豬偽狂犬病的診治實例及免疫體會

寧慧波，陳同煜，李 聰

[1.海博萊生物科技咨詢（北京）有限公司，北京 海淀 100086；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東 泰安 271000]

豬偽狂犬病（Swine Pseudorabies,PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的多種家畜及野生動物共患的一種急性熱性傳染病。不同年齡、品種的豬均易感。主要通過呼吸道、生殖道、胎盤、乳汁、氣溶膠等途徑感染傳播。該病主要導(dǎo)致種豬嚴重繁殖障礙，仔豬神經(jīng)癥狀、腹瀉及高死亡率，生長肥育豬呼吸道病綜合征；以非化膿性腦膜炎及神經(jīng)節(jié)炎、內(nèi)臟實質(zhì)器官壞死和梗死為特征[1]。我國于20世紀40年代末在貓中首次發(fā)現(xiàn)偽狂犬病病毒，60年代初在豬群中也出現(xiàn)了該病毒流行。自2010年后，該病從北向南席卷全國，給養(yǎng)殖業(yè)造成很大的經(jīng)濟損失[2]。目前對該病的防控尤為重要，需采取綜合性的防治措施。

1 豬場發(fā)病情況

2016年10月，山東某規(guī)模化豬場（1 000頭）大批母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、早產(chǎn)現(xiàn)象，發(fā)病率達24%。哺乳仔豬表現(xiàn)神經(jīng)癥狀、口吐白沫，有的呈犬坐式，快速死亡；仔豬發(fā)病率達65%，病死率達40%。采取多種治療措施，療效不佳。2016年11月，筆者應(yīng)邀到現(xiàn)場進行診治，了解豬場病情已經(jīng)持續(xù)1個月，無特效療法，經(jīng)了解該豬場對肥豬的疫苗免疫意識淡薄。

2 流行病學(xué)

該場為了擴大規(guī)模，于2016年6月開始陸續(xù)引種，為了降低生產(chǎn)成本，母豬配種前只免疫1次豬偽狂犬病疫苗，仔豬在45日齡左右進行偽狂犬病疫苗免疫。妊娠70~90 d的母豬陸續(xù)發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)情況。哺乳仔豬在3~15日齡開始發(fā)病，很快在整個豬群蔓延傳播，發(fā)病率高，病程短，仔豬死亡率快速升高。同時，場內(nèi)飼養(yǎng)的狗也陸續(xù)死亡。

3 臨床癥狀

妊娠母豬流產(chǎn)（圖1）；哺乳仔豬精神沉郁，眼瞼腫脹（圖2）；盲目走動、站立不穩(wěn)、轉(zhuǎn)圈；呈犬坐式（圖3）；口吐白沫（圖4）；保育豬及肥豬無明顯臨床癥狀。

圖1 妊娠母豬流產(chǎn)

圖2 哺乳仔豬精神沉郁，眼瞼腫脹

圖3 呈犬坐式

圖4 口吐白沫

4 剖檢變化

大腦表面充血、出血（圖5），肺充血、水腫（圖6），肝臟表面有黃白色壞死灶（圖7），腎臟表面有針尖大出血點（圖8）。

圖5 大腦表面充血、出血

圖6 肺充血、水腫

圖7 肝臟表面有黃白色壞死灶

圖8 腎臟表面有針尖大出血點

5 實驗室診斷

選取病豬的腦、扁桃體、肝臟、淋巴結(jié)等組織，分別取0.5 g左右加入2 mL左右PBS混合研磨至勻漿狀態(tài)，反復(fù)凍融3次，進行豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、藍耳病病毒及圓環(huán)病毒2型的RT-PCR檢測；采取剖檢豬的腦、腎臟、肺臟、淋巴結(jié)、肝臟及扁桃體，使用10%中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)制作石蠟切片，HE染色，鏡檢。同時對種豬及各階段仔豬進行血液采集（表1），采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測豬偽狂犬病gE抗體，所使用的抗體檢測試劑盒均為西班牙海博萊公司的相關(guān)產(chǎn)品。

表1 各階段豬采血情況

5.1 PCR檢測檢測結(jié)果

通過對送檢病料的RT-PCR的檢測發(fā)現(xiàn)，豬偽狂犬病病毒為陽性，擴增條帶大小為300 bp左右，豬瘟病毒、圓環(huán)病毒2型、藍耳病病毒均為陰性（圖 9）。

圖9 送檢組織病原檢測結(jié)果

5.2 病理組織學(xué)檢測結(jié)果

通過顯微鏡觀察，可見腦膜下充血，小動脈及毛細血管周圍形成管套，膠質(zhì)細胞增生，出現(xiàn)典型噬神經(jīng)元現(xiàn)象（圖10-A和圖10-B）；腎間質(zhì)出血，腎小管上皮細胞變性、壞死、脫落（圖11）；肺臟呈典型間質(zhì)性肺炎病變，淋巴細胞浸潤，纖維細胞增生，間質(zhì)增寬，部分區(qū)域?qū)嵸|(zhì)充血、出血（圖12）；肝臟小葉結(jié)構(gòu)不清，肝細胞變性、壞死、脫落，增生的結(jié)締組織將原肝組織分割包圍形成大小不等、形態(tài)各異的小葉（圖13-A和圖13-B）。

圖10 豬腦病理切片

圖11 豬腎臟病理切片

圖12 豬肺臟病理切片

圖13 豬肝臟病理切片

5.3 ELISA檢測結(jié)果

ELISA檢測發(fā)現(xiàn)種豬及商品豬群偽狂犬病野毒感染比例非常高（圖14），豬場偽狂犬病感染壓力較大。結(jié)合流行情況、臨床癥狀、病理剖檢及實驗室檢測確定該場為PRV感染發(fā)病。

圖14 偽狂犬病gE抗體陽性率

6 防治方案

6.1 緊急免疫接種

對全場公豬及經(jīng)產(chǎn)母豬肌注免疫偽狂犬病活疫苗喜可凈（GN）1頭份（使用A3稀釋液），間隔3周后再加強免疫1次。所有10日齡內(nèi)仔豬噴鼻免疫GN 1頭份（使用紅色稀釋液），10日齡以上哺乳仔豬及保育豬全部肌注免疫GN 1頭份（使用A3稀釋液）。緊急接種后將偽狂犬病免疫程序調(diào)整為：后備母豬22和26周齡分別肌注免疫GN 1頭份（使用A3稀釋液）；公豬及經(jīng)產(chǎn)母豬每3個月肌注免疫GN 1頭份（使用A3稀釋液）；仔豬1日齡噴鼻免疫GN 1頭份（使用紅色稀釋液），10周齡及14周齡分別肌注免疫GN 1頭份（使用A3稀釋液）。

6.2 隔離封鎖、嚴格消毒

將發(fā)病母豬立即與假設(shè)健康母豬分開欄舍隔離飼養(yǎng)、對體況差不能吃奶、呼吸道癥狀明顯、有神經(jīng)癥狀、無治療價值的仔豬立即淘汰；產(chǎn)房嚴格按全進全出操作，對清空產(chǎn)房采用氯制劑、堿制劑等消毒藥品輪換進行消毒，工作服、鞋、帽等用消毒液浸泡消毒。

6.3 加強生物安全

對病死動物尸體、流產(chǎn)物、死胎及排泄物等做無害化處理；嚴格限制外來人員和車輛進入場內(nèi)，禁止場內(nèi)工作人員串舍；嚴禁犬、貓等動物進入豬場，同時加強滅鼠工作。

6.4 提高飼養(yǎng)管理

做好豬舍內(nèi)糞污清理工作；加強豬舍通風換氣、保持豬舍干燥；降低飼養(yǎng)密度，消除各方面的應(yīng)激因素；適當增加母豬的飼喂量，飼料添加電解質(zhì)多維、葡萄糖等營養(yǎng)抗病因子，保證豬群營養(yǎng)平衡需求。

6.5 病豬對癥治療

為了控制豬偽狂犬病引起的繼發(fā)感染，對發(fā)病豬舍母豬飼料添加70%阿莫西林400 g/t、包被恩諾沙星300 g/t、電解質(zhì)多維2 kg/t，葡萄糖5 kg/t，連用5 d；并對發(fā)病母豬肌注頭孢噻呋鈉4mg/kg體重，每日1次，連用3 d；同時輔助使用黃芪多糖注射液15 mL/頭，每日1次，連用3 d，以增強非特異性免疫功能。

6.6 跟蹤調(diào)查

采取上述綜合措施1周后，豬群發(fā)病開始減少，加強免疫偽狂犬病疫苗1周后，豬群基本恢復(fù)正常生產(chǎn)。3個月后再次檢測種豬及各階段仔豬偽狂犬病gE抗體，結(jié)果顯示偽狂犬病野毒陽性率較之前明顯降低（圖15），說明處理方案取得了較好的效果。

圖15 采取措施后偽狂犬病gE抗體陽性率

7 診治體會

7.1 不良后備母豬的引入是豬偽狂犬病不穩(wěn)定的重要因素

在豬場中，為了保證豬群正常生產(chǎn)，因此要不斷引入后備母豬。持續(xù)不斷的引種增加了豬偽狂犬病的感染風險，造成豬偽狂犬病的散發(fā)或者流行。該豬場分多次引入后備母豬，最終豬場開始發(fā)病。故引入后備母豬時應(yīng)做好偽狂犬病野毒的檢測，堅決杜絕偽狂犬病野毒陽性豬的引入，運輸途中減少應(yīng)激，到場后進行嚴格充分的隔離，確保引種后豬群的整體穩(wěn)定性。

7.2 種豬群長期帶毒增加仔豬感染幾率

目前母豬帶毒普遍存在，帶毒的妊娠母豬可通過胎盤感染胎兒，帶毒的泌乳母豬可通過乳汁感染哺乳仔豬[3]；公豬帶毒危害更大，配種時可通過接觸污染的陰道黏膜或精液等途徑感染[4]。其次種豬長期帶毒排毒，增加了豬群通過鼻對鼻直接接觸經(jīng)呼吸道水平感染幾率。因此，要對種豬群進行定期監(jiān)測，及時淘汰陽性豬只。

7.3 易感動物多增加了偽狂犬病防控的難度

PRV的自然宿主是豬，同時也可以感染犬、貓、牛、綿羊、鼠等多種動物[3]。豬是PRV感染后唯一可以存活的物種，其他動物感染后均以死亡告終。本場飼養(yǎng)的犬增加了PRV傳播的幾率，所以豬場應(yīng)嚴禁犬、貓等動物進入，同時加強滅鼠工作。

7.4 免疫忽視是豬偽狂犬病不穩(wěn)定的誘因

近幾年，隨著豬病復(fù)雜化，人們更多地關(guān)注圓環(huán)病毒病、藍耳病、流行性腹瀉、口蹄疫，而忽視偽狂犬病防控。很多豬場自認為是偽狂犬病陰性場，因此放松了該病的免疫。對于后備豬只免疫1次就進行配種，商品豬只免疫1次，且免疫時間過早，忽視仔豬噴鼻免疫及肥豬階段的加強免疫，造成哺乳仔豬早期感染發(fā)病及中大豬出現(xiàn)免疫空白而成為野毒感染陽性豬，導(dǎo)致生長肥育豬與種豬之間形成循環(huán)感染，增加了該病的不穩(wěn)定性。

7.5 優(yōu)質(zhì)的疫苗及優(yōu)秀的方案是成功防控豬偽狂犬病的保障

豬用疫苗的質(zhì)量通常從3個方面進行評價。

7.5.1 毒株 毒株的好壞主要由毒株的安全性、免疫原性和穩(wěn)定性所決定。國際上主流豬偽狂犬病疫苗為Bartha K61株。該毒株是自然弱毒株，安全性高、免疫原性好、無毒力返強的風險。Bartha K61株gE基因缺失疫苗[5]，可以區(qū)別野毒和疫苗毒，有利于豬場偽狂犬病的凈化。

7.5.2 效價 偽狂犬病疫苗效價單位是TCID50（組織培養(yǎng)半數(shù)感染量）或CCID50（細胞培養(yǎng)半數(shù)感染量）。我國偽狂犬病疫苗效價標準為103.7TCID50/頭份，國際優(yōu)秀疫苗效價一般不低于105.0TCID50/頭份。疫苗中有效抗原含量高，可以刺激機體產(chǎn)生更高的保護性抗體，從而更有效地阻斷病毒的循環(huán)感染。

7.5.3 佐劑 疫苗佐劑一般分為油質(zhì)佐劑和水質(zhì)佐劑：油質(zhì)佐劑注射應(yīng)激大，產(chǎn)生抗體較慢，抗體維持時間長；水質(zhì)佐劑好抽易打，應(yīng)激小，抗體產(chǎn)生快，但抗體維持時間短。A3佐劑是一種新型佐劑，其主要成分為樹脂和左旋咪唑，不含油成分，注射應(yīng)激非常小。其與疫苗同時作用，能夠更好地誘導(dǎo)細胞免疫與體液免疫，從而使得疫苗作用持久有效。

面對當前偽狂犬病感染壓力，既要選擇優(yōu)質(zhì)的疫苗，也應(yīng)因地制宜地采取優(yōu)秀的免疫方案，從而為豬偽狂犬病的防控提供保障。

8 小結(jié)

目前偽狂犬病已成為養(yǎng)豬業(yè)中最主要的疾病之一，盡管研究表明PRV基因發(fā)生了一定的變異[6-7]，但是與經(jīng)典毒株屬于同一血清型。現(xiàn)有經(jīng)典毒株疫苗依然能為豬提供良好的免疫保護[8-9]。作為養(yǎng)豬生產(chǎn)者，應(yīng)該利用現(xiàn)有的手段去解決問題，而不應(yīng)過多地糾結(jié)病毒變異問題。偽狂犬病的防控及凈化是一套系統(tǒng)工程，我們要提高防控意識，切實做好生物安全、確保后備豬gE陰性、制定合理免疫程序等相關(guān)工作。

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