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    鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病發(fā)病情況調(diào)查與病原分離鑒定

    2018-02-06 07:29:46李陽楓常麗燁
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年15期
    關(guān)鍵詞:調(diào)查

    李陽楓 常麗燁

    摘要:為了了解鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病的發(fā)病情況和主要致病病原菌,對鄭州地區(qū)不同區(qū)域共計55家寵物醫(yī)院2015年1—12月497例首診犬真菌性皮膚病病例進(jìn)行調(diào)查,并對其中100只患犬進(jìn)行病原分離鑒定。結(jié)果顯示,鄭州地區(qū)真菌性皮膚病患犬發(fā)病率前三的品種是金毛犬、貴賓犬和松獅;發(fā)病率較高的年齡段為0~3歲,0~1歲犬最易感染真菌性皮膚??;雌性犬和雄性犬?dāng)?shù)量之比為1.15 ∶1;真菌性皮膚病多發(fā)季為夏、秋兩季,8月份為發(fā)病高峰,其中背部、四肢和腹部發(fā)病率位居前三;病犬患部分離出的真菌有犬小孢子菌、須毛癬菌、石膏樣小孢子菌和絮狀表皮癬菌,以犬小孢子菌感染為主。

    關(guān)鍵詞:犬;真菌性皮膚病;調(diào)查;病原分離

    中圖分類號: S858.292.75文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號:1002-1302(2017)15-0143-04

    真菌是一種在自然界中廣泛存在、種類繁多的真核生物,目前已被描述的約有12萬種,通常分為酵母菌、霉菌和蕈菌三大類。真菌性皮膚病是指致病性真菌黏附并侵入機(jī)體皮膚、毛發(fā)或指甲的角蛋白組織,在一定條件下引起器質(zhì)性病變,從而引起的皮膚疾病,俗稱“癬”[1]。犬真菌性皮膚病在犬皮膚病臨床病例中約占16.86%[2],是一種傳染性較強(qiáng)的人獸共患病,該病不僅可引起犬局部或全身脫毛、脫屑、紅斑等癥狀,嚴(yán)重影響犬的美觀和健康,其病原還可感染人,引起人的頭癬、體癬及甲癬,其中老人和兒童較易感染。

    為了解河南省鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病的發(fā)病情況和主要致病病原菌,本研究對鄭州地區(qū)不同區(qū)域共計55家寵物醫(yī)院2015年1—12月497例首診犬真菌性皮膚病(單純真菌感染和混合感染)病例進(jìn)行調(diào)查(品種、性別、年齡、癥狀、飲食情況、飼養(yǎng)條件、發(fā)病時間等),并對其中100只患犬進(jìn)行病原分離鑒定。旨在了解鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病的病原,為該病的臨床診療以及預(yù)防人獸互傳提供科學(xué)依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1病例來源

    2015年1—12月,鄭州8個行政區(qū)域(金水區(qū)、二七區(qū)、管城區(qū)、中原區(qū)、惠濟(jì)區(qū)、上街區(qū)、鄭東新區(qū)、經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū))內(nèi)55家寵物醫(yī)院497例首診單一真菌感染引起的皮膚病病例以及細(xì)菌和真菌混合感染、真菌和寄生蟲混合感染的病例,對其中100例患犬患部皮膚樣本做病原分離鑒定。

    1.2主要試劑與儀器

    沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA),購自青島海博生物技術(shù)有限公司;乳酸酚棉藍(lán)染色液,購自青島捷世康生物科技有限公司;伍德氏燈,購自上海吉米寵物用品有限公司;普通光學(xué)顯微鏡,購自重慶奧特光學(xué)儀器有限公司;超凈工作臺,購自上海賀德試驗設(shè)備廠;恒溫培養(yǎng)箱,購自上海精密儀器儀表有限公司;75%乙醇,購自新鄉(xiāng)市三偉消毒制劑有限公司。

    1.3臨床病例調(diào)查

    詢問主人病犬的發(fā)病史,記錄病犬品種、性別、年齡、發(fā)病時間、發(fā)病癥狀(疼痛、瘙癢、脫毛、紅斑、丘疹、出血、腫脹、鱗屑、膿等癥狀)、發(fā)病部位及飼養(yǎng)環(huán)境。

    1.4真菌性皮膚病的診斷

    1.4.1伍德氏燈檢查

    先將伍德氏燈預(yù)熱5~10 min以得到穩(wěn)定波長,再將病犬置于暗室,在伍德氏燈下觀察是否有熒光,出現(xiàn)熒光者即可判為陽性,未出現(xiàn)熒光則采用直接鏡檢檢查。

    1.4.2直接鏡檢

    采用刮刀法用乙醇棉球擦拭患病部位皮膚邊緣處,自然風(fēng)干后用消毒后的鈍性刀片與皮膚呈45°輕刮取患病部位皮膚表層,至皮膚呈輕微出血狀。采用刮取法取得皮膚樣品至于載玻片上,滴加1~2滴10% KOH溶液,蓋上蓋玻片,在火焰上輕微加熱,使角蛋白溶解,然后壓緊蓋玻片,用濾紙吸去多余液體[3-4];將玻片置于光學(xué)顯微鏡下,先用低倍鏡檢查是否有菌絲和孢子,再用高倍鏡觀察孢子和菌絲形態(tài)[5],若觀察到菌絲和孢子,即可診斷為陽性。

    1.5病原分離鑒定

    1.5.1真菌培養(yǎng)

    用無菌棉拭子對100例病犬的發(fā)病部位進(jìn)行皮膚樣本的采集并做好記錄,然后以劃線法[6]將樣本接種在沙氏葡萄糖培養(yǎng)基上,25 ℃培養(yǎng)2~3周,待菌落出現(xiàn)后用釣菌環(huán)挑取菌落中部新生菌絲至沙氏葡萄糖培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng),每日觀察菌落的顏色、生長速度、表面狀態(tài)、背部顏色并記錄[4]。

    1.5.2乳酸酚棉藍(lán)染色鏡檢

    用釣菌環(huán)挑取菌落邊緣與中部之間菌絲置于玻片上,滴加1滴乳酸酚棉藍(lán)染色液,蓋上蓋玻片,輕壓使標(biāo)本平鋪,然后將玻片置于光學(xué)顯微鏡下,先用低倍鏡檢查是否有菌絲和孢子,再用高倍鏡觀察孢子和菌絲形態(tài),根據(jù)菌落培養(yǎng)性狀和鏡檢結(jié)果,確定真菌的屬種并記錄結(jié)果。

    2結(jié)果

    2.1病例調(diào)查結(jié)果

    本研究調(diào)查的497例真菌性皮膚病患犬中39例為單純真菌感染,289例為真菌和細(xì)菌混合感染,169例為寄生蟲和真菌混合感染?;既霈F(xiàn)不同程度、不同范圍的脫毛、脫屑、痂皮,多數(shù)犬有癢感(圖1至圖4)。

    2.2犬真菌性皮膚病與年齡的關(guān)系

    本次調(diào)查的497例真菌性皮膚病病犬中,1歲及以下病例共計146例,占總數(shù)的29.4%;2歲犬病例數(shù)為127例,占總數(shù)的25.6%;3歲犬病例數(shù)為45例,占總數(shù)的9.1%;4歲犬病例數(shù)為42例,占總數(shù)的8.5%;5歲犬病例數(shù)為22例,占總數(shù)4.4%;6歲犬病例數(shù)為15例,占總數(shù)的3.2%;7歲犬病例數(shù)為14例,占總數(shù)的2.8%;8歲犬病例數(shù)為9例,占總數(shù)的1.8%;9歲犬病例數(shù)為37例7.4%;10歲犬病例數(shù)為40例,占總數(shù)的8.0%(表1、圖5)。發(fā)病率較高的年齡段為0~3歲和9~10歲。在497例患犬中年齡最小的為2月齡,最大的為10歲,而0~1歲則是犬真菌性皮膚病的發(fā)病高峰期年齡。

    2.3犬真菌性皮膚病與品種的關(guān)系

    本次調(diào)查的497例真菌性皮膚病患犬中有金毛犬(Golden Retriever)73只(14.7%),貴賓犬(Poodle)59只(11.9%),博美犬(Pomeranian)18只(3.6%),松獅犬(Chow Chow)40只(8.0%),京巴犬(Pekingese)29只(5.8%),哈士奇(Siberian Husky)37只(7.4%),蘇格蘭牧羊犬(Scottish Collie)19只(3.8%),德國牧羊牧(German Shepherd)38只(7.6%),邊境牧羊犬(Border Collie)21只(4.2%),薩摩耶犬(Samoyed)31只(6.2%),比熊犬(Bichons Frises)19只(3.8%),小鹿犬(Minlature Pinscher)9只(1.8%),藏獒(Tibetan Mastiff)8只(1.6%),臘腸犬(Dachshund)8只(1.6%),蘇格蘭梗(Scottish Terrier)2只(0.4%),拉布拉多(Labrador Retriever)16只(3.2%),雪納瑞犬(Schnauzer)17只(3.4%),吉娃娃(Chihuahua)11只(2.2%),喜樂蒂(Shetland Sheepdog)3只(0.6%),古牧犬(Old English Sheepdog)2只(0.4%),沙皮犬(SharPei)1只(0.2%),大麥町(Dalmatian)1只(0.2%),西施犬(Shih Tzu)1只(0.2%),可卡犬(Cocker spaniel)2只(0.4%),斗牛犬(Bulldog)2只(0.4%),銀狐犬(Japanese Spitz)1只(0.2%),雜犬29只(5.8%)(表2)。發(fā)病率最高的犬種是金毛犬,其次是貴賓犬和松獅。endprint

    2.4犬真菌性皮膚病與性別的關(guān)系

    本研究統(tǒng)計的497個真菌性皮膚病病例中雌性犬266只,雄性犬231只,雌性和雄性之比為1.15 ∶1,雌性略高于雄性(圖6)。

    2.5犬真菌性皮膚病與季節(jié)的關(guān)系

    本次調(diào)查結(jié)果(表3、圖7)顯示,鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病發(fā)病數(shù)隨溫度的升高逐漸增多,夏、秋多發(fā),在6—9月份發(fā)病率較高,其中8月份為發(fā)病高峰期;而在春、冬寒冷季節(jié)發(fā)病率低,其中1月份和12月份發(fā)病率為0。

    2.6犬真菌性皮膚病發(fā)病部位調(diào)查

    由圖8可知,本次調(diào)查的497例病例的發(fā)病部位有面部(67例)、耳部(43例)、頸部(29例)、背部(134例)、腹部(89例)、四肢(124例)和尾部(8例),此外還有細(xì)菌和真菌混合感染全身病例3例。其中背部發(fā)病率最高(27.0%),其次是四肢(24.9%)和腹部(17.9%)。

    2.7病原分離鑒定

    對本研究選取的100只病犬患部皮膚樣本進(jìn)行真菌分離鑒定,其中61只犬分離出皮膚癬菌,檢出率61%;分離出的皮膚癬菌包含犬小孢子菌31例、須癬毛癬菌7例、 石膏樣小

    [TPLYF88.tif]

    孢子菌18例、絮狀表皮癬菌5例,未分離到馬拉色菌和紅色毛癬菌,各種皮膚癬菌培養(yǎng)特性和鏡檢結(jié)果如下:

    犬小孢子菌(Microsporum gypseum)在SDA培養(yǎng)基上 25 ℃ 時,生長速度較快,菌落開始呈黃白色絨毛樣,培養(yǎng)約2周時逐漸形成羊毛樣,菌落中央趨向粉末化,正面呈橘黃色,背面為紅棕色。鏡檢可見紡錘形大分生孢子和少量小分生孢子,臂較厚,表面粗糙有小顆粒,有4~8個隔。

    石膏樣小孢子菌(Microsporum gypseum)在SDA培養(yǎng)基上 25 ℃ 培養(yǎng),初呈白色絨毛狀,隨后逐漸變?yōu)榘咨恋攸S色粉末狀,菌落中心有圓環(huán),周圍有短且不齊的紋溝。鏡檢可見大分生孢子為紡錘形、壁薄,有3~6個隔,外壁光滑,可見結(jié)節(jié)狀菌絲。

    須癬毛癬菌(Trichophyton mentagrophytes) 在SDA培養(yǎng)基上25 ℃培養(yǎng),菌落生長迅速,菌落中心有結(jié)節(jié)狀突起,菌落上有不規(guī)則放射狀溝紋,表面呈白色,背面呈微黃色。鏡檢可見大量圓形小分生孢子和棒狀大分生孢子,有2~6個隔,分隔處孢子變狹、壁薄,且具有不同形態(tài)的菌絲。

    絮狀表皮癬菌(Epidermophyton floccosum)在SDA培養(yǎng)基上25 ℃培養(yǎng),初期生長緩慢,菌落質(zhì)地由膜狀變?yōu)樘籂?,表面黃綠色至土黃色且具有不規(guī)則褶皺,背面棕黃色。鏡下可見豐富的棒狀大分生孢子,頂端鈍圓、壁厚、光滑,無小分生孢子,結(jié)節(jié)菌絲和螺旋菌絲亦不多見。

    3討論

    3.1犬真菌性皮膚病發(fā)病情況

    健康動物體表亦常攜帶致病性真菌,這類真菌在機(jī)體免疫力下降或皮膚表層理化性質(zhì)改變時可引發(fā)皮膚病,而幼小和年老動物,以及體弱和營養(yǎng)不良動物免疫力較低,且皮膚表層理化性質(zhì)易發(fā)生改變,因此許多研究表明真菌性皮膚病的發(fā)病年齡大多為1~4歲。本研究結(jié)果顯示,鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病主要發(fā)病年齡為0~3歲,1歲為發(fā)病高峰。本研究調(diào)查的497例真菌性皮膚病患犬年齡為2月齡至10歲。其中0~2歲犬發(fā)病率較高,并隨著年齡的增長,發(fā)病率逐漸下降,但9~10歲犬發(fā)病率略有上升。朱重偉調(diào)查了2011—2012年洛陽地區(qū)417例真菌性皮膚病患犬的發(fā)病年齡,結(jié)果顯示1歲犬發(fā)病率高達(dá)37.17%,且發(fā)病率隨年齡的增加而降低,至10歲以上犬發(fā)病率有所回升[7]。

    不同地區(qū)犬真菌性皮膚病發(fā)病品種多為松獅、金毛、貴賓、京巴等長毛犬,分析原因是由于長毛犬毛發(fā)內(nèi)濕度較大,缺乏空氣流通,真菌易寄生在此類犬皮膚表面,此外調(diào)查結(jié)果與當(dāng)?shù)仞B(yǎng)犬愛好者對寵物犬品種的喜好和飼養(yǎng)數(shù)量有關(guān)。本研究對鄭州地區(qū)497只真菌性皮膚病患犬的調(diào)查結(jié)果顯示,發(fā)病率居于前三的是金毛犬、貴賓犬和松獅,筆者分析原因可能與鄭州地區(qū)此3種犬的數(shù)量較多有關(guān)。

    本研究結(jié)果顯示,雌性犬真菌性皮膚病的發(fā)病率高于雄性犬,一方面是因為性激素對皮脂腺分泌的影響,另一方面可能是鄭州地區(qū)雌性犬的養(yǎng)殖數(shù)量大于雄性犬所致。筆者查閱了相關(guān)文獻(xiàn),不同地區(qū)真菌性皮膚病患犬雌雄無明顯差異,對于犬真菌性皮膚病與性別的關(guān)系尚無明確的結(jié)論,結(jié)果的差異可能與調(diào)查范圍有關(guān)。

    致病性皮膚癬菌最適生長溫度為22~28 ℃,因此真菌性皮膚病發(fā)病具有明顯季節(jié)性,在溫暖、潮濕的季節(jié)多發(fā)。丁明星、劉拂曉研究表明在10月至次年2月為犬小孢子菌病的發(fā)病高峰[8-9];7—11月為石膏樣小孢子菌病的發(fā)病高峰;須發(fā)毛癬菌全年發(fā)病,11—12月為其發(fā)病高峰。安錫忠等分析了2013年河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)院犬單一真菌性皮膚病病例,結(jié)果顯示由犬小孢子菌感染引起的病例占53.23%[10]。趙熠群對2009年1—12月上海地區(qū)15家寵物醫(yī)院真菌性皮膚病患犬的調(diào)查結(jié)果顯示,真菌性皮膚病主要發(fā)生在5—9月份,原因可能是上海地區(qū)氣候潮濕,適宜真菌孳生[11]。本研究對497例真菌性皮膚病患犬發(fā)病時間的統(tǒng)計結(jié)果顯示,鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病多發(fā)季為夏、秋兩季,7月份為發(fā)病高峰,分析原因可能是鄭州地區(qū)春季較為干燥,而6—9月份多雨,且夏、秋兩季犬外出時間增多,與致病性真菌接觸的幾率增大,以及夏季寵物洗澡較勤,影響了皮膚對真菌的抵抗力。

    筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn),犬真菌病皮膚病發(fā)病部位主要有面部、背部、四肢、腹部等容易與真菌接觸的部位。由于犬天性喜嗅,因此面部真菌性皮膚病主要發(fā)生在鼻周圍,背部、四肢等主要是通過與真菌直接接觸感染;腹部則是由于犬喜臥,腹部直接接觸真菌,且腹部較為潮濕,適宜真菌孳生。此外李天偉對健康犬真菌攜帶情況調(diào)查結(jié)果顯示,耳內(nèi)真菌攜帶量也較高[12]。本研究調(diào)查的497例患犬的發(fā)病部位全身均有分布,其中背部、四肢和腹部發(fā)病率位居前三。endprint

    3.2病原分離鑒定

    KOH法和乳酸酚棉藍(lán)染色法均可用于淺部真菌的直接鏡檢,這2種方法取材簡單、操作方便,在動物皮膚病和人皮膚病中廣泛應(yīng)用。KOH的濃度一般取10%~20%,乳酸酚棉藍(lán)染液的配方為石炭酸20 mL、乳酸20 mL、甘油40 mL、蒸餾水20 mL,上述混合物加熱溶解后加入棉藍(lán)50 mg,混勻過濾即可[5]。本研究采用沙氏培養(yǎng)基(配方:蛋白胨10 g,葡萄糖40 g,瓊脂粉20 g)對樣本進(jìn)行病原分離鑒定,且在培養(yǎng)基中添加氯霉素(0.05 mg/mL)以防止細(xì)菌和其他霉菌生長,培養(yǎng)時間2~3周,但氯霉素并不能完全抑制酵母和霉菌的生長[13]。

    本研究中病原分離結(jié)果顯示,鄭州地區(qū)犬真菌性皮膚病的病原主要是犬小孢子菌(50.8%),與朱重偉、吳清波的研究結(jié)果[7,14]一致。在犬真菌性皮膚病臨床病例中,雖然由須毛癬菌引起的真菌性皮膚病少于犬小孢子菌,但研究表明須毛癬菌毛發(fā)穿孔所需的時間較犬小孢子菌短,且對毛發(fā)的損傷作用比犬小孢子菌更為嚴(yán)重[15]。絮狀表皮癬菌可引起犬、貓、兔等動物的皮膚真菌病和人類體癬和疣狀增生[16]。

    對于犬真菌性皮膚病的預(yù)防關(guān)鍵是要注重平時的防護(hù),對寵物洗澡不易過頻,因為過度頻繁的洗澡會損傷犬皮膚的角質(zhì)層,使其失去對皮膚的保護(hù)作用,從而更易發(fā)生皮膚病。此外,給犬洗澡時應(yīng)使用寵物專用香波,切不可使用人用沐浴露。平時應(yīng)注重寵物飲食營養(yǎng)均衡,因為營養(yǎng)不良會導(dǎo)致皮脂腺分泌不足,使得毛發(fā)干枯易斷;營養(yǎng)過剩則導(dǎo)致皮脂腺分泌物中脂類成分增加,而缺乏維生素B則會引起掉毛、皮屑以及毛發(fā)色素沉著不足[17]。一旦出現(xiàn)病癥應(yīng)及時就醫(yī),對病犬暫時隔離,防止造成人員感染。

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