蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬血液生理及免疫功能的影響

王 留，郭全海，劉 鑫

（商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物工程系，河南 商丘 476000）

仔豬飼養(yǎng)管理是養(yǎng)豬生產(chǎn)中重要的環(huán)節(jié)之一，仔豬生理狀態(tài)和免疫功能強(qiáng)弱是仔豬飼養(yǎng)管理效果的直接反映，決定著仔豬的生長發(fā)育速度和抗病能力，仔豬飼養(yǎng)管理的好壞直接影響?zhàn)B豬生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益。改善仔豬的生理狀態(tài)和提高仔豬的免疫功能是養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)追求的目標(biāo)之一，在養(yǎng)豬生產(chǎn)實(shí)踐中，大棗多糖、黃芪多糖、香菇多糖等多糖類物質(zhì)及果糖、甘露糖等寡糖類物質(zhì)用于提高仔豬的生理狀態(tài)和免疫功能已有大量的研究和報(bào)道[1-3]。蜂膠是一種具有多種生物活性的物質(zhì)，蜂膠中所含的黃酮類、黃酮醇類和雙氫黃酮類等生物活性物質(zhì)具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用[4-6]。本試驗(yàn)在飲水中添加不同濃度的蜂膠乙醇提取物，測(cè)定斷奶仔豬血液生理數(shù)值，仔豬血清 α-腫瘤壞死因子（TNF-α）、γ-干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）等血清免疫因子含量和外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，以評(píng)價(jià)蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬血液生理及免疫功能的影響，旨在揭示蜂膠乙醇提取物提高機(jī)體免疫功能的機(jī)理，為蜂膠產(chǎn)品的開發(fā)和在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

真空采血管，BC-5800血細(xì)胞分析儀，TDL-5型臺(tái)式離心機(jī)，754型紫外可見分光光度計(jì)。α-腫瘤壞死因子（TNF-α）、γ-干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）檢測(cè)試劑盒均購自上海藍(lán)基生物科技有限公司。蜂膠乙醇提取物，商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物工程系藥理實(shí)驗(yàn)室自制，詳見參考文獻(xiàn)[6]。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

30頭28日齡健康、體重相近的杜長大三元雜種仔豬隨機(jī)分成空白對(duì)照組、試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組，每組10頭，各組均飼喂基礎(chǔ)飼糧。試驗(yàn)期間，試驗(yàn)1、2組飲水中分別添加終濃度為1、2 g/L的蜂膠乙醇提取物，自由飲水；空白對(duì)照組正常飲水。試驗(yàn)期28 d。試驗(yàn)于2017年6月3—30日在商丘牧原科技有限公司養(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行，斷奶仔豬采用高床飼養(yǎng)，保健與免疫按該場(chǎng)年度保健計(jì)劃與免疫程序進(jìn)行。

1.3 血樣采集與處理

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)每頭豬前腔靜脈采血10 mL，分裝成兩管，其中一管肝素鈉抗凝，用于血液生理指標(biāo)和外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，另一管不作抗凝處理，室溫靜置3 h自然凝固，4 000 r/min離心10 min分離血清，-20℃凍存，用于血清免疫因子的測(cè)定。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)與數(shù)據(jù)處理

全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定仔豬血液生理指標(biāo)，包括紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、白細(xì)胞數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、血紅蛋白含量（HGB）。采用MTT法[7]測(cè)定外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10按照ELISA檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行方差分析，P＜0.05判定為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬血液生理指標(biāo)的影響

試驗(yàn)結(jié)果顯示（表1），蜂膠乙醇提取物能夠提高試驗(yàn)組斷奶仔豬血液中紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、白細(xì)胞數(shù)（WBC）、血紅蛋白含量（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT），但與空白對(duì)照組相比血液生理指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05）。

表1 蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬血液生理指標(biāo)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、血清免疫因子的影響

2.2 蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響見表1。試驗(yàn)組斷奶仔豬外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率隨蜂膠乙醇提取物添加濃度的增加而隨之提高。飲水中添加2 g/L的蜂膠乙醇提取物的試驗(yàn)組斷奶仔豬外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率與空白對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）。

2.3 蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬血清免疫因子的影響

由表1可知，蜂膠乙醇提取物能夠提高斷奶仔豬血清免疫因子的含量。飲水中添加1 g/L的蜂膠乙醇提取物的試驗(yàn)組斷奶仔豬血清免疫因子的含量與空白對(duì)照組相比有所提高，但是差異不顯著（P＞0.05）；飲水中添加2 g/L的蜂膠乙醇提取物的試驗(yàn)組斷奶仔豬血清免疫因子的含量與空白對(duì)照組相比明顯提高，差異顯著（P＜0.05）。

3 討論與分析

3.1 蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬血液生理指標(biāo)的影響

動(dòng)物血液生理指標(biāo)正常與否是動(dòng)物有機(jī)體生命代謝、生理功能、抗病能力及健康狀況的內(nèi)在反應(yīng)，各血液生理指標(biāo)的變化表明動(dòng)物機(jī)體生理代謝與健康狀況發(fā)生了改變。動(dòng)物臨床中測(cè)定的動(dòng)物生理指標(biāo)主要包括紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞壓積、血紅蛋白含量。

紅細(xì)胞是血細(xì)胞中數(shù)量最多一種細(xì)胞，紅細(xì)胞不僅是血液運(yùn)輸氧氣和二氧化碳的載體，紅細(xì)胞還具有識(shí)別抗原、提呈抗原、識(shí)別自我和非自我、清除免疫復(fù)合物、增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬功能等重要的免疫功能[8]。白細(xì)胞是血細(xì)胞中一大類免疫細(xì)胞和吞噬細(xì)胞類群，白細(xì)胞中的嗜中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞是血細(xì)胞中的主要吞噬性細(xì)胞，是動(dòng)物有機(jī)體炎癥反應(yīng)和天然免疫的第一道防線，抵御病原微生物等異物入侵動(dòng)物有機(jī)體。白細(xì)胞中的單核巨噬細(xì)胞能夠吞噬、加工、提呈抗原，具有傳遞免疫信息和產(chǎn)生免疫因子的作用。動(dòng)物血液中白細(xì)胞數(shù)量和組成比例直接影響著動(dòng)物的免疫功能和健康狀況，當(dāng)動(dòng)物機(jī)體受到病原微生物感染或其他因素造成動(dòng)物代謝與生理功能發(fā)生改變時(shí)，白細(xì)胞數(shù)量和組成比例都會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化[9]。血紅蛋白是紅細(xì)胞內(nèi)的主要功能性蛋白，是紅細(xì)胞運(yùn)輸氧氣和二氧化碳的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)血紅蛋白還是血液內(nèi)的緩沖物質(zhì)，能夠維持血液內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定。

蜂膠是蜜蜂在采制花粉和釀制蜂蜜過程中形成的一種天然產(chǎn)物，蜂膠中的黃酮類、黃酮醇類和雙氫黃酮類物質(zhì)具有多種生物學(xué)活性。本試驗(yàn)在斷奶仔豬飲水中分別添加1、2 g/L的蜂膠乙醇提取物，結(jié)果表明蜂膠乙醇提取物能夠提高試驗(yàn)組斷奶仔豬血液的紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞壓積等血液生理指標(biāo)，說明蜂膠乙醇提取物能夠提高斷奶仔豬的血液生理功能和改善仔豬的健康狀態(tài)。

3.2 蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

細(xì)胞免疫是由細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞吞噬被感染的細(xì)胞以清除被感染細(xì)胞內(nèi)的病原體。體液免疫是由B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)，B淋巴細(xì)胞在輔助T細(xì)胞誘導(dǎo)下產(chǎn)生抗體，以清除細(xì)胞外感染的病原體。外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率是指外周血淋巴細(xì)胞在體外受到非特異性有絲分裂原或特異性抗原刺激后，細(xì)胞體積增大、代謝旺盛、蛋白質(zhì)和核酸合成增加，轉(zhuǎn)變?yōu)槟苓M(jìn)行分裂的淋巴母細(xì)胞。外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低反映動(dòng)物機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱，可作為測(cè)定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一。據(jù)報(bào)道，蜂膠提取物能夠增加小鼠脾臟、胸腺等免疫器官指數(shù)，刺激小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化，提高小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，改善小鼠的免疫功能[10-11]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，斷奶仔豬飲水中添加2 g/L的蜂膠乙醇提取物能夠顯著提高仔豬外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，并且外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率隨蜂膠乙醇提取物添加濃度的增加而提高。

3.3 蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬血清免疫因子的影響

細(xì)胞因子是由機(jī)體的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)或炎性反應(yīng)中的活性細(xì)胞在抗原或有絲分裂原的刺激下產(chǎn)生的一大類具有廣泛生物學(xué)活性的多肽、蛋白質(zhì)或糖蛋白等異質(zhì)性調(diào)節(jié)因子，是免疫細(xì)胞之間的信息傳遞分子，在體內(nèi)能激活和調(diào)節(jié)免疫活性細(xì)胞，對(duì)機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答發(fā)揮重要的調(diào)控作用。IL-1β是由活化的單核巨噬細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子，具有調(diào)節(jié)免疫、促進(jìn)炎癥和殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。IL-1β調(diào)節(jié)免疫功能的作用機(jī)制可能是在抗原或有絲分裂原存在下通過刺激T淋巴細(xì)胞增殖、分化和分泌IL-2，并協(xié)同IL-2促進(jìn)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞的產(chǎn)生，激活自然殺傷細(xì)胞。IL-2是由活化的輔助性T細(xì)胞分泌的一種具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子，能夠促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分泌TNF-α等其他細(xì)胞因子，促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞的增殖與分化，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。IL-6是由活化的T淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等分泌的一種細(xì)胞因子，能夠促進(jìn)B淋巴細(xì)胞分化與成熟，并促進(jìn)漿細(xì)胞分泌抗體。IFN-γ是由單核巨噬細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子，能夠促進(jìn)輔助性T細(xì)胞的分型轉(zhuǎn)化和提高中性粒細(xì)胞的吞噬能力。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，斷奶仔豬飲水中添加蜂膠乙醇提取物能夠提高仔豬血清免疫因子的含量，并且蜂膠乙醇提取物對(duì)斷奶仔豬血清免疫因子含量的影響呈劑量依賴關(guān)系。IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ等細(xì)胞因子可作用于機(jī)體內(nèi)免疫活性細(xì)胞，或促進(jìn)其分化與增殖，或加強(qiáng)其活性與功能，或影響細(xì)胞內(nèi)生物活性分子的表達(dá)與分泌，從而促進(jìn)機(jī)體免疫應(yīng)答，提高機(jī)體的免疫功能。

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