細(xì)胞黏附因子1在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的表達(dá)及臨床意義

麥艷芬，錢懷萍，胡淑娟，陳仰新

佛山市第五人民醫(yī)院1婦產(chǎn)科， 2病理科 廣東 佛山 528211

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）是指有活性的子宮內(nèi)膜細(xì)胞種植在子宮內(nèi)膜以外的位置而形成[1-2]。子宮內(nèi)膜異位種植后發(fā)生異位增殖生長被認(rèn)為是子宮內(nèi)膜異位癥的主要發(fā)生機(jī)制[3]。子宮內(nèi)膜異位生長雖然被視作一種良性增殖，但與惡性腫瘤一樣極具有超強(qiáng)的侵襲浸潤能力，子宮內(nèi)膜的異位組織可侵襲至腹膜、卵巢和直腸陰道隔等部位[4]，子宮內(nèi)膜異位增殖的分子生物學(xué)基礎(chǔ)很可能與眾多的惡性腫瘤侵襲浸潤相同。子宮內(nèi)膜的異位生長病變伴隨著體內(nèi)多種調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)水平的變化，探討子宮內(nèi)膜組織發(fā)生異位生長和浸潤侵襲的內(nèi)在分子機(jī)制對臨床的治療和預(yù)后都有非常重要的意義。有研究認(rèn)為MALAT1是與EMs發(fā)生、發(fā)展可能相關(guān)的一種基因[5]，另有研究發(fā)現(xiàn)EMs患者的同源框A10基因表達(dá)量低于正常，這可能與子宮內(nèi)膜容受性減低及子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展具有關(guān)系[6]。除此之外，Importin蛋白[7]、MDM2蛋白[8]以及NGF因子[9]等均被認(rèn)為與EMs的發(fā)生發(fā)展有一定相關(guān)性。在EMs的發(fā)生發(fā)展的過程中，必然有多種基因共同調(diào)控，在與眾多腫瘤促進(jìn)基因相比，最近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞粘附分子1（CADM1）基因是一種腫瘤抑制基因[10-11]。在多種腫瘤組織與癌旁組織CADM1表達(dá)水平對比實(shí)驗(yàn)中，均有CADM1表達(dá)下調(diào)的結(jié)論得出，CADM1的失活或者表達(dá)下調(diào)可能是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲、浸潤行為的影響因素之一[12-13]。本研究旨在探討CADM1與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生及發(fā)展的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年6～12月在我院治療的子宮內(nèi)膜異位患者45例，其中卵巢型21例，腹膜型24例，患者年齡27～41歲（36.5±3.2歲）。選取同期在我院進(jìn)行治療的未發(fā)生子宮內(nèi)膜異位的其他患者30例作為對照組，患者年齡31～43歲（37.4±2.9歲），兩組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 入選及排除標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者月經(jīng)周期表現(xiàn)正常；（2）年齡＜50歲；（3）符合卵巢型及腹膜型子宮內(nèi)膜異位癥診斷標(biāo)準(zhǔn)；（4）對照組患者自愿參與病理檢測。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）多囊卵巢綜合征患者；（2）甲狀腺疾病和糖尿病患者；（3）腫瘤患者。本研究經(jīng)過我院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.3 研究方法

收集45例子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位組織和在位組織以及30例子宮內(nèi)膜正?；颊叩淖訉m內(nèi)膜組織進(jìn)行病理切片機(jī)檢查；利用SABC法進(jìn)行免疫組化染色，進(jìn)行染色效果評價和CADM1陽性率結(jié)果分析，CADM1和Abcam多克隆抗體均購自美國Santa Cruz，SABC三步法試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺（DAB）購自武漢博士德生物工程有限公司；利用Western blotting印跡法考察不同組織中CADM1蛋白的相對表達(dá)量。

1.4 染色方法及效果評價

本研究采用鏈霉親和素-生物素復(fù)合物（SABC）法進(jìn)行免疫組化分析。對不同來源子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行免疫組化染色后，需對染色強(qiáng)度和陽性率進(jìn)行分析，用以評價CADM1的表達(dá)水平。對組織切片進(jìn)行染色后，置于顯微鏡（Olympus）下觀察并進(jìn)行拍照，本研究采用的圖像分析系統(tǒng)為HMIAS-2000型全自動彩色圖像分析系統(tǒng)。CADM1蛋白表達(dá)于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜中，因此染色結(jié)果中細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒則作為陽性結(jié)果，對染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)定為無色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。采用染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比乘積計(jì)量陽性情況，乘積≥2分為免疫組織化學(xué)陽性，＜2分為陰性。陽性細(xì)胞百分比：高倍鏡下（×400）按照隨機(jī)選取每張3切片5個視野觀察細(xì)胞，每個視野500個細(xì)胞，根據(jù)計(jì)算陽性細(xì)胞所占百分比：陰性為0分，陽性細(xì)胞＜10%為1分，陽性細(xì)胞10%～50%為2分，陽性細(xì)胞＞50%為3分。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS21.0 軟件，進(jìn)行t檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種內(nèi)膜組織的免疫組化染色結(jié)果

CADM1的陽性染色結(jié)果主要表現(xiàn)為在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)成功染色的顆粒（圖1），CADM1在異位內(nèi)膜組織中的染色強(qiáng)度明顯低于在位內(nèi)膜組織染色強(qiáng)度，在位內(nèi)膜組織的染色強(qiáng)度又明顯低于正常內(nèi)膜組織的染色強(qiáng)度。

2.2 3種內(nèi)膜組織染色陽性率結(jié)果

采用染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比乘積計(jì)量陽性情況：乘積≥2分為免疫組織化學(xué)陽性，＜2分為陰性，結(jié)果如表1。

2.3 Western blotting法檢測CADM1的表達(dá)

異位組織中CADM1表達(dá)水平灰度值為19.331±2.239，在位組織中CADM表達(dá)水平灰度值為46.789±3.941，正常組織中CADM1表達(dá)水平灰度值為63.487±2.651，異位組織中CADM1的表達(dá)水平低于在位組織和正常組織（P＜0.05），在位組織中CADM1的表達(dá)水平低于正常組織（P＜0.05）。

表1 CADM1在不同內(nèi)膜組織中染色陽性率結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥是一種與雌性激素有關(guān)的疾病，主要表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜良性增殖組織的異位生長[14]。做為一種育齡婦女常見婦科疾病，子宮內(nèi)膜異位發(fā)生部位主要包括腹膜、卵巢和直腸陰道隔等。痛經(jīng)、慢性盆腔炎、不育或者性交困難是子宮內(nèi)膜異位癥的主要癥狀，這些癥狀的發(fā)生大大的降低了患病婦女的生活質(zhì)量[15]。子宮內(nèi)膜異位組織與子宮內(nèi)膜正常組織在組織形態(tài)結(jié)構(gòu)特征是具有很大的相似性，但仍在以下幾個方面具有一定差異：相關(guān)基因和蛋白質(zhì)表達(dá)、類固醇和細(xì)胞因子的合成和響應(yīng)、免疫組件、粘附分子和蛋白水解酶等[16]。

多項(xiàng)研究證明CADM1在癌變組織或者其他疾病組織中因?yàn)閱幼拥母叨燃谆鴮?dǎo)致其表達(dá)減少或者或者缺失，從而進(jìn)一步影響了癌變組織細(xì)胞的侵襲和浸潤特性和能力，CADM1在肝細(xì)胞肝癌組織中的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織（41.7%vs58.33%）[17]，研究認(rèn)為CADM1與肝細(xì)胞肝癌患者年齡、組織分型無關(guān)而與臨床分期有關(guān)。CADM1在結(jié)直腸癌組織中具有維持癌變組織粘附作用且能夠組織腸上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)變的功能，研究表明結(jié)直腸癌組織的CADM1蛋白陽性表達(dá)率僅有25.7%，同時正常結(jié)直腸組織的陽性表達(dá)率高達(dá)80%，CADM1表達(dá)下調(diào)可能是結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的原因之一[18]。本研究顯示子宮內(nèi)膜異位組織中CADM1陽性表達(dá)率僅為37.78%，與正常組織93.33%相比，顯著降低。CADM1作為一種細(xì)胞粘附因子，表達(dá)下調(diào)使得細(xì)胞的轉(zhuǎn)移或者異位生長變得更為容易。在其他如口腔鱗狀細(xì)胞癌組織[19]、卵巢癌組織[20]、食管鱗癌組織[21]以及骨肉瘤組織[22]中的均有CADM1表達(dá)下調(diào)的相關(guān)研究。

為了進(jìn)一步深入研究異位組織與在位組織的差異性，以及與正常子宮內(nèi)膜組織的差異性，本研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中的CADM1的表達(dá)量明顯低于正常內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞，這體現(xiàn)了CADM1與異位內(nèi)膜中的表達(dá)下調(diào)或者失活與異位組織發(fā)生種植后的生長發(fā)展的相關(guān)性。進(jìn)一步研究，在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜組織之間CADM1之間存在的顯著差異，表明發(fā)生子宮內(nèi)膜異位癥的在位內(nèi)膜組織仍具有較強(qiáng)的侵襲和浸潤能力。

本研究通過免疫組化法分析了子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織中CADM1表達(dá)水平的變化，結(jié)果表明，CADM1在異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜中的表達(dá)下調(diào)與子宮內(nèi)膜異位組織發(fā)生侵襲和浸潤具有密切相關(guān)性，臨床上對其表達(dá)水平進(jìn)行分析有助于判斷子宮內(nèi)膜異位癥的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后評估。

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