冠心病患者血漿Jagged1與VEGF的關(guān)系

劉存存，楊國(guó)杰，李棟博，李國(guó)棟，秦 鵬，魏子寒

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年心血管科 鄭州 450052

Jagged1是存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜上的一種單次跨膜蛋白，是Notch受體的主要配體之一，它在神經(jīng)、肌肉、血管等的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用。近年來(lái)Jagged1在血管新生方面的作用越來(lái)越受到重視。已有研究[1]表明,Jagged1通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達(dá)及其介導(dǎo)的Notch信號(hào)通路，刺激腫瘤新生血管形成,從而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移。研究[2-3]發(fā)現(xiàn)血管新生是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)斑塊形成最重要的病理特征之一，在A(yíng)S斑塊形成過(guò)程中VEGF可通過(guò)促進(jìn)斑塊內(nèi)小血管形成，從而促進(jìn)斑塊的生長(zhǎng)并影響斑塊的穩(wěn)定性，進(jìn)而導(dǎo)致心血管事件的發(fā)生。近年來(lái)研究[4]發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)通路與AS關(guān)系密切，且Jagged1與AS有關(guān)，但Jagged1在A(yíng)S中的作用及具體機(jī)制尚不清楚。為了進(jìn)一步研究Jagged1參與AS形成的機(jī)制，本研究測(cè)定了不同類(lèi)型冠心病患者血漿Jagged1和VEGF水平變化，探討二者之間的關(guān)系以及臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象收集2016年2至10月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年心血管科住院的胸痛待查患者115例，均行冠狀動(dòng)脈造影。造影結(jié)果顯示85例患者存在至少1支冠狀動(dòng)脈直徑狹窄≥50%，其中男49例，女36例，年齡(58.9±9.2)歲。85例患者根據(jù)癥狀分為穩(wěn)定性心絞痛(stable angina pectoris，SAP)30例、不穩(wěn)定性心絞痛(unstable angina pectoris，UAP)29例和急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)26例。冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2015年ESC《非ST段抬高型急性冠脈綜合征管理指南》[5]，排除嚴(yán)重瓣膜病、心肌病、腦血管疾病、腎功能不全、免疫系統(tǒng)疾病、血液病、急性感染、嚴(yán)重肝病、惡性腫瘤患者。30例患者造影結(jié)果未見(jiàn)明顯異常(對(duì)照組)，心電圖、胸部DR、心臟彩超、腹部彩超及肝腎功能等血液學(xué)檢查均正常；男13例，女17例，年齡(57.4±7.5)歲。詳細(xì)記錄患者性別、年齡、糖尿病病史、高血壓病史、血脂、超敏C反應(yīng)蛋白等資料。

1.2標(biāo)本收集所有患者入院后第2天清晨抽取肘靜脈血5 mL于抗凝管中，30 min內(nèi)1 000g離心15 min，并將血漿轉(zhuǎn)移至PP管，置于-80 ℃冰箱保存。

1.3血漿Jagged1和VEGF水平檢測(cè)Jagged1檢測(cè)試劑盒及VEGF試劑盒均由上海卡努生物科技有限公司提供，具體操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0處理數(shù)據(jù)。4組間基線(xiàn)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)或方差分析，血漿Jagged1及VEGF水平的比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，冠心病組血漿Jagged1與VEGF水平的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 4組臨床基線(xiàn)資料比較各冠心病組與對(duì)照組相比，年齡、性別、高血壓史和糖尿病史分布較為均衡。冠心病組超敏C反應(yīng)蛋白(Hs-CRP)水平偏高，總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平無(wú)明顯變化。見(jiàn)表1。

表1 4組基線(xiàn)資料比較

*：與對(duì)照組相比，P<0.05

2.2 4組血漿Jagged1及VEGF水平比較與對(duì)照組相比，血漿Jagged1及VEGF水平在SAP組、UAP組、AMI組均升高，且AMI組>UAP組>SAP組。見(jiàn)表2。

表2 4組血漿Jagged1和VEGF 水平比較

#：組間兩兩比較，P均<0.05

2.3冠心病患者血漿Jagged1與VEGF水平的關(guān)系冠心病患者血漿Jagged1與VEGF水平呈正相關(guān)(r=0.708，P<0.01) 。

3 討論

新生血管是AS斑塊形成過(guò)程中最重要的病理特征之一，斑塊內(nèi)的新生血管僅由內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，管腔明顯擴(kuò)張，管壁薄，滲透性高，脂質(zhì)及炎性因子易進(jìn)入斑塊，引起斑塊破裂、出血，加速斑塊的不穩(wěn)定性，進(jìn)而導(dǎo)致急性血管事件的發(fā)生[6]。

臨床研究[7]發(fā)現(xiàn)斑塊內(nèi)血管新生與急性冠脈綜合征密切相關(guān)。VEGF是目前發(fā)現(xiàn)作用最強(qiáng)、特異性最高的促血管生長(zhǎng)因子。在正常生理狀態(tài)下，VEGF呈低水平表達(dá)，作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，在維持內(nèi)皮細(xì)胞損傷后修復(fù)中發(fā)揮重要作用。但在各種炎癥因子、細(xì)胞因子、缺氧等多種因素刺激下內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞分泌大量VEGF,參與炎癥、腫瘤、缺氧等疾病發(fā)生和發(fā)展的過(guò)程。已有研究[8]發(fā)現(xiàn)VEGF與血管新生密切相關(guān)。Van der Veken等[9]發(fā)現(xiàn)接受VEGF抑制劑注射的小鼠冠狀動(dòng)脈斑塊內(nèi)的新生血管減少50%，穩(wěn)定性增加，AS的進(jìn)展受抑。Er?en等[10]發(fā)現(xiàn)心梗后斑塊內(nèi)VEGF分泌增加，促進(jìn)斑塊內(nèi)血管新生和內(nèi)膜增厚，加速AS發(fā)展?？梢?jiàn)VEGF在冠心病的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。

Notch信號(hào)通路是生物體進(jìn)化過(guò)程中高度保守的一種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在機(jī)體內(nèi)有4種Notch受體(Notch1～4)以及5 種配體(DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1和Jagged2)。相鄰細(xì)胞通過(guò)受體與配體結(jié)合激活Notch 信號(hào)通路，參與細(xì)胞、組織、器官的發(fā)育、分化[11]。Jagged1是哺乳動(dòng)物中第一個(gè)被證實(shí)的配體，廣泛表達(dá)于胎盤(pán)、肌肉、腎臟、心臟等組織或器官，在誘導(dǎo)血管新生、成骨細(xì)胞分化、T淋巴細(xì)胞分化、神經(jīng)細(xì)胞分化[12]等過(guò)程中起重要作用。近年來(lái)，Jagged1在血管形成中的作用逐漸受到重視。Kwon等[13]發(fā)現(xiàn)Jagged1在血管形成時(shí)廣泛表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞，其缺乏會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖能力減弱，以及缺血組織血管再生能力的明顯降低。Zeng等[14]對(duì)腫瘤細(xì)胞間Notch1、Jagged1和VEGF 的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果表明Jagged1可通過(guò)與激活的Notch1結(jié)合, 增加VEGF活性并促進(jìn)其表達(dá), 誘導(dǎo)腫瘤新生血管形成。Jagged1還可以通過(guò)拮抗DLL4/Notch信號(hào)通路正反饋調(diào)節(jié)VEGFR-2的轉(zhuǎn)錄，影響腫瘤血管的密度和分支[15]。另有研究[4]發(fā)現(xiàn)Notch1受體與AS的形成密切相關(guān)，在小鼠AS斑塊組織切片中，Notch1受體在巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)或脂質(zhì)豐富部位高表達(dá)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)Jagged1在ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞表面表達(dá)上調(diào)，提示Jagged1可能與AS有關(guān)。

本研究中，冠心病患者血漿Jagged1、VEGF水平均高于對(duì)照組，且AMI組>UAP組>SAP組；此外，冠心病患者血漿Jagged1與 VEGF水平呈正相關(guān)；提示Jagged1與AS形成密切相關(guān)，且血漿Jagged1水平與冠心病的嚴(yán)重程度有關(guān)。因此有理由推測(cè)Jagged1可能通過(guò)其介導(dǎo)的Notch信號(hào)通路調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)，通過(guò)血管生長(zhǎng)調(diào)節(jié)等途徑參與AS斑塊的形成，進(jìn)而參與冠心病的發(fā)生和發(fā)展。

綜上所述，Jagged1與冠心病密切相關(guān)，但其具體機(jī)制還需進(jìn)一步探討。另外，由于本研究樣本量較小，還需擴(kuò)大樣本量進(jìn)行更多相關(guān)性研究。雖然有關(guān)Jagged1在A(yíng)S形成過(guò)程中的具體分子機(jī)制仍然不清楚，但隨著研究的深入，Jagged1有可能成為新一類(lèi)抗AS及血管生成的治療靶點(diǎn)。

致謝：感謝楊國(guó)杰、李棟博、李國(guó)棟、秦鵬老師在文獻(xiàn)閱讀、研究設(shè)計(jì)與實(shí)施及論文寫(xiě)作中給予的幫助與指導(dǎo)。

[1] BENEDITO R,ROCA C,S?RENSEN I,et al.The notch ligands Dll4 and Jagged1 have opposing effects on angiogenesis[J].Cell,2009,137(6):1124

[2] MARSCH E,SLUIMER JC,DAEMEN MJ.Hypoxia in atherosclerosis and inflammation[J].Curr Opin Lipidol,2013,24(5):393

[3] CAMARéC,PUCELLE M,NGRE-SALVAYRE A,et al.Angiogenesis in the atherosclerotic plaque[J].Redox Biol,2017,12:18

[4] 付文波.Notch信號(hào)通路在巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化中的作用及機(jī)制研究[D].武漢:華中科技大學(xué),2012.

[5] BARRABES J.Comments on the 2015 ESC Guidelines for the Management of Acute Coronary Syndromes in Patients Presenting Without Persistent ST-segment Elevation[J].Rev Esp Cardiol,2015,68(12):1061

[6] DUNMORE BJ,MCCARTHY MJ,NAYLOR AR,et al.Carotid plaque instability and ischemic symptoms are linked to immaturity of microvessels within plaques[J].J Vasc Surg,2007,45(1):155

[7] 莫顯剛,陳慶偉,蔣金.動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)新生微血管的研究進(jìn)展[J].中華心血管病雜志,2010,38(12):1139

[8] 熊鹿,黃晶,周大燕,等.高壓噴射載VEGF165、bFGF凝膠促缺血心肌血管新生的實(shí)驗(yàn)研究[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2010,35(5):499

[9] VAN DER VEKEN B,DE MEYER G,MARTINET W.Inhibition of VEGF receptor signaling attenuates intraplaque angiogenesis and plaque destabilization in a mouse model of advanced atherosclerosis[J].Atherosclerosis,2017,263:e33

[11]SCHWEISGUTH F.Regulation of notch signaling activity[J].Curr Biol,2004,14(3):R129

[12]何金婷.Notch 通路在腦缺血損傷中的作用及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究[D].長(zhǎng)春:吉林大學(xué),2012.

[13]KWON SM,EGUCHI M,WADA M,et al.Specific Jagged-1 signal from bone marrow microenvironment is required for endothelial progenitor cell development for neovascularization[J].Circulation,2008,118(2):157

[14]ZENG Q,LI S,CHEPEHA DB,et al.Crosstalk between tumor and endothelial cells promotes tumor angiogenesis by MAPK activation of Notch signaling[J].Cancer Cell,2005,8(1):13

[15]PEDROSA AR,TRINDADE A,CARVALHO C,et al.Endothelial Jagged1 promotes solid tumor growth through both pro-angiogenic and angiocrine functions[J].Oncotarget,2015,6(27):24404