假芝功效研究進(jìn)展

張一帆 謝意珍，2 楊小兵*

（1廣東省微生物研究所/省部共建華南應(yīng)用微生物國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510700；2廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司，廣東廣州510700）

假芝是假芝屬下的Amauroderma rugosum的中文名稱[1]，也常用于靈芝科（Ganodermataceae）下假芝屬（Amauroderma）所有種的統(tǒng)稱（下文除非給出學(xué)名，否則指代后者）。據(jù)報(bào)道，假芝屬下的皺蓋假芝（A.rude）具有消炎、利尿功效；假芝（A.rugosum）具有消炎、利尿、益胃和抗腫瘤功效[2]；而漆黑假芝（A.exile）則有消炎止血、祛瘀消積功效[3]。目前國內(nèi)外對假芝功效開展了一定研究，改善了以往民間用藥式的簡單描述、成分和作用機(jī)理不明確等情況。

1 假芝分類學(xué)地位簡述

假芝屬由美國真菌學(xué)家William Alphonso Murrill于1905年建立，指定模式種為A.schomburgkii（=Fomes regulicolor）。假芝屬真菌的一般特征為：菌蓋形狀類似靈芝，但多數(shù)種缺乏漆樣光澤；菌蓋表面顏色有淡黃色、褐色和黑色等；菌蓋表面皺、有毛或光滑；菌肉有革質(zhì)、栓質(zhì)和木質(zhì)等；菌柄有或無；子實(shí)體菌絲系統(tǒng)多為三體型（生殖菌絲、骨架菌絲、纏繞菌絲）；孢子圓球形或橢圓體形，具有雙層孢子壁，外壁光滑或帶附屬物，內(nèi)壁為柱狀等附屬結(jié)構(gòu)。子實(shí)體著生在腐木、根或活樹上，多發(fā)于埋在土中的根；屬于白腐菌；分布于熱帶、亞熱帶地區(qū)[4-5]，在我國，則多分布于廣東、廣西、云南、海南島等省份。部分假芝子實(shí)體受傷后傷口呈現(xiàn)血紅色，固有“血芝”一稱。而血芝一般用作皺蓋假芝商品名，但此特征在假芝（A.rugosum）上同樣出現(xiàn)，因此筆者認(rèn)為此名指代不嚴(yán)格。

在 Index Fungorum（www.indexfungorum.org）中搜索屬名Amauroderma詞條，目前共發(fā)現(xiàn)134個(gè)記錄（含變種），而其中可能存在同物異名種。由于分類學(xué)家所持的概念不同，標(biāo)本采集量不同、以及新種又不斷被發(fā)現(xiàn)等因素，不同地區(qū)對本區(qū)域內(nèi)假芝屬中種數(shù)量的報(bào)道不盡相同。例如Costa-Rezende等基于巴西中部采集的假芝標(biāo)本，建立了巴西境內(nèi)27種假芝的分類檢索表[6]；而Gomes-Silva等則基于巴西北部、東北部地區(qū)采集的標(biāo)本，建立了巴西28種假芝的檢索表[7]。我國假芝屬的分類學(xué)研究始于鄧叔群?！吨袊婢眷`芝科》（第一版）中記載假芝20種。而后Li等通過形態(tài)學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育分析，指出其中存在同物異名情況[8]；而Song等則在Li等的研究基礎(chǔ)上報(bào)道了一個(gè)新種[9]?？梢婋S著鑒定技術(shù)的發(fā)展，假芝屬的種數(shù)還將不斷變化。

2 假芝的功效研究

目前在Web of Science數(shù)據(jù)庫中檢索到假芝功效相關(guān)的文獻(xiàn)中，按研究對象分，皺蓋假芝（A.rude）和假芝（A.rugosum）是主要的研究對象；按材料來源分，則子實(shí)體多于發(fā)酵物（含發(fā)酵液或菌絲體）；按功效類型分，則免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、神經(jīng)調(diào)節(jié)占大多數(shù)。筆者將以功效為分類依據(jù)，對假芝功效研究進(jìn)行歸納和評述。

2.1 假芝的免疫調(diào)節(jié)作用

在炎癥刺激方面。A.camerarium通過液體靜置培養(yǎng)菌絲體后，在其培養(yǎng)液中分離得一種分子量為12 kD的胞外蛋白質(zhì)，這種蛋白質(zhì)能刺激人中性粒細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子一氧化氮（NO）。該蛋白質(zhì)和人中性粒細(xì)胞、病原體三者共培養(yǎng)時(shí)，NO生成量更是高于無病原體三倍[10]。皺蓋假芝（A.rude）子實(shí)體的粗多糖能促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO，呈正向濃度效應(yīng)，且產(chǎn)生量還明顯高于LPS[11]，通過分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定，發(fā)現(xiàn)兩種分子量在4～6 kD的雜多糖可能是刺激NO產(chǎn)生的效應(yīng)物。

在消炎作用方面。假芝（A.rugosum）液體培養(yǎng)所得菌絲體的乙醇提取組分，在巨噬細(xì)胞系RAW264.7中，具有抑制LPS誘導(dǎo)NO產(chǎn)生的作用。通過進(jìn)一步分離和鑒定發(fā)現(xiàn)，乙醇組分中的亞油酸乙酯和麥角甾醇可能是抑制作用效應(yīng)物[12]。假芝（A.rugosum）子實(shí)體乙醇提取物作用于RAW264.7時(shí)，使受LPS誘導(dǎo)的一氧化氮合酶（iNOs）和腫瘤壞死因子（TNF-α）表達(dá)量顯著下調(diào)，而促進(jìn)消炎的細(xì)胞因子IL-10表達(dá)顯著上調(diào)[13]?；诂F(xiàn)有資料，具有免疫調(diào)節(jié)的假芝組分物質(zhì)無明顯的細(xì)胞毒性，但未有足夠證據(jù)說明，水溶性物質(zhì)僅為促炎作用物質(zhì)，有機(jī)相提取的物質(zhì)僅為消炎作用物質(zhì)。假芝中免疫調(diào)節(jié)的物質(zhì)可能是更為系統(tǒng)性的調(diào)節(jié)物，例如前述的假芝多糖，還能使脾淋巴增殖、巨噬細(xì)胞吞噬能力增加；在動(dòng)物試驗(yàn)中多項(xiàng)免疫力提高指標(biāo)呈陽性反應(yīng)[11]。另外，假芝的來源也對其免疫調(diào)節(jié)作用產(chǎn)生顯著的影響，例如前述的假芝（A.rugosum）子實(shí)體乙醇提取物中，野生子實(shí)體和人工栽培子實(shí)體的提取物，在相同濃度下對多個(gè)免疫調(diào)節(jié)指標(biāo)的響應(yīng)上存在顯著差別[13]。

2.2 假芝的抗腫瘤功效

較系統(tǒng)的假芝抗腫瘤研究，首見于2013年焦春偉等對皺蓋假芝（A.rude）子實(shí)體水提物的研究。該研究通過人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87、人肝癌細(xì)胞系Hep G2、宮頸癌細(xì)胞系Hela、人前列腺腫瘤細(xì)胞系DU145、人肺癌細(xì)胞系BEAS-2B等13個(gè)腫瘤細(xì)胞系的體外增殖抑制實(shí)驗(yàn)，篩選了皺蓋假芝、靈芝（Ganoderma lucidum）、云芝（Coriolus versicolor）、蛹蟲草（Cordyceps militaris）、香菇（Lentinula edodes）、美味牛肝菌（Boletus edulis）、翹鱗肉齒菌（Sarcodon imbricatus）和灰樹花（Grifola frondosa）等13種常見食藥用菌的抗腫瘤活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，皺蓋假芝對13種受試腫瘤細(xì)胞株的抑殺能力幾乎都顯著優(yōu)于13種受試食藥用菌。研究還證明，通過腹腔注射皺蓋假芝水提物能促使荷瘤（4T1）小鼠腫瘤塊坍縮[14]。同年Shan X H等比較了假芝、黑芝、紫芝、赤芝、桑黃和樺褐孔菌等9個(gè)多孔菌（原文未給出明確學(xué)名）菌株子實(shí)體水提物，對人激素依賴性前列腺癌細(xì)胞系LN-CaP和肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的抑殺能力。結(jié)果顯示假芝水提物在同一濃度下，對LN-CaP的抑殺能力僅次于樺褐孔菌而優(yōu)于其他七個(gè)多孔菌菌株，而對A549的抑殺能力較其他八種多孔菌要弱[15]。值得注意的是，以上兩項(xiàng)研究中腫瘤細(xì)胞抑殺實(shí)驗(yàn)所用的提取物濃度范圍在數(shù)量級上存在差異，可能由于提取方法和菌種差異所致。除水相提取物外，假芝的有機(jī)相提取物也被發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤功效。皺蓋假芝的乙醇提取物及其中的氯仿餾分對四種人乳腺癌細(xì)胞系具有呈濃度效應(yīng)的增殖抑制、轉(zhuǎn)移抑制和侵染抑制作用[16]。

在皺蓋假芝水提物中，起抑制腫瘤作用的成分主要是多糖[11，14]；而在其有機(jī)相提取物中，則發(fā)現(xiàn)麥角甾醇、6-脫氧巴西紅厚殼素、巴西紅厚殼素、3β-羥基-7α-甲氧基-8（14），22E-二烯-5α，6α-環(huán)氧-麥角甾具有抑制腫瘤細(xì)胞活性[16-17]。在廈門假芝（A.amoiensis）中，則發(fā)現(xiàn) 4-hydroxy-17-methylincisterol、過氧麥角甾醇和Jacareubin等六種化合物表現(xiàn)出抑制腫瘤活性[18]。

在抗腫瘤機(jī)理方面，以皺蓋假芝多糖為例，它可抑制腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期蛋白c-myc、Ki67和血管內(nèi)皮因子CD34的表達(dá)，而上調(diào)荷瘤小鼠體內(nèi)促炎因子IL-2和TNF-α表達(dá)[11，14]，表明這種多糖可能通過促使細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管生成以及刺激免疫系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)抑制體內(nèi)腫瘤生長；再以皺蓋假芝中的麥角甾醇為例，發(fā)現(xiàn)麥角甾醇處理腫瘤細(xì)胞后，細(xì)胞表面誘導(dǎo)凋亡因子Fas及其配體Fas L、凋亡線粒體通路中Bim蛋白以及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白FoxO3的表達(dá)上調(diào)[16]，表明假芝中的麥角甾醇可能是通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)抑制腫瘤生長。在假芝抗腫瘤成分安全性發(fā)面，皺蓋假芝多糖通過急性和亞慢性毒理實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明皺蓋假芝多糖對動(dòng)物體無明顯毒性[19]。從皺蓋假芝子實(shí)體分離得到的麥角甾醇組分對成纖細(xì)胞系（正常細(xì)胞）NIH3T3在0～150 μM無明顯細(xì)胞毒性，而商品化的麥角甾醇在相同的濃度范圍內(nèi)卻表現(xiàn)出對正常細(xì)胞較強(qiáng)的細(xì)胞毒性。

2.3 假芝的抗氧化功效

假芝在體內(nèi)外都具有較強(qiáng)的抗氧化活性。在研究抗氧化活性部位方面，一株采集自馬來西亞Royal Belum國家公園的未定名假芝（Amaurodermasp.），其不同類型的提取物（乙醇提取物、甲醇提取物和水提物）對DPPH自由基清除能力存在差異，清除能力最強(qiáng)的活性部位在其子實(shí)體的乙醇提取物中[20]。而在菌株之間橫向活性比較中，采集自馬來西亞Mount Singai山區(qū)的假芝（A.rugosum），其乙醇提取物的DPPH自由基清除能力大幅度強(qiáng)于同區(qū)域采集到的紅貝菌（Earliella scabrosa）、黃柄小孔菌（Microporus xanthopus）、玫瑰擬層孔菌（Fomitopsis dochmia）、鳳尾菇（Lentinus sajor-caju）和絨毛栓菌（Trametes pubescens）[21]。一株在廣東省廣州市白云山采集到的假芝（A.rugosum），其水提物的ABTS?+自由基清除率和羥基自由基抑制率在3.33～6.67 mg/mL濃度內(nèi)明顯高于赤芝（Ganoderma lingzhi）和紫芝（Ganoderma sinense）[22]。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，皺蓋假芝的香菇菌柄發(fā)酵物水提成分灌胃小鼠后，小鼠血清中的超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性比對照組顯著提高[23]。說明皺蓋假芝可增強(qiáng)生物對體內(nèi)活性氧類物質(zhì)的清除能力。

2.4 假芝的神經(jīng)元保護(hù)功效

在對靈芝（Ganoderma lucidum）的研究中曾發(fā)現(xiàn)，靈芝糙米發(fā)酵物的水提物具有抑制乙酰膽堿酯酶（AChE）活性的能力，在與陽性藥Tacrine濃度相近時(shí)，兩者抑制能力相近[24]。AchE抑制劑是目前公認(rèn)的神經(jīng)元退行性疾病治療藥開發(fā)的篩選源。假芝作為靈芝的親緣物種，有研究者認(rèn)為其中具有AChE抑制物開發(fā)的可能性。在二孢假芝（A.subresinosum）和廈門假芝中都分離得到具有AChE抑制活性的麥角甾烷類化合物[25-26]，作用濃度為50～100 μM，抑制強(qiáng)度為20%～46%。雖然Tacrine在較低的濃度（約0.3 μM）即可達(dá)到50%抑制強(qiáng)度，但Tacrine的肝毒性較大?？梢娛褂眉僦ヌ崛∥锟赡馨踩愿摺?/p>

2.5 假芝的其他功效研究

皺蓋假芝具有延緩果蠅衰老的功效。進(jìn)食含有5%皺蓋假芝菌絲體水提物的雄性果蠅，其壽命與對照相比，延長幅度超過30%[27]；皺蓋假芝的香蒲發(fā)酵物水提成分更能使雌、雄果蠅壽命比對照延長都超過40%[28]。皺蓋假芝還具有抗病毒的功效。以單純皰疹病毒（HSV）感染非洲綠猴腎細(xì)胞（Vero）為模型，發(fā)現(xiàn)皺蓋假芝子實(shí)體水提物具有較強(qiáng)的抗感染功效（IC50為 107 μg/mL），對細(xì)胞本身毒性較低（CC50為1477 μg/mL）。通過在感染進(jìn)程中選取不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行加樣研究抗感染效果，發(fā)現(xiàn)皺蓋假芝水提物主要在感染前和感染早期對細(xì)胞起保護(hù)作用[29]。

3 小結(jié)

假芝（A.rugosum）被認(rèn)為是《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載的“六芝”中的“黑芝”[30]，有著悠久的民間藥用歷史。鑒于我國假芝資源豐富、分布廣泛，筆者相信古代對于“黑芝”的理解可能是包括假芝屬內(nèi)的多個(gè)種。另一方面，近年研究發(fā)現(xiàn)了假芝的多種生理功能，并且部分活性也優(yōu)于多種已被熟知的食藥用菌，證明假芝具有開發(fā)價(jià)值。而至今假芝尚未見正式的開發(fā)利用和產(chǎn)品轉(zhuǎn)化，筆者認(rèn)為主要有幾點(diǎn)原因：其一，是同科內(nèi)的赤芝、紫芝在公眾認(rèn)同上有壓倒性優(yōu)勢，大量研究資源的流入形成可觀的科研成果和產(chǎn)品產(chǎn)出；其二，目前國內(nèi)外對假芝的功效研究多數(shù)關(guān)注于“發(fā)現(xiàn)現(xiàn)象”，而“究其機(jī)理”的研究尚且鳳毛麟角；其三，盡管有足夠長的應(yīng)用歷史，但缺乏更詳盡的安全性報(bào)告；其四，政策上假芝未被納入食品、藥品或保健品中。對假芝功效研究深入，假芝的栽培試驗(yàn)報(bào)告[31]、化學(xué)成分分離鑒定[17，32]、活性物質(zhì)積累[33]和提取的條件優(yōu)化[34-35]等研究也見報(bào)道，假芝開發(fā)利用的研究還將不斷地積累。