測及各項生化指標檢查均顯示陰性，其中包含男3例，女12例；患者年齡在19-36歲，平均（28.3±4.2）歲。入選的研究參與者均自愿簽署參與研究知情同意書。兩組的基本資料間比較無顯著的差異性（P＞0.05）。

1.2 方法

（1）收集相關指標：入選的研究對象均接受血沉、血尿常規(guī)、免疫球蛋白、抗-dsDNA、肝腎功能、抗核抗體、補體成分C4及補體成分 C3等多項檢測。運用間接免疫熒光法（德國歐蒙公司提供試劑盒）對抗核抗體及抗-dsDNA進行半定量檢測；由我院人民醫(yī)院風濕科實驗室檢測研究對象的自身抗體。根據(jù)患者的檢測結果及相應的臨床表現(xiàn)評價研究對象的疾病活動指數(shù)(SLEDAI)評分；對腎穿刺組織檢驗標本實施Masson 染色、免疫熒光、HE、PAS及PASM，運用光鏡及免疫熒光顯微鏡觀察研究入選者的腎組織活檢標本，同時根據(jù)國際腎臟病協(xié)會的病理分類對入選患者進行分型，以Austin 半定量方法判定患者的慢性指數(shù)(chronic index，CI)及疾病活動性指數(shù)(activity in-dex，AI)。同時運用ELISA 試劑盒檢測入選者的血清、尿液內(nèi)的TWEAK及MCP-1水平。

（2）運用免疫組化活檢測入選者的腎組織：運用二甲苯脫蠟處理TWEAK的水平石蠟標本，同時運用酒精水化。對TWEAK標本分別進行微波及高壓抗原修復，在其中加入密度為0.3%的H2O2溶液，同時滴加正常的動物血清，靜置過夜，然后滴加一抗將其放置到溫度為4℃的環(huán)境下過夜，最后滴加鏈霉親和素（生物素化過氧化物酶復合物）及生物素化二抗；觀察DAB，確定顯色后，運用蘇木精進行復染，最后進行脫水及封片。免疫組的數(shù)據(jù)分析運用Image Pro-Plus 16.0圖像分析軟件進行，同時運用高倍鏡下累計光密度的平均值表示患者的腎內(nèi)TWEAK水平。

1.3 統(tǒng)計學處理

收集到的數(shù)據(jù)均經(jīng)過 SPSS 21.0軟件分析及統(tǒng)計，數(shù)據(jù)運用±s表示。組間比較運用One Way-ANO-VA進行分析，組間數(shù)據(jù)對比運用獨立樣本t檢驗；同時運用Pearson法對數(shù)據(jù)進行相關性分析。

2 結果

2.1 狼瘡性腎炎患者尿液及血清中的MCP-1及TWEAK水平

63例LN患者血清TWEAK值為（43.68±6.02）μg/L,MCP-1值 為（0.16±0.02）μg/L， 其 尿 液中 的 TWEAK值 為（47.86±12.05）μg/L,MCP-1值為（0.13±0.01）μg/L；15例正常參照者的血清 TWEAK值 為（15.26±2.04）μg/L,MCP-1值 為（0.06±0.02）μg/L， 其 尿 液 中 的 TWEAK值 為（17.15±2.06）μg/L,MCP-1值 為（0.06±0.02）μg/L；由此可見，狼瘡性腎炎患者尿液及血清中的MCP-1及TWEAK水平均顯著高于正常參照者，兩組數(shù)據(jù)間對比差異性顯著（P＜0.05)。

2.2 TWEAK 在腎組織中的表達

正常參照者中的腎臟小管上皮細胞鮮見腎小球表達，但呈現(xiàn)顯著的TWEAK表達；LN患者中腎小管呈現(xiàn)顯著增強，腎小球的表達明顯增加，其腎內(nèi)TWEAK表達水平與正常參照者相比顯著上升(P＜0.05)，Ⅳ型的上升程度更加明顯(P＜0.05)；患者血清中的TWEAK水平和狼瘡性腎炎患者的活動指數(shù)(SLEDAI)評分為正相關性(r=0.565，P＜0.05)，同時和補體C3間為負相關性(r=-0.542，P＜0.05)；狼瘡性腎炎患者尿液中的SLE-DAI評分與TWEAK之間呈現(xiàn)正相關性(r=0.843，P＜0.05)，同時和補體C3之間為負相關性(r=-0.584，P＜0.05)。

3 討論

TWEAK與狼瘡性腎炎的病理變化及發(fā)生機制之間存在緊密的關系，其在這個過程中發(fā)揮著重要的作用，對其進行研究可為臨判斷及指導狼瘡活動的程度提供有價值的參考[2]。本次研究結果顯示：正常參照者中的腎臟小管上皮細胞鮮見腎小球表達，但呈現(xiàn)顯著的TWEAK表達；LN患者中腎小管呈現(xiàn)顯著增強，腎小球的表達明顯增加，其腎內(nèi)TWEAK表達水平與正常參照者相比顯著上升(P＜0.05)，Ⅳ型的上升程度更加明顯(P＜0.05)[3-5]。為患者進行腎穿刺活檢病理檢查是臨床醫(yī)學公認的診斷LN和評判疾病活動性的金標準，為最大限度減少穿刺對患者的創(chuàng)傷同時緩解患者的經(jīng)濟壓力，臨床可運用聯(lián)合檢測血清及尿液TWEAK水平的方法為患者診斷，同時有效抑制患者的TWEAK可能是臨床干預治療LN 患者的一個的新方向[6]。