肺熱普清散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究＊

尼瑪潘多 ，何珊珊 ，張 韻 ，萬 軍 ，譚 睿

(1．西藏自治區(qū)食品藥品檢驗所，西藏 拉薩 850000;2．西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 成都 610031)

肺熱普清散(藏藥名洛才更賽)為藏藥復(fù)方制劑，由紅花、丁香、木香、安息香等14味藏藥組方，具有清肺泄熱、消炎的作用，用于小兒肺炎、流行性感冒、風(fēng)熱、癘熱。本試驗中采用薄層色譜(TLC)法對方中主要藥味的定性鑒別進(jìn)行了研究，建立了簡便、易行、重復(fù)性好的鑒別方法，并采用高效液相色譜(HPLC)法考察了其藥效指標(biāo)成分羥基紅花黃色素A的測定條件，旨在為肺熱普清散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－10A型高效液相色譜儀，包括2個LC－10A泵、DGμ－12A在線脫氣機、SPD－10A檢測器、SIL－10A自動進(jìn)樣器、CTO－10A柱溫箱;CLASS－VP5．03色譜工作站。色譜柱為Kromasil 5u C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm)。甲醇(色譜純，批號為20110402，成都市科龍化工試劑廠);水為超純水(自制)，其他試劑為分析純。羥基紅花黃色素A標(biāo)準(zhǔn)品(批號為111637－200502)，紅花對照藥材(批號為120907－200609)，降香對照藥材(批號為120952－201007)，去氫木香內(nèi)酯(批號為 111525－200505)、木香烴內(nèi)酯對照品(批號為111524－200503)，均由中國藥品生物制品檢定所提供。肺熱普清散(迪慶藏醫(yī)院，批號為20120919;神猴藥業(yè)有限公司，批號為20120608，20120609，20120610;青海藏醫(yī)院，批號為20110908)。硅膠G、硅膠GF254和硅膠H(薄層層析硅膠，青島海洋化工有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2．1 薄層色譜鑒別

紅花[1－4]:取5批樣品粉末各10 g，分別加80%丙酮50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25 mL使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次25 mL，棄去乙酸乙酯液，水溶液加正丁醇振搖提取2次，每次25 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺紅花的陰性樣品約10 g、紅花對照藥材1 g，同法制成缺紅花的陰性對照品溶液和紅花對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB)]試驗，吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇(7∶2∶3∶0．4)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液色譜相應(yīng)位置上無此斑點(見圖1A)。

降香[5]:取5批樣品粉末各5 g，加75%乙醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取缺降香的陰性樣品約5 g、降香對照藥材1 g，同法制成缺降香的陰性對照品溶液和降香對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄VI B)]試驗，吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚－乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液與無水乙醇(1∶9)的混合溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。除20120919批樣品外，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液色譜相應(yīng)位置上無此斑點(見圖1B)。由迪慶藏醫(yī)院提供的批號為20120919的樣品，未呈現(xiàn)與對照藥材一致的特征斑點，建議該醫(yī)院對降香藥材進(jìn)行嚴(yán)格的檢查，確保藥材合格。

圖1 紅花及降香薄層色譜鑒別圖

木香[6－8]:取5批樣品粉末各5 g，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取缺木香的陰性樣品約5 g，同法制成缺木香的陰性對照品溶液。另取去氫木香內(nèi)酯對照品、木香烴內(nèi)酯對照品，分別加甲醇分別制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄 VI B)]試驗，吸取上述溶液各 5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－甲酸乙酯－甲酸(32∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點，陰性對照品溶液色譜則無此斑點(見圖 2)。

圖2 木香薄層色譜鑒別圖

2．2 HPLC法色譜條件考察

檢測波長:取羥基紅花黃色素A對照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣分析，結(jié)果見圖3。由紫外光譜圖可見，羥基紅花黃色素A的最大吸收波長為403 nm，故選取403 nm作為檢測波長。

圖3 紫外光譜圖

柱溫:分別考察了柱溫為25，30，35，40℃時的色譜行為，結(jié)果見表1。不同柱溫條件下的色譜峰峰形均對稱，分離度均較好，理論板數(shù)均較高，故柱溫對色譜峰影響不大。

表1 柱溫考察結(jié)果

流動相:根據(jù)查閱的文獻(xiàn)[9－11]，分別考察了甲醇 － 乙腈 －0．7% 磷酸(26 ∶2 ∶72)、甲醇 －0．5% 磷酸(26 ∶74)和甲醇 －0．1%磷酸(30∶70)。通過比較各流動相組成條件下羥基紅花黃色素A的對稱因子及理論板數(shù)優(yōu)選流動相，結(jié)果見表2?？梢娂状迹?．1%磷酸(30∶70)作為流動相時分離度較好、峰形較好，故選擇其流動相。

表2 流動相考察結(jié)果

色譜條件確定:綜合上述考察結(jié)果，樣品中羥基紅花黃色素A的色譜分析條件為，色譜柱為Kromasil5u C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)，流動相為甲醇 －0．1%磷酸(30 ∶70)，檢測波長 403 nm，柱溫 30 ℃，流速 1．0 mL/min。

3 討論

肺熱普清散原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無定性鑒別項。本試驗對方中紅花、降香、木香進(jìn)行了定性鑒別，結(jié)果顯示，所建立的方法、定性鑒別指標(biāo)專屬性強、重復(fù)性和穩(wěn)定性好，可作為肺熱普清散定性鑒別的依據(jù)，也可作為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的一部分，具有實際應(yīng)用意義。

選用兩根不同廠家的色譜柱，即Kromasil 5u C18柱(250 mm×4．6 mm，5μm)和 Gemini 5u C18柱(250 mm ×4．6mm，5μm)，按擬訂的色譜條件分別對羥基紅花黃色素A對照品溶液和供試品溶液進(jìn)行分析，結(jié)果都能得到良好的分離。因此，本試驗得出的HPLC色譜條件可作為研究肺熱普清散定量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)，為進(jìn)一步的定量方法研究、使其標(biāo)準(zhǔn)全面提高打下了基礎(chǔ)。

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