增生性瘢痕耳模型研究發(fā)展經(jīng)歷及國內(nèi)外應(yīng)用的最新動態(tài)

[摘要]由于國內(nèi)外學(xué)者公認(rèn)在動物身體不能產(chǎn)生類似人類的病理性瘢痕（增生性瘢痕與瘢痕疙瘩）的概念延續(xù)很久，多年來，國內(nèi)外學(xué)者采用各種方法企圖在各種動物身體引發(fā)類似人類病理瘢痕樣病變均未成功，直至1997年也國內(nèi)外沒有出自動物身體的瘢痕實驗?zāi)Ｐ?。以往有關(guān)瘢痕研究是將切取自人體的增生性瘢痕組織移植到裸鼠身體，憑借對在無免疫排斥反應(yīng)寄生狀態(tài)下的人體瘢痕組織進(jìn)行研究。這與在動物身上產(chǎn)生的病理瘢痕差距不言而喻，其結(jié)果與臨床應(yīng)用也有很大的不同。因此，成為阻礙創(chuàng)傷修復(fù)，特別是瘢痕深入研究的重大缺憾！這也是病理瘢痕防治至今仍成為一大難題的主要原因之一。

[關(guān)鍵詞]增生性瘢痕；實驗?zāi)Ｐ?；病理性瘢痕；瘢痕疙?/p>

[中圖分類號]R622.1 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A [文章編號]1008-6455（2017）06-0140-02

1997年Morris發(fā)現(xiàn)在兔耳創(chuàng)面可引發(fā)真皮過度增生的現(xiàn)象——這是病理性瘢痕一種最基本的病理改變——成為在動物身體上可能引發(fā)病理性、增生性瘢痕的零的突破；1998年，李薈元等經(jīng)過大量兔耳創(chuàng)面的實驗研究，在“第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報”上報道了“建立增生瘢痕動物實驗?zāi)Ｐ汀毖芯砍晒?。從此，宣告沒有產(chǎn)生于動物身上的病理瘢痕模型缺憾的終結(jié)。此后，國內(nèi)外學(xué)者紛紛在重復(fù)兔耳瘢痕模型的確立，并利用兔耳瘢痕模型開展了廣泛的創(chuàng)傷修復(fù)，特別是有關(guān)病理瘢痕發(fā)生機(jī)制及瘢痕防治的實驗研究。

從兔耳瘢痕模型問世，至今已有20年。為查證此模型二十年間在全球范圍研究應(yīng)用、發(fā)展的經(jīng)歷和當(dāng)今國內(nèi)外應(yīng)用的實況。2017年5月，筆者從相關(guān)檢索器中分別輸入中文關(guān)鍵詞：“增生瘢痕兔耳模型”及英文關(guān)鍵詞：“rabbit eaF model of hypertrophic scar”，分別獲得：1998～2017年的中文資料202份；1997～2017年英文資料85份。筆者將向讀者較全面介紹國內(nèi)外學(xué)者對兔耳瘢痕模型的認(rèn)可及應(yīng)用實況。

1對至今查尋到的國內(nèi)外有關(guān)兔耳瘢痕模型資料的總體分析

于2017年5月4日，輸入關(guān)鍵詞“rabbit ear model ofhypertrophic SC&F”，共獲得英文資料85份，其中，最早發(fā)表的相關(guān)資料是1997年Morris等的：“Acute and chronic animal modelsfor excessive dermal scarring：quantitative studies.”發(fā)表在“Plast Reeonstr Surg.1997：100（3）：674 81”，這是全球范圍內(nèi)對“動物不能產(chǎn)生類似人類增生型瘢痕樣病理改變”傳統(tǒng)概念的零的突破。此后至2017年3月，共查得英文資料85份，其中有11篇是國內(nèi)學(xué)者在國內(nèi)相關(guān)刊物上發(fā)表的英文摘要，故國外學(xué)者發(fā)表的兔耳瘢痕相關(guān)英文文章實際篇數(shù)為74篇。從發(fā)表時間看，除1997 Morris發(fā)表首篇文獻(xiàn)后的開頭五年間，（1998～2001）國外有關(guān)兔耳模型的英文資料為空白，而英文資料的第2篇則見于首篇后的第6年：“SaulisAS.“Silicone occlusive treatment 0f hypertrophic scar in therabbitmodel.Aesthet Surg J.2002：22（2）：147 53.”。而且在二十年間，國外學(xué)者發(fā)表的有關(guān)兔耳瘢痕的74篇英文資料中，有37篇見于最近5年。

與國外學(xué)者對兔耳瘢痕模型關(guān)注的程度相比，中國首次發(fā)表建立兔耳模型的文獻(xiàn)是緊接Morris后的1998年：“李薈元等：建立增生性瘢痕動物實驗?zāi)Ｐ?。第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1998”。而且二十年間相關(guān)中文資料總數(shù)為202篇，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過英文資料總數(shù)的74篇。當(dāng)英文資料在開頭五年間除首篇外還是空白時，中文資料已有7篇發(fā)表。

以上對比資料顯示：國內(nèi)學(xué)者對兔耳瘢痕模型的認(rèn)可和關(guān)注早于國外學(xué)者，而且引用和應(yīng)用于瘢痕研究的廣度也強(qiáng)于國外學(xué)者。

2關(guān)于兔耳瘢痕模型應(yīng)用的范圍

從檢索到的近300篇相關(guān)文獻(xiàn)資料分析，兔耳瘢痕模型的應(yīng)用范圍可大致分為如下幾個方面。

2.1應(yīng)用最多的是對瘢痕防治藥物效果的驗證：①傳統(tǒng)防治瘢痕藥物：如激素，5FU，干擾素，維甲酸，維拉帕米、透明質(zhì)酸、硅酮凝膠，肉毒素等；②中藥：鮮地龍，傣藥咪多領(lǐng)（云南琵琶），生肌玉紅，青蒿素、紅花、辣椒素脂質(zhì)體、丹參、苦參堿等；③生物制劑：重組人內(nèi)皮生長因子，雌激素，絲裂霉素c，抗炎因子等。

2.2物理性治療手段：激光、光動力學(xué)、放射治療，高壓氧，超聲，微晶削磨，B射線治，強(qiáng)功率OVA1照射等。

2.3基因?qū)用娴难芯浚捍鏊帉SOOTGF-β1 mRNA的表達(dá)影響，人參皂苷對TNF-α，IL-β表達(dá)的影響，PDL對TIMP1和MMP1表達(dá)的影響。反義TGF-β1、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、重組血管生成抑制劑AdMETH1、腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長因子β 3、反義結(jié)締組織生長因子、基因修飾BMSCs抑制增生TNF-α抑制、阻斷Notch信號、小分子蛋白多糖decorin等研究。

2.4病理學(xué)形態(tài)學(xué)觀察：反應(yīng)停對增生性瘢痕細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的觀察、馬兜鈴酸、己基可可堿、高頻超聲生物顯微鏡等研究資料。

2.5對兔耳模型改進(jìn)的研究。

以上資料提示：在創(chuàng)傷修復(fù)特別是病理瘢痕的研究中，兔耳模型是已被國內(nèi)外眾多學(xué)者認(rèn)可并樂于引用的動物模型，幾乎所有的瘢痕研究領(lǐng)域，兔耳模型已成為不可或缺的研究工具。

3最近五年國內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用兔耳瘢痕模進(jìn)行研究的成果

為了掌握兔耳瘢痕模型應(yīng)用的最新進(jìn)展，下面摘要介紹近五年來國內(nèi)外有關(guān)資料的內(nèi)容。國內(nèi)共查詢的相關(guān)文獻(xiàn)共202篇其中近五年（2013～2017）有63篇占全部資料的31%；英文資料74篇，近五年的共37篇，占總數(shù)的50%?；趪鴥?nèi)資料同仁很易于查閱，這里著重介紹國外學(xué)者5年內(nèi)發(fā)表的英文資料。endprint

2017年：Sari等在兔耳模型上注入二甲亞砜，查明對增生性瘢痕增生的影響。并與激素組，空白組進(jìn)行對照。發(fā)現(xiàn)DMSO組瘢痕表皮較厚于激素組，但比空白對照組要薄。通過對Ⅰ型膠原和Ⅰ/Ⅲ型膠原的比值以及TGF-β 1 mRNA等對比分析，得出結(jié)論是：在兔耳模型上的創(chuàng)面局部注入二甲亞風(fēng)，可以抑制兔耳增生性瘢痕的增生。Liu等分別將肉毒毒素A和皮質(zhì)激素注于兔耳創(chuàng)面，發(fā)現(xiàn)中等劑量的BTXA（1.0，1.5 IU）可以產(chǎn)生與注入皮質(zhì)激素相似的抑制瘢痕增生的功效。Cuo等利用兔耳模型查明：miRNA-21（miR-21）在兔耳瘢痕組織及其成纖維細(xì)胞中有高表達(dá)。當(dāng)使用其拮抗劑后，成纖維細(xì)胞的增長受到抑制，并可誘發(fā)成纖維細(xì)胞的凋亡，而且可以抑制纖維化相關(guān)因子基因的表達(dá)，如：COLIAl，COLIA2，fibroneotion。提示miW21拮抗劑有抑制兔耳瘢痕增生的作用。

2016年：Kwak等用抗血管內(nèi)皮生長因子Bevacizumab（Avastin）（貝伐單抗，阿瓦斯?。┩ㄟ^抑制血管內(nèi)皮生長因子可抑制兔耳瘢痕的增生。zhao等將Lumican注射于兔耳創(chuàng)面，證實通過抑制整合蛋白integrin-FAK信號通路，可抑制由FGF

刺激引發(fā)的瘢痕增生效應(yīng)，抑制成纖維胞的增殖并停滯于某細(xì)胞周期。重組的Lumican可以抑制細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，阻斷CTGF的作用和膠原的合成。Gong等在兔耳模型上應(yīng)用重組人內(nèi)皮抑素endostain抑制瘢痕增生，其機(jī)制是使瘢痕中的成纖維細(xì)胞停滯于細(xì)胞周期的G0/GI和G2/M期，并下調(diào)CyclinD1、CDK4和PCNA。故可作為抗瘢痕的新藥。Li等根據(jù)跨膜受體蛋白Notchl，Jaggedl和HeslD在增生性瘢痕中高表達(dá)，可導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞分化，并使纖維化因子TGF-β 1，TGF-β 2，胰島素樣生長因子，CTGF，VEGET及表皮生長因子等上調(diào)，促進(jìn)瘢痕增生。而DAPT（是Notch抑制劑）在兔耳可明顯抑制上述因子的表達(dá)?？墒雇枚：墼錾艿揭种?。故DAPT可作為抗瘢痕的制劑。

2015年：Fang等將仙人掌提取液噴于兔耳創(chuàng)面，并另用鹽水對照，證實在術(shù)后22，29和54d，用免疫組化，rt-PCR進(jìn)行組織學(xué)，Ⅰ、Ⅲ型膠原，MMPI的檢測。結(jié)果：鹽水組的兔耳瘢痕增生明顯，Ⅰ型膠原含量在仙人掌組較低，而Ⅲ型膠原則高于鹽水組；MMPI治療組高于鹽水組。結(jié)論：仙人掌提取液通過抑制Ⅰ型膠原增加Ⅲ型膠原和使MMPI升高而產(chǎn)生抗瘢痕的效應(yīng)。Li等基于在HS及HSFB中有多藥阻抗相關(guān)蛋白l MRPl（Multidrug resistance-associated protein 1）的高表達(dá)，而位相分析co looalization（MRP1和6-SMA）在Hs中升高。當(dāng)在增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中敲除MRP1時，可以明顯下調(diào)Ⅲ型膠原和o-SMA的表達(dá)。提示：下調(diào)MRP1有抑制瘢痕的效果。Zhang等查明：將脂肪干細(xì)胞注于兔耳創(chuàng)面可減輕瘢痕的增生，其作用機(jī)制是，脂肪干細(xì)胞通過減少a-SMA及Ⅰ型膠原基因的表達(dá)，以及使膠原纖維排列的有序所致。

2014年：Wang等查明，光動力學(xué)療法Photodynamic therapy（PDT），可通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，增加MMPs對TIMP的比率。使瘢痕中成纖維細(xì)胞老化并使膠原降解，從而抑制兔耳瘢痕的增生。

2013年：Hu等報道，已知CCN2（一種多細(xì)胞蛋白）在增生性瘢痕形成中起重要作用，這是由于CCN2誘發(fā)的a SMA和Ⅰ型膠原在人的HSFB中高表達(dá)所致。本文作者觀察了MAPKs（絲裂源激活蛋白激酶）對CCN2的作用。并在兔耳模型上證實：細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）c-Jun N-terminal kinase（JNK），可明顯抑制CCN2誘發(fā)的o-SMA和Ⅰ型膠原在HSFB中的表達(dá)，從而抑制兔耳瘢痕的增生。

4對瘢痕研究動物模型的總體評價與對更佳實驗?zāi)Ｐ偷钠谕?/p>

綜上所述，兔耳瘢痕模型問世二十年，已獲得國內(nèi)外學(xué)者的認(rèn)可，并且已有眾多國內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用并取得了大量有價值的學(xué)術(shù)成果，已經(jīng)成為瘢痕研究不可或缺的重要實驗工具。然而兔耳模型目前還只能在增生性瘢痕范圍應(yīng)用，而作為病理瘢痕最難以對付的對象一瘢痕疙瘩一還無法從兔耳模型上獲益，因為事至今日在兔耳模型上，還無法引發(fā)與人類瘢痕疙瘩相似的病理改變。這不能不說是一項重大的缺憾！希望同道們在認(rèn)可兔耳增生瘢痕模型之時，爭取有由動物身體產(chǎn)生的瘢痕疙瘩模型早日問世！

[收稿日期]2017-06-05

編輯/賀艷梅endprint